陈大华 作品数:8 被引量:178 H指数:6 供职机构: 中国科学院植物研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 更多>>
青蒿转杜松烯合成酶基因发根系的培养 被引量:23 1998年 将已克隆的棉花杜松烯合成酶的cDNA(cadC14)插入到植物表达载体pBI121中,构建含CaMV35S启动子驱动下的杜松烯合成酶基因的植物表达载体pBIC14。用含pBIC14质粒的发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)15834感染青蒿(ArtemisiaannuaL.)叶片并诱导发根,共建立121个生长迅速的发根系。经浓度为20mg/L的Kan筛选,获得12个抗Kan阳性根系。PCR和Southernbloting分析表明,外源杜松烯合成酶基因已整合到青蒿基因组中,其转基因频率为3%。RTPCR分析表明,外源杜松烯合成酶基因在C37根系中,在转录水平上已有表达。 陈大华 孟玉玲 叶和春 李国凤 李国凤关键词:青蒿 绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中的表达 被引量:22 1999年 将改良的绿色荧光蛋白(GFP)基因,插入到植物表达载体中,构建双CaMV35S启动子驱动下的植物表达载体pBIGFP,在Kan浓度为20mg/L的筛选培养基上,用含有pBIGFP质粒的根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)LBA4404感染青蒿(ArtemisiaannuaL.)叶片,获得5个抗Kan阳性丛生芽系。Southernblotting分析表明,外源GFP基因已整合到青蒿转基因芽G1系的基因组中。在OLYMPUS_BH2型荧光显微镜下,观察到转基因芽中有较强的绿色荧光。表明绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中业已表达。从而建立以绿色荧光蛋白基因为报告基因的、根癌农杆菌介导的青蒿转基因系统。 陈大华 叶和春 李国凤 刘本叶关键词:青蒿 绿色荧光蛋白 植物类异戊二烯代谢途径的分子生物学研究进展 被引量:104 2000年 New advances in molecular biology of plant secondary metabolic pathway were summarized. The biosynthesis of artemisinin was used as an example, combined with the research work in the authors’ laboratory. Some new ways for producing plant secondary metabolites were proposed. 陈大华 叶和春 李国凤 刘彦关键词:次生代谢 分子调控 HMGR 优系青蒿法呢基焦磷酸合酶基因的克隆和酶学分析 被引量:13 2003年 从青蒿(Artemisia annua L)高产株系025的cDNA文库中克隆到了一个编码青蒿法呢基焦磷酸合酶(AaFPSl)的cDNA(afl).序列分析表明,这一cDNA编码一个含343个氧基酸残基的蛋白质,分子量为39kD.推导出的氯基酸序列与来自其他植物、哺乳动物及酵母的FPS相似,也包含异戊烯基转移酶和聚异戊烯基合酶所共有的5个保守域.此cDNA在大肠杆菌中的表达产物表现出明显的FPS酶学活性.通过离子交换层析纯化后,进一步测定了其酶学动力学.上述结果将进一步推动青蒿素生物合成分子调控的研究. 赵玉军 叶和春 叶和春 李国风 陈大华关键词:热病 抗疟药物 酶学分析 马铃薯HMGR基因的克隆、序列分析及其表达特征 被引量:16 2000年 采用RT_PCR技术 ,从马铃薯 (SolanumtuberosumL .)幼叶中克隆了一个约 1.0kb的cDNA片段 ,序列分析结果表明 ,该cDNA与已报道的马铃薯HMGR基因家族的三种类型基因具有较高核酸序列同源性 ,与HMGRⅠ基因同源性为 77.0 % ,HMGRⅡ基因为 93.2 % ,HMGRⅢ基因为 77.1%。其中 3′端非翻译区序列与HMGRⅠ、HMGRⅡ、HMGRⅢ三种基因同源性分别为 5 0 .2 %、80 .3%和 5 0 .7% ,因此推测该cDNA片段为HMGR基因家族中HMGRⅡ亚基因家族新发现的成员之一 ,命名为HMGR_c2。以特异探针进行的Southern杂交结果初步证明 ,HMGR_c2基因至少以两个以上拷贝形式存在于马铃薯基因组中 ;Northern杂交分析表明 ,HMGR_c2基因的全长mRNA约为 2 .0kb。定量RT_PCR分析表明 ,HMGR_c2基因在根、茎、叶等组织中均有表达 ,且在叶片表达量最高 ,约为根、茎的两倍。 陈大华 叶和春 李国凤 刘彦关键词:马铃薯 青蒿发根生长及青蒿素生物合成动态的研究 被引量:21 1998年 从747条发根农杆菌ATCC15834转化的青蒿株系025发根中,筛选出7个生长较快的发根系,这7个系在生长速度和青蒿素含量上均有显著差异,其中发根系HR9青蒿素产率最高,达到每月3325mg/L。青蒿发根的生长量和青蒿素含量极显著高于未转化根和愈伤组织。青蒿发根在分批培养中没有明显的迟滞期,接种后第7天进入指数生长期,第11天生长最快,第20天进入稳定期。青蒿发根中青蒿素含量呈明显的“与生长相关”特性,在指数生长期,青蒿素含量缓慢下降,生长速度减缓后,青蒿素含量上升,发根生长停止后,继续延长培养时间,青蒿素含量也不再提高。在分批培养中,青蒿发根适宜的培养时间为21d。 刘本叶 叶和春 李国凤 陈大华 耿飒 张艳萍 陈建林关键词:青蒿 发根 发根农杆菌 青蒿素 生物合成 青蒿异源基因的遗传转化及青蒿素生物合成相关基因的克隆 该论文由三部分内容组成,一、药用青蒿的遗传转化,即根癌农杆菌和发根农杆菌介导的转化系统的建立及其影响参数的研究.二、青蒿素生物合成的分子调控.三、倍半萜生物合成相关基因的克隆. 陈大华关键词:青蒿 青蒿素 分子调控 关键酶 文献传递 大规模细胞培养生产青蒿素 叶和春 李国凤 王红 刘本叶 逯春明 陈大华 刘彦 耿飒 王玉春 陈建林 张龙 该课题研究了不同基因型青蒿中青蒿素的含量,旨在客服遗传不稳定问题。获得转异源FPS基因和Cad基因的高产发根系;获得转异源FPS基因的青蒿F-73高产株系;建立了转基因植株丛生芽克隆和规模化生产技术系统;研制了新型发根生...关键词:关键词:青蒿素 青蒿 细胞培养