袁慕云
- 作品数：39 被引量：132H指数：9
- 供职机构：广东检验检疫技术中心更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东出入境检验检疫局科技计划项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 基于TaqMan探针双重荧光PCR检测食品中肠道沙门氏菌和肠炎沙门氏菌被引量：9
- 2017年
- 建立基于TaqMan探针双重重实时荧光PCR检测肠道沙门氏菌(Salmonella enterica,SP)和肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis,SE)的方法。根据SP的aceA基因(Gen Bank:U43344.1)、肠炎沙门氏菌特异序列SEP(GenBank:AF370707.1),分别设计引物和探针,在ace A探针的5′端标记FAM和SEP探针的5′端标记VIC,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测方法。试验结果,58株29种不同血清型肠道沙门氏菌均扩增出ace A基因扩增曲线,SEP特异性地扩增出15株SE,而28种不同血清型沙门氏菌和17株变形杆菌等阴性对照株扩增结果均为阴性。ace A和SEP的双重荧光PCR扩增效率分别为100%和104%,R2分别为0.999和0.998,最低检测浓度分别达到280 cfu/m L和260 cfu/m L。建立的方法特异性好、灵敏度高,整个试验可在31 h完成,是快速检测SP和SE的有效方法,可用于食品中SP和SE的特异性检测。
- 袁慕云许龙岩刘二龙曹际娟陈碧玲
- 关键词：肠炎沙门氏菌TAQMAN探针食品
- 实时荧光PCR技术在沙门菌种间鉴别中的应用被引量：5
- 2017年
- 目的探讨用实时荧光PCR对沙门菌进行种间鉴别。方法根据猪霍乱沙门菌(Salmonella Choleraesuis,SC)和丙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi C,SP)的共有序列(Gen Bank:AE017220.1),伤寒沙门菌(Salmonella Typhi,ST;Gen Bank:NC_016832.1)和鸡伤寒沙门菌(Salmonella Gallinarum,SG;Gen Bank:HQ703462)的特异序列分别设计SCP、STP、SGP引物和Taq Man探针,在探针的5'端分别标记FAM、HEX、TET,建立基于Taq Man探针多重荧光PCR检测方法。同时,根据SC和SP差异序列(Gen Bank:CP000857)设计SPP引物和探针,在探针的5'端标记ROX,区分SC和SP。结果 SCP特异性扩增出25株SC和22株SP,STP和SGP分别扩增出31株ST和34株SG,而其他不同血清型沙门菌和非沙门菌扩增结果阴性。SPP扩增出22株SP,25株SC扩增结果阴性。扩增体系评价结果,SCP、STP、SGP和SPP扩增效率均在80%~100%,线性相关系数r2≥0.994。结论建立的方法特异性强、敏感性高,可用于SC、SP、ST、SG的种间鉴别。
- 袁慕云许龙岩柯碧霞刘二龙孙薇
- 关键词：实时荧光PCR猪霍乱沙门菌丙型副伤寒沙门菌伤寒沙门菌
- 副溶血性弧菌MPCR-DHPLC检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-Performance Liquid Chromatography,DHPLC)检测副溶血性弧菌的方法,并了解该菌携带毒力基因的情况。方法:根据副溶血性弧菌的毒力基因tdh、trh和种特异性基因toxR进行引物设计,以其单一PCR扩增产物在DHPLC出现的色谱峰作为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC的检测方法。结果:该方法能有效扩增副溶血性弧菌的tdh、trh和toxR基因,25株副溶血性弧菌的MPCR扩增产物经DHPLC分析所得的色谱峰在位置和峰型与标准色谱峰有很好的符合性,其他菌属的菌株均无特异性扩增,对模拟污染样品可正确检测,灵敏度达到1*103CFU/ml,特异性达到100%。结论:本文建立的MPCR-DHPLC方法可准确检测副溶血性弧菌,并了解该菌携带毒力基因的情况。
- 凌莉许龙岩袁慕云胡科锋陈碧玲焦红
- 关键词：副溶血性弧菌DHPLC
- 参加CNCA副溶血性弧菌检测能力验证结果分析
- 本实验室参加了2009年CNCA组织的食品微生物学副溶血性弧菌检测能力验证计划(CNCA-09-B06).对收到的四份冻干粉样品参照GB/T4789.7-2008标准,并结合VITEK、API和BAX Q7等鉴定系统进行...
