赵华山
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：吉林大学白求恩医学院更多>>
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- 尿素通道蛋白B基因敲除对小鼠心电图与心肌动作电位的影响
- ＜正＞尿素通道蛋白 B（UT-B）为介导尿素顺浓度差跨膜转运的膜通道蛋白,其在肾脏直小血管降支,红细胞、脑、心脏、膀胱和睾丸等组织广泛表达。前期研究结果表明,UT-B 缺失导致严重尿崩症。为探讨 UT-B 在心脏所起的生...
- 孟艳张学新赵华山郭丽荣吕斌赵春燕赵雪俭杨宝学
- 文献传递
- 2mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的应用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨2 mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的作用。方法(1)按SP级动物饲养标准进行饲养和繁殖;以UT-B基因敲除纯合子(UT-B-/-)成年雄鼠与C57/bl雌鼠合笼,繁殖出UT-B基因敲除杂合型小鼠(UT-B+/-,F1代),F1代UT-B+/-雄、雌鼠交配获F2代小鼠。(2)取F2代小鼠剪尾提取基因组DNA进行核型鉴定筛选纯合子小鼠(UT-B-/-)和野生型小鼠(UT-B+/+);(3)应用2 mol/L尿素溶血试验和肾脏RT-PCR进行UT-B-/-(JKnull)表型鉴定。结果(1)在SP级饲养和繁殖的条件下,已获得足够的UT-B-/-和UT-B+/+小鼠;(2)2 mol/L尿素溶血试验证明,UT-B+/+小鼠和UT-B+/-小鼠的红细胞加入到2 mol/L尿素中立刻溶血,UT-B-/-小鼠的红细胞10 min内不溶显示溶血抵抗。结论2 mol/L尿素溶血试验可准确地鉴定出UT-B-/-小鼠,与基因组DNA的PCR鉴定方法联合应用,可以使引进的UT-B-/-小鼠稳定繁殖、传代。
- 赵华山李志满吕斌郭丽荣梁爽陈燕孟艳杨宝学赵雪俭
- 关键词：基因敲除小鼠尿素溶血试验
- 尿素通道蛋白B基因敲除对小鼠心电图与心肌动作电位的影响被引量：2
- 2007年
- 尿素通道蛋白B(UT-B)为介导尿素跨膜转运的通道蛋白,在肾脏和其他肾外组织,如红细胞、脑、心脏、膀胱和睾丸等组织、细胞中广泛表达.为探讨UT-B缺失对心脏表型的影响,应用RT-PCR,Westernblot检测UT-B mRNA,UT-B蛋白在野生型小鼠(UT-B+/+)和UT-B基因敲除纯合子小鼠(UT-B+/+)心脏组织的表达情况,对比观察6,16,52周UT-B基因敲除纯合子(UT-B+/+)与野生型小鼠肢体Ⅱ标准导联心电图,应用悬浮微电极法记录分离的16周小鼠心室肌细胞动作电位各参数变化.结果显示UT-B的mRNA和蛋白在UT-B+/+小鼠心脏有表达,而UT-B+/+小鼠无表达;UT-B+/+小鼠P-R间期((43.5±4.2),(45.5±6.9),(43.8±7.6)ms)明显长于UT-B+/+小鼠((38.6±2.9),(38.7±5.6),(38.2±7.3)ms,P<0.05),随增龄P-R间期无明显延长,但老龄组(52周)Ⅱ度和Ⅲ度房室传导阻滞发现率超过20%;动作电位记录结果显示UT-B+/+小鼠的动作电位幅值(APA),动作电位最大除极速度(Vmax)与UT-B+/+小鼠比较,前者明显受到抑制(P<0.05),其APD50,APD90明显延长(P<0.05).总之,本研究发现野生型小鼠心肌有UT-B表达,UT-B基因敲除导致小鼠进展型心脏传导阻滞,提示UT-B在介导心肌电生理特性方面有重要作用.
- 孟艳张学新赵华山郭丽荣吕斌赵春燕赵雪俭杨宝学
- 关键词：基因敲除心电图小鼠心肌动作电位
- 稳定表达UT-A2的FRT细胞系的建立与鉴定
- 2007年
- 目的:建立稳定表达尿素通道蛋白A2(UT-A2)的FRT细胞系,为寻找UT-A2抑制剂提供细胞模型。方法:通过真核表达质粒-脂质体介导的方法,将UT-A2 cDNA与真核表达载体pUB6/V5连接后的重组质粒转染入FRT细胞,经稳定筛选建立稳定表达UT-A2的FRT细胞系。功能检测实验将细胞分为对照组和稳定转染组,用2 mol/L尿素负荷试验检测稳定表达UT-A2的FRT细胞膜的尿素通透性。结果:经BSD筛选21 d后得到稳定表达UT-A2的细胞株;Western blotting证实UT-A2蛋白稳定表达;免疫荧光分析结果提示UT-A2的质膜定位。2 mol/L尿素试验证实了该细胞系具有明显尿素通透性。结论:在非肾脏上皮细胞获得了稳定质膜定位表达UT-A2的FRT细胞株,该细胞株可用于UT-A2抑制剂的筛选。
- 郭丽荣孟艳赵丹赵华山吕斌杨宝学赵雪俭
- 关键词：转染尿素
