郭荫广
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 肿瘤特异性锚定型α-gal模拟表位真核表达质粒的构建及功能研究
- 目的:
为了将肺癌的靶向基因治疗和自体免疫增强疗法相结合,本研究扩增α-gal模拟表位序列和GPI锚定序列的融合基因,构建Survivin启动子调控的gal-GPI融合基因的真核表达质粒pSGFP-gal-G...
- 郭荫广
- 关键词：肿瘤特异性真核表达质粒肺癌
- 文献传递
- 肿瘤特异性锚定型α-gal模拟表位真核表达质粒的构建及功能研究被引量：2
- 2010年
- 目的构建Survivin启动子调控的、α-gal模拟表位序列和GPI锚定序列融合基因的真核表达质粒,研究该质粒在肺癌A549细胞表面锚定表达α-gal模拟表位及其抗肺癌细胞效应。方法 PCR法扩增gal-GPI融合基因,以pSGFP质粒为载体,构建Survivin启动子调控的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒。将其用脂质体瞬时转染A549细胞后,用荧光显微镜观察GPI锚定表达功能,分别用免疫组化法和Western-blot法对锚定表达的α-gal模拟表位进行定位和免疫反应性分析,并用新鲜人血清对表达α-gal模拟表位的A549细胞进行补体介导的溶细胞效应研究。结果 pSGFP-gal-GPI质粒转染细胞的绿色荧光不均匀分布在细胞膜周围,免疫细胞化学分析表明重组融合蛋白表达在细胞膜上,Western-blot结果表明重组融合蛋白与人IgG有良好的免疫反应性;人新鲜血清对表达该表位的A549细胞具有明显的溶细胞效应。结论成功构建了能在A549细胞膜锚定表达α-gal模拟表位的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒,为肺癌等靶向基因治疗奠定了基础。
- 郭荫广陈全郑毅候艳刘革力张璐瑜
- 关键词：肿瘤特异性真核表达质粒肺癌
- Ipr1重组卡介苗对小鼠结核病的治疗效果被引量：1
- 2009年
- 目的评估携带小鼠胞内病原体抗性基因1(intracellular pathogen resistance1,Ipr1)质粒(pBOGI)的重组卡介苗(BCG)对结核分枝杆菌(Mtb)感染的治疗效果。方法BALB/c小鼠30只,随机分为3组:分别滴鼻给予磷酸盐缓冲液(PBS)、BCG和重组BCG,2周后用人型Mtb H37Rv标准株感染所有小鼠;感染后分别用PBS、BCG和重组BCG治疗7次;末次治疗后处死小鼠,检测肺脾荷菌量,肺脾脏器指数,血清IFN-γ、IL-10及TNF-α分泌水平和肺脾组织中Ipr1的表达,同时观察小鼠肺脾组织病理改变情况。结果重组BCG组肺脾荷菌量比PBS组和BCG组显著降低(P<0.01);重组BCG组肺脾脏器指数比PBS组和BCG组显著降低(P<0.05);重组BCG组血清IFN-γ分泌水平比PBS组和BCG组显著升高(P<0.01)。用免疫组化检测到小鼠肺脾组织中有Ipr1表达。PBS组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛;重组BCG组肺部病变最轻,肺泡结构基本正常;BCG组病变范围局限,病变程度界于PBS组与重组BCG组之间;各组间比较脾脏病理改变不明显。结论携带小鼠Ipr1基因的重组BCG对结核分枝杆菌感染有一定的治疗作用。
- 候艳陈全王瑜伟严莎吕玉春郭荫广
- 关键词：结核分枝杆菌卡介苗
- 糖基化磷脂酰肌醇锚定型EGFP真核表达质粒的构建及表达被引量：3
- 2009年
- 构建与增强型绿色荧光蛋白基因相连的糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)序列的真核表达质粒,并检测其在A549细胞中的表达。分离人外周血淋巴细胞,提取总RNA,以RT-PCR法扩增CD24基因的243bpGPI锚定序列,双酶切后定向克隆入pEGFP-C1质粒中,构建并鉴定pEGFP-C1-GPI质粒。经脂质体介导转染A549细胞后,在荧光显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况。经酶切和测序鉴定证实,所克隆的CD24GPI序列正确,荧光显微镜观察pEGFP-C1-GPI质粒转染A549细胞可见围绕细胞膜的强绿色荧光,而对照pEGFP-C1质粒转染A549细胞仅见胞内均匀荧光。成功构建与EGFP相连的GPI真核表达质粒,且能在A549细胞膜上锚定表达EGFP-GPI融合蛋白,为构建锚定表达型肿瘤疫苗奠定基础。
- 郭荫广陈全朱大冕
- 关键词：GPI真核表达载体A549绿色荧光蛋白