- 刘静宇席静袁慕云
- 关键词：食品微生物学副溶血性弧菌
- 文献传递
- 基于TaqMan探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌被引量：11
- 2017年
- 目的建立基于Taq Man探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌的方法。方法根据甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)、乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B,SPB)、丙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi C,SPC)和伤寒沙门菌(Salmonella typhi,ST)的特异序列分别设计引物SPAP、SPBP、SPCP和STP,在探针的5'端分别标记TET、ROX、FAM、HEX,建立基于Taq Man探针四重荧光PCR检测方法。结果 SPAP、SPBP、SPCP和STP分别扩增出5株SPA、4株SPB、7株SPC和11株ST,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。SPAP、SPBP、SPCP和STP扩增效率分别为84.5%、101.8%、92.4%和90.9%,线性相关系数(R^2)分别为0.996、0.975、0.996和0.984。结论建立的方法特异性高、敏感性强,可用于SPA、SPB、SPC和ST的特异性检测。
- 许龙岩袁慕云孙薇柯碧霞洪烨
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌丙型副伤寒沙门菌伤寒沙门菌
- 进出口食品中单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型研究被引量：2
- 2010年
- 目的研究进出口食品中分离的单核细胞增生李斯特菌(LMO)之间分子分型特征和遗传相关性。方法参照美国PulseNet推荐的LMO脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准方法,用限制性内切酶AscⅠ酶切LMO染色体DNA进行PFGE试验。用BioNumerics软件对不同地区分离的LMO进行比对,分析菌株之间的相似度。结果 24株LMO分成20种PFGE型,菌株之间的相似度在44.45%～100%。来源于加拿大的LMO16、美国的LMO18、丹麦的LMO13,丹麦的LMO7和顺德的LMO22,广州的LMO21和山西的LMO8,分别有相同的PFGE型,相似度达到100%。结论进出口食品中分离的LMO在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有一定程度的相关性。
- 许龙岩袁慕云刘静宇赵贵明皱志飞凌莉张旺焦红
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分子分型食品安全
- PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物、试剂盒和检测方法
- 本发明公开了一种PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明根据单增李斯特菌hly基因设计扩增引物和测序引物，建立了PCR-焦磷酸测序，从DNA碱基序列水平上检测单增李斯特菌的方法。本发明先对目标...
- 许龙岩袁慕云凌莉阳静唐勤陈碧玲易敏英
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法
- 本发明公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明根据nuc、mecA和femA基因序列分别设计引物和探针，利用该检测引物和检测探针按照本发明的方法对样品进行三重实时荧...
- 袁慕云许龙岩张旺王志强阳静陈碧玲
- 文献传递
- PCR-焦磷酸测序检测副溶血性弧菌研究被引量：1
- 2013年
- 目的建立副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)的PCR-焦磷酸测序方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因设计扩增引物和测序引物,先用PCR特异性地扩增目的片段,再制备单链模版,最后用焦磷酸测序法检测DNA碱基序列,检测的序列为CCAAGGATTCACAGCAGAAGCCACAGGTGCTTTT,则判断为副溶血性弧菌。结果扩增引物和测序引物表现出良好的特异性。PCR扩增结果:20株VP均扩增出大小为137bp的DNA片段,而创伤弧菌等对照菌株未扩增出DNA条带。焦磷酸测序结果:20株副溶血性弧菌均测出与预期相符的DNA碱基序列,而其他对照菌株未测出DNA碱基序列或检测结果与测序引物后的序列不匹配。VP标准菌株ATCC17802发生A-T突变,密码子CCU变成CCA,而两个密码子都是脯氨酸的密码子。结论该方法特异性高,是快速检测VP有效手段。
- 许龙岩袁慕云唐勤阳静邹志飞相大鹏
- 关键词：副溶血性弧菌聚合酶链式反应焦磷酸测序碱基序列
- 基于TaqMan探针三重荧光PCR检测沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌被引量：9
- 2015年
- 目的建立基于TaqMan探针三重荧光PCR检测沙门菌(salmonella,Sa)、肠炎沙门菌(salmonella enteritidis,SE)和鼠伤寒沙门菌(salmonella typhimurium,ST)的方法。方法根据沙门菌aceA基因、肠炎沙门菌特异序列(GenBank:AF370707.1)、鼠伤寒沙门菌的STM4599序列(GenBank:AERV01000023.1),分别设计引物和TaqMan探针,在探针的5′端分别标记FAM、VIC、cy5,建立基于TaqMan探针三重实时荧光PCR检测沙门菌的方法。结果 29种不同血清型沙门菌均扩增出aceA基因,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的引物和探针分别特异性地扩增出15株肠炎沙门菌和11株鼠伤寒沙门菌,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。aceA、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的三重荧光PCR扩增效率分别为89%、87%、90%,最低检测浓度分别达到280cfu/ml、260cfu/ml、300cfu/ml。结论本研究建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的特异性检测。
- 袁慕云刘二龙谢力柯碧霞曹际娟许龙岩
- 关键词：TAQMAN探针沙门菌肠炎沙门菌鼠伤寒沙门菌
