陈晴
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：首都医科大学基础医学院神经科学研究所更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 携带酪氨酸羟化酶基因的质粒和逆转录病毒在大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞中表达效率的比较被引量：2
- 2005年
- 目的 为提高体外转基因 (exvivo)治疗帕金森病大鼠模型的疗效 ,本实验拟比较两种基因表达载体介导的外源基因在两种不同运载细胞的瞬时表达效率。 方法 分别将酪氨酸羟化酶 (TH)基因的重组表达质粒和重组逆转录病毒导入原代培养的大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞 ,用免疫组织化学检测TH的表达效率 ;Westernblot法检测样品中TH特异性条带并转换成A值 ,以比较其在不同细胞中表达的相对含量。 结果 免疫组织化学检测表明 ,表达质粒的转染率为 5 %～ 7% ,逆转率病毒的感染率为 18%～ 2 0 % ;根据GDNF标准品蛋白条带含量与Westernblot结果的相应A值的标准曲线 ,推断出质粒转染和逆转率病毒感染的成纤维细胞中单个阳性细胞表达的TH相对平均含量分别为 4 76× 10 - 2 A和 4 35× 10 - 2 A ,质粒转染和逆转率病毒感染的脑胶质细胞分别是 5 4 5×10 - 2 A和 5 0 5× 10 - 2 A。 结论 不论是质粒载体还是逆转录病毒载体所携带的外源基因在两种细胞的单个阳性细胞中的表达无显著性差异。但由于逆转录病毒载体的感染率高于质粒载体 ,对于原代培养的成纤维细胞和脑胶质细胞 ,逆转率病毒载体是一种更好的表达载体。
- 陈晴段德义杨慧孙成三陈立南徐群渊
- 关键词：酪氨酸羟化酶质粒载体逆转录病毒载体成纤维细胞脑胶质细胞
- 带6个组氨酸尾的可溶性GDNF第1受体的重组表达和活性分析
- 2002年
- 目的 用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3’ 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。 方法 设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨酸密码子序列 ,以人GFRα 1全长cDNA为模板 ,PCR扩增编码可溶性GFRα 1序列并亚克隆于pBK RSV真核表达载体 ,转染COS 7细胞 ,收获培养上清 ,进行SDS PAGE及Western免疫印迹分析 ;使用钴离子金属螯合层析柱进行纯化 ;检测RET酪氨酸磷酸化以鉴定其生物学活性。 结果 Western免疫印迹证实培养上清液中有分子量为 6 0kD的特异阳性条带 ,与糖基化的GFRα 1分子量相符 ;金属螯合层析得到纯度达90 %以上的重组GFRα 1蛋白 ,每mlCOS 7培养上清中含有 0 5 μg。 结论 带 6个组氨酸尾的重组可溶性GFRα 1能够介导GDNF的作用 。
- 陈立南孙成三陈晴段德义杨慧张进禄徐群渊
- 关键词：蛋白纯化受体胶质细胞源性神经营养因子受体酪氨酸激酶
- 携带酷氨酸羟化酶基因的质粒和逆转录病毒载体转入成纤维细胞和脑胶质细胞中表达效率的比较
- 该实验比较了两种基因表达载体质粒和逆转录病毒介导的外源基因在两种不同运载细胞原代培养成纤维细胞和脑胶质细胞的exvivo瞬时表达效率,以求对今后帕金森病基因治疗构建何种基因载体、移植何种细胞有一定指导作用.结果显示,用质...
- 陈晴
- 关键词：基因治疗质粒载体逆转录病毒载体成纤维细胞脑胶质细胞
- 文献传递
