贾静
- 作品数：7 被引量：36H指数：3
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目四川省杰出青年学科带头人基金美国中华医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学政治法律自动化与计算机技术更多>>
- PCR-SSCP分析参数的研究被引量：19
- 2005年
- 目的:聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是一种快速、简便、较灵敏的检测基因变异的方法,但其影响因素很多,本文对凝胶浓度、上样量、PCR产物稀释倍数、甘油浓度、电压、电泳温度几个重要的因素进行探讨。方法:通过应用PCR-SSCP方法结合核苷酸序列分析检测成都汉族群体98个个体人类补体第8成分(C8A)基因型频率分布。结果:凝胶浓度为8%,PCR产物稀释4倍,上样量为4μl,不加甘油,电压为200V,恒温电泳时,SSCP分析可得到满意的结果。结论:PCR-SSCP分析对不同的研究对象,其分析参数不同,需要对其分析条件进行最大优化,才能获得实验的成功。
- 杨志惠周斌贾静王闯张林
- 关键词：PCR-SSCP
- EB病毒GST-Rta融合蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：6
- 2005年
- 目的表达和纯化EB病毒的重组融合蛋白谷胱氨肽S转移酶(GST)-Rta185和GST-Rta150,并制备特异性多克隆抗体。方法质粒表达载体pGEX-R185I、pGEX-R150I和pGEX-5X-3分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化后的GST-R185、GST-R150和GST蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清。结果在细菌裂解液中检测到高表达量的融合蛋白,经GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-Rta融合蛋白。应用Westernblot和ELISA方法检测证实,用纯化的GST-Rta蛋白免疫家兔得到了特异性的多克隆抗体。结论通过上述方法制备出来的融合蛋白纯度较高,免疫家兔获得的多克隆抗体具有良好的特异性,为研究EB病毒Rta蛋白及与EB病毒相关疾病的诊断和治疗提供了重要的条件。
- 徐永春梁伟波苟航陈文婕朱银华贾静张林
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体EB病毒
- 小鼠IL-18真核表达质粒的构建及其生物学活性的鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建小鼠白细胞介素18(interleukin18,IL-18)的真核表达质粒,并检测其表达的IL-18的生物学活性。方法采用RT-PCR获得小鼠IL-18基因,通过EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及连接反应,构建pEGFP-mIL-18真核表达载体,重组载体经过限制性内切酶、PCR及DNA序列测定等证实连接片段的正确性后,转染HEK293细胞系,荧光显微镜观察GFP-mIL-18融合蛋白的表达,收集转染后72h的上清液,MTT法检测上清液中IL-18表达产物的生物学活性。结果酶切分析、PCR鉴定、DNA测序表明成功地构建了pEGFP-mIL-18真核表达载体,MTT法证明表达产物有刺激小鼠脾细胞增殖的功能。结论所获pEGFP-mIL-18真核表达载体能在体外表达具有生物学活性的IL-18,为进一步研究IL-18的功能和运用奠定了基础。
- 贾静李虹李明远吕梅励杨志惠陈文捷贾怡蒋中华张林
- 关键词：白细胞介素18融合蛋白真核表达
- PCR-SSCP法检测人类补体第八成分C8ADNA多态性研究
- 2006年
- 目的建立一种检测人类补体C8ADNA多态性的新方法。方法C8A多态性的分子基础是C8A基因在第三外显子碱基发生了C→A的突变,通过特异性扩增C8A基因第三外显子,采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法结合DNA序列分析检测成都地区98份无血缘关系样本DNAC8A基因型。结果共发现3种基因型,C8A*AA、C8A*BB和C8A*AB,观测到的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。结论PCR-SSCP检测C8A多态性快速、简便、可靠、成本低,适用于大样本的筛选,在群体遗传学及法医学实践中有较好的应用价值。
- 杨志惠张林周斌王闯贾静
- 关键词：多态性
- EB病毒GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的制备和鉴定
- 2006年
- 目的制备EB病毒GST-Rta150融合蛋白的单克隆抗体并鉴定其特性。方法取经GST-Rta150融合蛋白免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,接种杂交瘤细胞至小鼠腹腔,收集腹水并纯化。制备的单克隆抗体以琼脂双向扩散法鉴定抗体类及亚类。间接ELISA法测定抗体的效价,Western-blot检测抗体的特异性。结果获得一株稳定分泌抗GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A9,细胞培养上清效价为10-3,腹水效价为10-5,纯化的抗体效价为10-6。经鉴定GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的亚类为IgG1。Western-blot结果显示此单克隆抗体能特异结合GST-Rta150融合蛋白。将杂交瘤细胞株在液氮中冻存3个月后复苏,其分泌的单克隆抗体效价不变。结论通过上述方法制备出来的单克隆抗体特异性强,稳定性好,为研究EB病毒立即早期基因产物Rta蛋白以及EB病毒相关疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 朱银华梁伟波吕梅励徐永春贾静张林
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤EBVEB病毒
- EAE小鼠模型的构建及其免疫学机制的探讨被引量：10
- 2008年
- 目的用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型并初步探讨EAE发病的免疫学机制。方法用MOG35-55抗原免疫C57BL/6小鼠,观察实验动物的症状及中枢神经系统的病理改变;应用MTT法测定EAE小鼠脾脏T淋巴细胞活化增殖程度;应用ELISA技术测定EAE小鼠血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体水平。结果EAE组发病率为100%,HE染色观察到脑脊髓炎性细胞浸润,白质脱髓鞘等病理改变;EAE小鼠脾脏MOG35-55反应性T淋巴细胞增殖活化,血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体随病情的加重而升高。结论用MOG35-55多肽成功诱导了C57BL/6小鼠EAE模型;并推断EAE的发生可能与MOG35-55反应性T淋巴细胞的活化、抗MOG35-55抗体和IFN-γ升高有关。
- 泰淑红李虹贾静吕梅励张林
- 关键词：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白实验性自身免疫性脑脊髓炎干扰素-Γ
- 一种麻醉科临床药物浓度调节器及其实现方法
- 本发明公开了一种麻醉科临床药物浓度调节器及其实现方法，属于麻醉科临床药物技术领域，包括底板，所述底板的上方设置有连接板，所述连接板上且与底板相对应的位置安装有多个连接管，所述连接管的靠中央位置安装有第一阀门，所述连接板的...
- 姜鲜章卓贾静李涛
