郭爱疆
- 作品数：108 被引量：172H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化被引量：1
- 2017年
- 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。
- 苏文强胡鑫宇王秋霞欧长波郭爱疆李辉骆学农余燕张艳红姜金庆刘兴友马金友王松才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达
- 一种石胆酸的用途
- 本发明公开一种已知化合物石胆酸的用途，即石胆酸在制备抑制缓症链球菌药物中的应用。本发明实验表明，石胆酸对缓症链球菌有良好的抗菌活性，是一种潜在的可代替现有抗生素抑制缓症链球菌的药物。
- 郭爱疆王帅王玉桂
- 猪囊尾蚴HSP70-4基因克隆及其真核表达
- 目的:猪囊尾蚴病（cysticercosis）是一种危害严重的人兽共患寄生虫病,被世界卫生组织列为17种被忽略的热带病之一。该病呈世界性分布,在东南亚、中美洲、拉丁美洲、南非一些相对落后的地区广泛流行。在我国,以东北、西...
- 殷静骆学农郭爱疆孙铭苑王帅杨兴才学鹏
- 关键词：猪带绦虫猪囊尾蚴真核表达
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因的克隆及表达
- 2009年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增出PRRSV甘肃株的核衣壳蛋白(N)基因,将N基因克隆至pGEM-T easy载体上,获得含N基因的阳性重组质粒pGEM-T easy-N.对质粒中的插入片段进行测序,应用DNAStar分析所测序列与GenBank中已登录的PRRSV毒株的同源性,再将其亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,得到重组表达载体pGEX-4T-1-N,转化E.coliBL21(DE3)细胞,用SDS-PAGE检测表达产物,并对其进行纯化.结果表明:PRRSV甘肃株N基因核甘酸序列与PRRSV-VR2332株的同源性为93.3%,与欧洲LV株的同源性为66.1%;构建的重组表达载体在大肠杆菌中获得了成功表达,表达产物为40ku的可溶性融合蛋白.
- 刘斌才学鹏郭爱疆贾万忠骆学农陈晓宇刘振勇丁军涛刘英
- 关键词：N基因
- 脱氧胆酸在制备抗缓症链球菌的产品中的应用
- 本发明提供了脱氧胆酸在制备抗缓症链球菌的产品中的应用，属于生物制药技术领域。本发明通过体外抗菌活性测试首次证实脱氧胆酸具有良好的抑制缓症链球菌活性的作用，因此脱氧胆酸在制备抗缓症链球菌的产品中的应用，又鉴于缓症链球菌引起...
- 王帅郭爱疆王玉桂张生英
- 重组CE18蛋白在绵羊绦虫蚴病诊断上的应用被引量：6
- 2009年
- 【目的】探讨细粒棘球蚴CE18重组蛋白作为绦虫蚴病免疫诊断抗原的应用价值,为筛选绦虫蚴病血清学诊断抗原提供依据。【方法】应用棘球蚴CE18重组抗原建立间接ELISA方法,分别对18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、19份棘球蚴感染绵羊血清及194份棘球蚴病疫区绵羊血清和13份健康羊血清进行检测,通过显著性差异分析评价CE18蛋白作为诊断抗原的意义。同时,应用生物学软件对CE18抗原蛋白同源序列进行分析,进一步从分子水平上提示CE18蛋白作为绦虫蚴病诊断抗原的依据。【结果】序列分析表明棘球蚴CE18蛋白基因为多种绦虫如泡状带绦虫、多头带绦虫、猪带绦虫等的共有序列,其蛋白质氨基酸序列相似性很高,不同种属之间高达99%,从分子水平上表明CE18蛋白为带绦虫蚴共同抗原成分之一。重组抗原CE18-ELISA方法检测绵羊血清抗体水平显示:脑多头蚴病、细颈囊尾蚴病、棘球蚴病和棘球蚴病疫区血清的阳性率分别为38.89%、73.33%、100%和76.14%,而对照组血清为阴性反应。【结论】CE18重组蛋白可作为绵羊棘球蚴病和细颈囊尾蚴病血清学诊断抗原,用于畜群活体检疫初筛试验。
- 刘红霞才学鹏张少华郭爱疆闫鸿斌苟惠天付宝权贾万忠
- 关键词：绵羊抗体免疫诊断
- 带科绦虫线粒体基因组全序列研究进展被引量：11
- 2010年
- 贾万忠闫鸿斌郭爱疆史万贵詹芳付宝权
- 关键词：基因组全序列INFECTIONS人兽共患寄生虫病棘球蚴病囊尾蚴病
- 一种用于片形吸虫感染检测的标志物及试剂盒
- 本发明公开一种用于片形吸虫感染检测的标志物、引物和检测试剂盒。本发明的标志物是血清miRNA生物标志物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。本发明的片形吸虫病和片形吸虫感染检测试剂盒内包括有引物SEQ ID N...
