谢杏
- 作品数：10 被引量：1H指数：1
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- 邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯长期低剂量染毒对HepG2细胞DNA甲基化的影响
- 【目的】探索塑化剂邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）长期低剂量染毒对HepG2细胞全基因组DNA甲基化和细胞毒性的影响。【材料和方法】用1.5、15、150μg/mL DEHP对HepG2细胞进行24 h持续染毒,...
- 吕子全谢杏柯跃斌
- 关键词：DNA甲基转移酶1DNA甲基化HEPG2细胞
- 文献传递
- 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)长期低剂量染毒对HepG2细胞DNA甲基化的影响
- 目的：探索塑化剂邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)长期低剂量染毒对HepG2细胞全基因组DNA甲基化和细胞毒性的影响.方法：用1.5、15、150μg/mL DEHP对HepG2细胞进行24 h持续染毒,连续处理2...
- 吕子全谢杏柯跃斌
- 关键词：DNA甲基转移酶1DNA甲基化
- CYP3A4沉默细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的构建CYP3A4基因沉默载体,转染L02肝细胞,建立CYP3A4沉默细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响。方法根据GenBank提供的CYP3A4基因mRNA序列设计合成shRNA,将shRNA连接到pLKO.1-puro中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到CYP3A4沉默细胞株,通过荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP3A4沉默细胞进行染毒12h,观察凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)表达变化。结果测序证明插入pLKO.1-puro载体的干扰序列与设计的序列一致,荧光定量PCR检测CYP3A4沉默细胞CYP3A4基因表达比正常L02肝细胞下降77.3%,Western blot实验显示CYP3A4沉默细胞CYP3A4蛋白表达水平比正常L02肝细胞下降84.6%。CYP3A4沉默细胞经三氯乙烯染毒后Bcl-2表达水平显著高于L02细胞的表达水平;Caspase-3表达水平无明显改变;Caspase-8仅在TCE高剂量组表达下降;Caspase-9在TCE剂量≥1.0 mmol/L表达水平下降;癌基因c-fos、c-myc、k-ras和p53表达水平都有一定程度下降,部分剂量组存在显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论三氯乙烯对正常肝细胞和CYP3A4沉默细胞凋亡基因和癌基因表达存在明显差异,提示CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系。
- 徐新云毛侃琅袁建辉毛吉炎吴德生黄海燕谢杏秦逍云谭琴
- 关键词：肝细胞CYP3A4慢病毒载体三氯乙烯
- CYP2E1基因过表达细胞株的建立及鉴定
- 2014年
- 目的:应用分子克隆技术,构建CYP2E1基因过表达载体,转染L02肝细胞,建立CYP2E1过表达细胞株并进行鉴定,为深入研究环境和职业毒物的毒作用机制提供模型细胞。方法:根据GenBank提供的CYP2E1基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒过表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到转染CYP2E1基因的L02细胞,通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。结果:测序证明重组慢病毒过表达载体CYP2E1基因序列与GenBank提供的CYP2E1序列一致,荧光定量PCR检测转染CYP2E1基因的L02细胞比正常肝细胞CYP2E1 mRNA表达提高273倍,Western blot实验显示转染CYP2E1基因的L02细胞CYP2E1蛋白表达水平比正常肝细胞提高3.2倍。结论:成功构建了CYP2E1基因过表达细胞株,可应用于环境毒物和职业毒物的分子机制研究。
- 徐新云毛侃琅周丽吴德生毛吉炎谢杏秦逍云谭琴
- 关键词：CYP2E1基因慢病毒载体过表达
- CYP3A4高表达肝细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响
- 2013年
- 目的建立CYP3A4高表达肝细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响。方法 PCR扩增CYP3A4基因并将其克隆到慢病毒高表达载体中,将已经构建的慢病毒载体进行转染后,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌罗霉素进行筛选得到CYP3A4高表达肝细胞株,通过荧光定量PCR和Western蛋白质印迹法鉴定细胞株。用三氯乙烯0,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1对正常肝肝细胞和CYP3A4高表达肝细胞进行染毒12h,实时定量PCR检测凋亡基因bcl-2,胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9以及癌基因c-fos,c-myc,K-ras和p53的表达。结果测序证明重组慢病毒高表达载体CYP3A4基因序列正确,荧光定量PCR检测CYP3A4高表达肝细胞株比正常肝细胞CYP3A4基因表达提高94倍。Western蛋白质印迹结果显示,CYP3A4高表达肝细胞株CYP3A4蛋白表达水平是正常肝细胞的2.36倍。CYP3A4高表达肝细胞bcl-2mRNA表达水平随三氯乙烯浓度增加呈下降趋势,与正常细胞相比,三氯乙烯0.25和0.5mmol·L-1使CYP3A4高表达肝细胞中的bcl-2mRNA明显升高(P<0.01);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1处理使CYP3A4高表达肝细胞组的凋亡基因胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9的mRNA表达水平明显升高(P<0.05);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1处理的CYP3A4高表达肝细胞c-fos、c-myc和k-ras基因的表达显著升高(P<0.01),p53表达水平明显下降(P<0.01)。结论三氯乙烯对CYP3A4高表达肝细胞株中的凋亡基因和癌基因表达具有明显促进作用,说明CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素。
- 毛侃琅徐新云何晓阳毛吉炎张然谢杏秦逍云
- 关键词：肝细胞细胞色素P-450CYP3A4慢病毒感染三氯乙烯
