蒋日婷
- 作品数：12 被引量：16H指数：3
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- GCF2基因片段原核表达载体的构建及其表达
- 目的 构建肝癌相关抗原GCF2基因片断(323～1234 bp)原核表达重组质粒,并在大肠杆菌中表达。方法 提取人肝癌组织总RNA,通过逆转录酶合成cDNA；根据GenBank公布的GCF2基因cDNA序列设计引物,利用...
- 肖飞晁耐霞曾庆堂李日伦蒋日婷罗国容
- 关键词：原核表达
- GCF2基因片段原核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建肝癌相关抗原GCF2基因片断(323～1 234 bp)原核表达重组质粒。方法提取人肝癌组织总RNA,通过反转录酶合成cDNA;根据GenBank公布的GCF2基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出人GCF2基因片断(编号2-5a),将此片段连接在克隆载体pGEM-T上进行测序,通过酶切、连接将目的片断重组到原核表达载体pET-30a上。结果酶切电泳鉴定结果显示GCF2基因同源片段克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与GenBank中GCF2基因相应序列完全相符。结论获得了含人GCF2基因同源片段重组原核表达质粒pET-30a/GCF2-5a,为进一步表达和纯化GCF2基因片段重组蛋白奠定了基础。
- 肖飞晁耐霞曾庆堂黄健蒋日婷罗国容
- 关键词：原核表达
- 肿瘤相关抗原GC结合因子2 shRNA表达载体的构建及鉴定
- 2013年
- GC结合因子2（GC-binding factor 2, GCF2）是一种转录抑制因子, 因为能与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因启动子上富含GC的序列结合而得名。研究表明, GCF2可通过多种途径参与细胞增殖、 细胞周期调控及细胞凋亡等进程。GCF2广泛地高表达于肺癌A549细胞、 胃腺瘤AGS细胞及白血病K562细胞等人类多种肿瘤细胞, 并且发现GCF2在这些细胞中的高表达与肿瘤细胞增殖、 侵袭及肿瘤耐药等密切相关。RNA干扰（RNA interence, RNAi）可特异性地阻断靶基因表达, 是研究基因功能的有效技术。我们的前期研究表明, GCF2是一种肿瘤相关抗原, 在HepG2等肝癌细胞株中高表达[8]。本实验设计针对GCF2 mRNA的干扰序列, 并且与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo重组而构建重组质粒pGPU6/GFP/Neo-GCF2, 经酶切和测序鉴定后, 将该重组质粒转染肝癌细胞株HepG2, 以实现对GCF2表达的抑制, 为进一步研究GCF2对肝癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制奠定基础。
- 李金平晁耐霞蒋日婷马平陈德凤陈力吴博黄天明莫发荣罗国容
- 关键词：肝细胞癌质粒
- 肝癌相关抗原kinectin蛋白致敏的树突状细胞对T细胞增殖能力的检测
- 赵飞兰晁耐霞李日伦肖飞蒋日婷谢小薰罗国容
- 肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体制备、鉴定及初步应用被引量：5
- 2011年
- 目的制备本课题组报告的肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法以本课题组前期构建的人MBP-Kinectin融合片段重组质粒为基础,原核表达和亲和层析大量纯化MBP-Kinectin融合蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体;用间接ELISA法测定抗体效价,用Western blot鉴定抗体的特异性。同时用Kinectin多克隆抗体检测Kinectin在正常成人肝细胞HL-7702和人肝癌细胞株SMMC-7721内的表达。结果通过免疫新西兰兔获得抗Kinectin抗体,ELISA测定纯化的Kinectin抗体效价最高为1∶12 800,Western blot结果显示Kinectin抗体具有较好的特异性。免疫细胞化学和western blot检测发现Kinectin蛋白在肝癌细胞株内的表达显著高于正常成人肝细胞株。结论制备的抗Kinectin抗体具有较高的效价和特异性,能满足Western blot和免疫细胞化学检测Kinectin蛋白的要求,为进一步深入研究Kinectin在肝癌发生发展中的作用奠定基础。
- 晁耐霞肖飞蒋日婷黄天明赵飞兰曾庆堂李日伦谢小薰罗国容
- 关键词：多克隆抗体肝细胞癌肿瘤相关抗原KINECTIN
- 肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选被引量：7
- 2012年
- 目的筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株,为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的可能作用奠定基础。方法选择4种人肝癌细胞株(BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703)及1种成人正常肝细胞株(HL-7702),培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后,采用免疫细胞染色技术和Western blot的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株。结果免疫细胞染色显示,GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达。GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703的表达要强于正常肝细胞HL-7702,其中以BEL-7404的表达量最高。通过Western blot检测,BEL-7404的GCF2相对表达量为0.875±0.134,较其他细胞株高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BEL-7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高,可以作为下一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料。
- 蒋日婷晁耐霞马平李金平罗国容
- 关键词：肿瘤相关抗原肝癌蛋白表达
- 肿瘤相关抗原Kinectin蛋白在肝癌组织的表达及其在肝癌发生中的作用研究
- Kinectin蛋白位于内质网膜上,在细胞内主要作为Kinesin受体参与细胞内的囊泡转运及内质网形态的维持。本实验采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测了Kinectin在肝癌和相应的癌旁组织内mRNA和蛋...
- 晁耐霞罗国容吴春林赵飞兰肖飞蒋日婷黄天明曾庆堂李日伦谢小薰
- 肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体制备、鉴定及初步应用
- 晁耐霞肖飞蒋日婷赵飞兰曾庆堂谢小薰罗国容
- 肝癌相关抗原GCF2基因片段的原核表达及纯化
- 本实验提取人肝癌组织总RNA,通过逆转录酶合成cDNA;根据GenBank公布的GCF2基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出人GCF2基因片断(编号2—5a),将此片段连接在原核表达载体pET-30a上。将...
- 肖飞罗国容晁耐霞曾庆堂李日伦蒋日婷
- siRNA沉默GC结合因子2表达对BEL-7404细胞增殖和凋亡的影响被引量：6
- 2013年
- 目的 GC结合因子2(GC binding factor 2,GCF2)是一种转录抑制因子,能抑制富含GC序列启动子的基因转录。GCF2在BEL-7404等肝癌细胞株的高表达可能与肝癌的发生及发展有关。文中通过靶向GCF2的GCF2-siRNA序列沉默GCF2表达,观察GCF2对人肝癌细胞株BEL-7404增殖及凋亡的影响。方法将实验细胞分为GCF2 siRNA转染组(转染GCF2-siRNA)、阴性对照组(转染无关序列)、脂质体对照组(只加Lipofectamine 2000)、常规培养对照组(不加转染试剂和siRNA序列)共4组。使用Lipofectamine 2000将GCF2-siRNA转染BEL-7404细胞,Western blot检测转染后48 h GCF2蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8和AnnexinV/PI-FITC双染流式细胞术检测细胞增殖和凋亡变化。结果 GCF2-siRNA可有效下调GCF2表达、抑制BEL-7404细胞的增殖,细胞凋亡率增加。与各对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GCF2可促进肝癌细胞株BEL-7404的增殖,抑制该细胞凋亡,提示GCF2通过对肝癌细胞增殖和凋亡的影响参与肝癌的发生、发展。
- 李金平蒋日婷晁耐霞马平陈德凤陈力吴博莫发荣罗国容
- 关键词：肝细胞癌肿瘤相关抗原增殖凋亡