- 郭小腊郭爱疆郑亚东
- 文献传递
- 猪带绦虫cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基(PKA-C)基因的鉴定及表达被引量：5
- 2016年
- 为鉴定猪带绦虫cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基基因(Ts PKA-C),分析其作为诊断抗原的可行性,利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计猪带绦虫Ts PKA-C特异引物,以猪带绦虫成虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增Ts PKA-C基因的完整ORF,并通过生物信息学分析进行鉴定。构建p ET-30a(+)-Ts PKA-C重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明,Ts PKA-C的ORF由1 032个核苷酸组成,编码343个氨基酸残基,与细粒棘球蚴和多房棘球蚴氨基酸序列的一致性分别达78.7%和98.0%;Ts PKA-C具有蛋白激酶A的结构域及其催化亚基特征性活性位点,且存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Ts PKA-C基因的表达产物主要以包涵体形式存在,且可与猪囊尾蚴病阳性血清发生反应,在42 ku处产生特异条带。本研究克隆并鉴定了Ts PKA-C基因,其表达产物可被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。
- 刘光学王力郭爱疆张少华郑亚东侯俊玲骆学农
- 关键词：猪带绦虫
- 带属绦虫线粒体基因组全序列生物信息学分析被引量：14
- 2010年
- 通过利用生物生物信息学方法分析带属绦虫线粒体DNA（mtDNA）碱基组成、基因结构、密码子利用、基因变异及其在分子系统进化研究中的应用价值等,以期为带属虫种线粒体功能基因组学研究、分子分类学研究及其疾病诊断提供重要依据。从NCBI GenBank中下载已测序的6种带属绦虫线粒体基因组（mt genome）全序列,以细粒棘球绦虫mtDNA序列作为参考序列（外群）,用ClustalX软件（1.83）（http：//www2.ebi.ac.uk/clustal w/）进行多重序列比对,用DNAStar软件进行序列差异性分析,用MEGA4软件的邻接法（Neighbor-joining method）构建进化树,核苷酸进化距离算法用最大似然法（Maxi mumlikelihood method）,氨基酸进化距离算法用泊松校正法（Poissoncorrection method）,进化树检验用自展法（Bootstrap test）。tRNA和2个非编码区RNA二级结构预测分别使用软件ARWEN和RNAstructure Version 4.6。结果显示,带属绦虫mtDNA为双链闭环分子,为13.3~13.7 kb;4种碱基成分中,T含量最高（超过47%）,C含量最低（低于9%）;共有36个按照相同顺序排列的编码基因,其中蛋白质编码基因有12个,tRNA编码基因有22个（其中编码丝氨酸-tRNA和亮氨酸-tRNA的基因有2个,其余18种tRNA分子各有1个）,rRNA编码基因有2个（包括1个大亚基和1个小亚基）。基因组结构紧凑,基因间存在重叠区域,如nad4L和nad4基因;除广泛使用ATG作为起始密码子编码蛋氨酸,部分基因如多头绦虫nad6基因用GTG作为蛋白质翻译的起始密码子。线粒体tRNA长度为58~76 nt,二级结构多数呈典型的三叶草结构,少数呈D-loop结构;2个线粒体rRNA亚基基因rrnL和rrnS被trnC基因分隔开;线粒体基因组有2个大的非编码区,1个长非编码区（LNR）和1个短非编码区（SNR）;线粒体基因组中蛋白编码基因之间的差异为5.7%~28.9%,其中cox1和nad4L基因比较保守,而nad5和nad6则变异较大,进化较快。结果表明,根据线
- 贾万忠闫鸿斌史万贵王玉朝郭爱疆詹芳付宝权才学鹏
- 关键词：线粒体基因组生物信息学分析进化树分子分类