- 纳米氧化石墨烯诱导人类支气管上皮细胞DNA氧化与甲基化的实验研究
- 2019年
- 目的:通过分析体外培养的人类支气管上皮细胞(16HBE)在纳米氧化石墨烯(NGO)染毒后细胞DNA中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)和5-甲基胞嘧啶(5-mC)比例的变化规律,探讨DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法:分别以1.25、2.5、5、10μg/mL的NGO溶液染毒16HBE细胞24 h,采用高效液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA中8-OHdG比例,高效毛细管电泳(HPCE)法检测细胞全基因组DNA甲基化水平。结果:在2.5、5、10μg/mL的NGO溶液染毒后,细胞DNA中8-OHdG比例显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),以10μg/mL浓度时为最高。NGO可引起16HBE细胞甲基化程度降低,与对照组细胞相比,2.5、5和10μg/mL NGO组分别降低37.1%、49.7%和46.3%,与对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。DNA氧化水平与DNA甲基化水平间呈负相关(r=-0.69,P<0.01)。结论:本研究提示,在体外NGO可导致人支气管上皮细胞16HBE的DNA氧化水平升高,D NA甲基化水平降低,我们推测细胞DNA氧化程度可能影响DNA甲基化过程。
- 彭长凤谢杏柯跃斌
- 关键词：8-羟基脱氧鸟苷DNA甲基化去甲基化
- 基因组DNA氧化水平对甲基化的影响
- 2014年
- 目的分析体外培养细胞在H20：染毒后8-oxo-dG的形成、细胞DNA5-mE含量的变化规律，探讨其时间一剂量一效应关系和DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法利用0、20、40、60、80和100μmol／LH202作用于人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549），每天染毒1次，每次2h，共持续4d，继续培养8d。应用高压液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA8-oxo—dG水平、高效毛细管电泳（high－performance capillary electrophoresis，HPCE）法检测细胞全基因组DNA5-mE的含量。结果DNA甲基化与DNA氧化呈现不同特点，A549细胞染毒80μmol／LH2O2后DNA甲基化水平的改变需要10d以上的时间，而相同条件下DNA氧化水平的改变仅需12h，DNA甲基化的改变滞后于DNA氧化。H2O2可引起A549细胞甲基化程度降低，呈剂量依赖性关系。在一定的时间剂量范围内，DNA氧化与DNA甲基化作用间呈负相关关系（r=-0．72，P〈0．01）。结论DNA氧化能导致细胞DNA甲基化水平降低，DNA氧化可能是影响细胞甲基化的调控机制之一，在化学物质的毒作用效应中，DNA氧化可能是比DNA甲基化更早的一个重要分子事件。
- 柯跃斌徐新云梅树江谢杏陶功华
- 关键词：DNA甲基化DNA修复
- 人支气管上皮hsa-miR-148a-3p低表达细胞株的建立
- 2014年
- 目的:建立稳定的hsa-miR-148a-3p低表达人支气管上皮细胞株(16HBE)。方法:根据miRBase中提供的序列信息设计hsa-miR-148a-3p tough decoy RNA(TuD RNA),并将其连接到慢病毒载体pLKO.1-puro上。将重组慢病毒载体转染至293FT细胞并包装为慢病毒后,收集病毒上清,感染正常16HBE细胞。用嘌呤霉素筛选出has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株,通过荧光定量PCR对其进行鉴定,然后对筛选出的细胞分别采用荧光定量PCR和Western blot检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表达水平。结果:测序结果表明含hsa-miR-148a-3p TuD RNA的重组慢病毒载体构建成功;荧光定量PCR检测显示has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株has-miR-148a-3p的表达量比正常16HBE细胞低44%(P<0.01),其作用靶基因DNMT1的mRNA和蛋白表达水平分别为正常细胞的3.4倍和2.0倍(P均<0.01)。结论:成功建立hsa-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞,hsa-miR-148a-3p的低表达能提高DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平。
- 谢杏柯跃斌刘庆成刘建军毛侃琅徐新云夏菠杨淋清
- 关键词：DNA甲基转移酶116HBE细胞慢病毒
- 邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯长期低剂量染毒对HepG2细胞DNA甲基化的影响
- 2016年
- 目的探索邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）长期低剂量染毒对HepG2细胞全基因组DNA甲基化和细胞毒性的影响。方法用1．5、15．0、150．0μmol／L的DEHP对HepG2细胞进行24h持续染毒，连续处理20代后，对细胞的DNA甲基转移酶1（DNMT1）的基因和蛋白表达、基因组甲基化水平、凋亡水平和细胞周期进行检测，比较DEHP染毒细胞与正常对照细胞的差异。结果HepG2细胞经DEHP染毒处理后，DNMT1的mRNA与蛋白表达水平均明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；随着DEHP染毒剂量的增加，15．0、150．0μmol／L染毒组细胞的基因组甲基化水平明显下调，差异行统计学意义（P〈0．05和P〈0．01）；150．0μmol／L染毒组细胞晚期凋亡率明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；细胞周期无显著变化。结论HepG2细胞在接受长期低剂量的DEHP染毒后。细胞基因组DNA甲基化水平明显下调。最高剂量的DEHP长期染毒能诱导细胞出现一定程度的凋亡，DEHP具有细胞毒性，但其对细胞周期没有明显影响。
- 吕子全谢杏柯跃斌
- 关键词：DNA甲基转移酶1DNA甲基化
- 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯长期低剂量染毒对HepG2细胞DNA甲基化的影响
- [目的]探索塑化剂邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)长期低剂量染毒对HepG2细胞全基因组DNA甲基化和细胞毒性的影响.[材料和方法]用1.5、15、150μg/mL DEHP对HepG2细胞进行24 h持续染毒,...
- 吕子全谢杏柯跃斌
- 关键词：DNA甲基转移酶1DNA甲基化HEPG2细胞
