赫卫清
- 作品数：52 被引量：88H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 异戊酰螺旋霉素生物合成基因簇的鉴定
- 必特螺旋霉素是4″酰化的螺旋霉素混合物,以4″-O-异戊酰螺旋霉素为主要成分,是将碳霉素产生菌(Streptomyces thermotolerans)中的异戊酰基转移酶基因(4″-O-isovaleryltransfe...
- 钟晶晶张家瑚赫卫清
- 关键词：生物合成调控基因
- 格尔德霉素基因工程高产菌株的构建
- 本发明涉及格尔德霉素基因工程高产菌株的构建，具体而言，就是根据在吸水链霉菌17997中发现的两组AHBA合酶基因簇，采用基因阻断技术，破坏可能参与萘醌型安莎类化合物生物合成的AHBA-shn基因，以便通过阻断或减少通往合...
- 王以光赫卫清高群杰
- 文献传递
- 海洋细菌中活性化合物的筛选策略(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的从700多株海洋沉积物分离得到的细菌中筛选安莎类抗生素和6-脱氧己糖(6DOH)糖基化修饰的次级代谢产物产生菌。方法以3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合酶基因和dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因为靶标,分别进行安莎类抗生素和6DOH糖基化修饰的次级代谢产物产生菌的分子筛选。对AHBA合酶及dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性的菌株发酵液及提取物进行抗菌、抗肿瘤、抗病毒活性分析。采用利福霉素抗性及氢氧化钠显色初步鉴定安莎类化合物;采用α-萘酚硫酸显色初步鉴定6DOH糖基化修饰的化合物。利用16S rRNA序列对部分阳性菌株进行系统发育分析。结果共获得39株AHBA合酶基因阳性和10株dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株。阳性菌株中,78%具有不同程度的生物活性。化学初步鉴定结果表明:49%的AHBA合酶基因阳性菌株产生安莎类化合物;50%的dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株产生6DOH糖基化修饰的化合物。系统发育分析表明,大多数阳性菌株属于放线菌中的链霉菌属。结论基因探针筛选可作为一种合理、有效的方法从海洋细菌中发现活性代谢产物。
- 陈菲菲林灵王以光周红霞陶佩珍赫卫清王勇
- 关键词：海洋细菌生物活性
- 格尔德霉素的新衍生物Gdm－CT－1－1及其制备方法
- 本发明涉及利用基因工程技术改造制备抗生素的新衍生物，具体而言，涉及利用基因工程技术获得格尔德霉素C19位进行修饰的新衍生物4，5－双氢－7－氧－脱氨甲酰基－7－羟基－19－氧－甘氨酰格尔德霉素(Gdm－CT－1－1)及其...
- 王以光邵荣光赫卫清李永海
- 文献传递
- 4,5-双氢-7-去氨甲酰基-7-羟基-19-S-甲基格尔德霉素及其与格尔德霉素生物合成PKS后修饰的关系被引量：1
- 2012年
- 目的在吸水链霉菌17997格尔德霉素生物合成PKS后修饰gdmN-变株发酵产物中寻找新格尔德霉素衍生物。方法 gdmN-变株发酵上清液乙酸乙酯提取后,进行硅胶板TLC分析;对一个红色目标化合物进行了HPLC和高分辨质谱分析,并对其进行了1H-和13C-核磁共振(NMR)分析;对红色目标化合物在吸水链霉菌17997格尔德霉素PKS基因阻断变株中进行了生物转化实验。结果在gdmN-变株发酵产物中发现了1个预期的红色目标化合物(4,5-双氢-7-去氨甲酰基-7-羟基-19-S-甲基格尔德霉素);该目标化合物可被格尔德霉素生物合成PKS后修饰系统7-O-氨甲酰化,生成4,5-双氢-19-S-甲基格尔德霉素。结论在gdmN-变株中发现了4,5-双氢-7-去氨甲酰基-7-羟基-19-S-甲基格尔德霉素;该化合物可被格尔德霉素PKS后修饰系统继续7-O-氨甲酰化,但不能C-4,5氧化。
- 牛沂菲武临专赫卫清李京艳刘昕倪四阳林灵王红远孙桂芝李书芬王以光
- 提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究
- 目的 为进行可利霉素(原名必特螺旋霉素-BT)药代动力学研究,研究影响微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定BT 的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础.方法 采用管碟法和纸片法,考察检定菌液浓度、培养基...
- 戴剑漉赵小峰赫卫清贾晓宇李慧宁王以光
- 关键词：灵敏度
- 吸水链霉菌17997格尔德霉素部分生物合成基因簇的克隆和分析被引量：15
- 2006年
- 吸水链霉菌17997(Streptomyceshy groscopicus17997)是我所从中国云南土壤中分离到的格尔德霉素(geldanamycin,GDM)产生菌,GDM具有良好的抗肿瘤和抗病毒活性,但其肝毒性和水溶性差的缺点限制了其在临床上的应用。为了实现对GDM结构的生物学改造,首先要获得GDM的生物合成基因。根据GDM后修饰基因——氨甲酰基转移酶基因(gdmN)的保守序列筛选S.hygroscopicus17997的柯斯质粒基因组文库,共获得6个阳性克隆,选择CT-4阳性柯斯质粒进行亚克隆和测序,又通过PCR延伸的方法获得了与CT4连锁的将近5kb的外源序列,共获得28.356kb的外源DNA序列,其中包含了13个可能阅读框架,通过同源比较证实该序列与S.hygroscopicusNRRL3602中的GDM生物合成基因有很高的同源性。为进一步研究GDM生物合成基因的功能,并通过组合生物学的方法改造GDM的结构奠定了基础。
- 赫卫清王以光
- 关键词：生物合成基因簇
- 格尔德霉素生物合成类似物19-O-甘氨酰格尔德霉素
- 本发明涉及一种格尔德霉素生物合成类似物的鉴别及其制备，所说类似物是从格尔德霉素产生菌吸水链霉菌17997中获得的19-O-甘氨酰格尔德霉素(19-O-glycylgeldanamycin，简称Gdm-CT-1-3)；实验...
- 武临专王以光倪四阳王红远赫卫清王玉成
- 文献传递
- 可利霉素产生菌中糖基转移酶基因ssp803的功能鉴定及酶学特性分析
- 2024年
- 目的 通过体内基因阻断和体外酶促反应鉴定可利霉素产生菌中糖基转移酶基因ssp803功能和酶学特性,以及与可利霉素生物合成的关系。方法 在可利霉素产生菌54-IA中利用CRISPR-Cas9基因编辑系统敲除ssp803基因,将组成型启动子kasOp*控制的ssp803及其同源基因oleD分别转化到54-IA和?803变株中进行回复和高表达实验,通过HPLC分析?803变株、回复株和高表达株中可利霉素主组分异戊酰螺旋霉素的产量变化。再将ssp803基因连接至冷休克表达载体pColdI上,利用大肠杆菌Transetta(DE3)中进行表达和纯化。以大环内酯类抗生素为糖苷配体和以UDP-葡萄糖为供体进行Ssp803催化反应,通过HPLC-MS检测酶催化后的产物,通过UDP-Glo试剂盒测定Ssp803的酶促动力学参数。结果 利用PCR筛选出了ssp803基因框内缺失突变株?803,在?803中异戊酰螺旋霉素产量与54-IA出发菌株相似,而在54-IA和?803中高表达ssp803完整基因时,异戊酰螺旋霉素的含量明显下降,导入高表达oleD基因的质粒后产量下降得更多。通过体外酶促反应证实Ssp803催化的最适温度是37℃,最适pH是9.06。Ssp803对所测的大环内酯类抗生素都具有糖基化失活作用,对异戊酰螺旋霉素I等16元环的大环内酯类抗生素的催化活性要低于14元环大环内酯类抗生素,对索利霉素的催化效率最高。结论 Ssp803对大环内酯类抗生素具有糖基化失活作用,对14元环大环内酯类抗生素的活性更高,最适底物是索利霉素;在可利霉素产生菌中高表达ssp803和oleD基因会抑制异戊酰螺旋霉素的生物合成。
- 高晓杰李可萌赫卫清
- 关键词：糖基转移酶大环内酯类抗生素
- 提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究被引量：1
- 2013年
- 目的研究影响可利霉素微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定可利霉素的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,以抑菌圈大小为指标,考察检定菌液浓度,培养基配方,单、双层培养基检定平板,缓冲液加NaCl,胎牛血清,血浆等多种因素对检测灵敏度的影响;采用有机溶剂从人血浆中萃取可利霉素等方法测定血药浓度。结果检定菌浓度、培养基配方、检定平板厚度对检测灵敏度影响显著,含NaCl的缓冲液有利于提高检测灵敏度,人血浆对检测灵敏度有一定影响。以藤黄八叠球菌作检定菌,其菌浓为OD600=0.3~1.0,采用含牛肉蛋白胨0.5%,牛肉浸膏0.25%检定培养基制备单层检定平板,可以有效提高可利霉素检测灵敏度6倍;从血浆中萃取可利霉素,用纸片法进行测定,其最低检测限度可达0.02μg/ml。结论所建立的从血浆中萃取可利霉素的纸片法显著提高了微生物法检测血浆中可利霉素的灵敏度,可用于可利霉素药代动力学研究中血药浓度的微生物法检测。
- 戴剑漉赵小峰赫卫清贾晓宇李慧宁王以光
- 关键词：微生物敏感性试验药代动力学
