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轮状病毒感染性腹泻被引量：2: 2000年; 霍云雯钱渊; 关键词：轮状病毒感染性腹泻流行病学病理

轮状病毒VP4全基因的序列分析及其在原核系统中的初步表达被引量：4: 1999年; 目的　研究轮状病毒（ＲＶ）我国地方株ＶＰ４基因特点，并获得高效表达的ＶＰ４。　方法采用ＲＴＰＣＲ技术扩增ＲＶＰ１Ａ型我国地方株ＣＲ１８８的完整ＶＰ４基因，克隆到原核表达质粒ｐＥＴ２１ａ（＋）中：（１）用末端终止法进行核苷酸序列测定，并与人（ＨＲＶ）标准株作比较分析。（２）重组质粒转化原核表达宿主菌Ｅ－ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３），异丙硫半乳糖甙（ＩＰＴＧ）诱导表达，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对其表达产物进行鉴定。结果　（１）ＣＲ１８８ＶＰ４基因全长２３５９ｂｐ，含编码７７５个氨基酸的单一的开放读码框架（ＯＲＦ），与相同血清型标准株之间氨基酸序列具有高度同源性（９４％～９８％），与不同血清型标准株间相比较，则同源性较低（６４％～７８％）。（２）重组ＶＰ４表达量在诱导２～３小时时最高，占细胞总蛋白的１１％；表达蛋白与小鼠抗Ａ组ＲＶＶＰ４Ｐ１Ａ型特异性单克隆抗体（单抗）发生反应。结论　序列分析预测血清型的结果与临床标本的实验室诊断一致，ＣＲ１８８ＶＰ４为Ｐ１Ａ型；ＶＰ４全基因在原核系统中获得表达，表达的重组ＶＰ４抗原可被型特?; 霍云雯钱渊李国华肖玮; 关键词：轮状病毒属基因病毒基因表达

轮状病毒的动物感染模型被引量：3: 2000年; 本文综述了以小鼠和兔为主的动物感染模型对轮状病毒(RV)感染与免疫的研究。根据感染动物排出病毒、血清学免疫反应等指标,可以间接评价RV口服疫苗、亚单位疫苗肠道外免疫、粘膜-肠道外联合免疫等对肠道的保护作用,以及确定保护作用的相关因素和添加佐剂等新方法的效果。; 霍云雯; 关键词：轮状病毒感染动物模型免疫

轮状病毒北京地方株VP4基因的序列分析和原核系统的初步表达被引量：6: 2000年; Ａ组轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的最主要病原〔1〕,结构蛋白ＶＰ4是Ａ组轮状病毒感染后刺激机体产生保护性抗体的主要抗原之一。由于ＶＰ4仅占病毒毒粒蛋白的1.5%,对ＶＰ4的高效表达将非常有助于进行其多肽的功能性、抗原性和免疫原性的研究。我们先前的工作发现Ａ组轮...; 霍云雯钱渊李国华肖玮; 关键词：轮状病毒 VP4基因原核系统

在昆虫细胞中表达轮状病毒我国地方株VP4并构建病毒样颗粒: 轮状病毒/(Rotavirus，RV/)为呼肠孤病毒科轮状病毒属成员，目前至少可分为A～G七个组，造成人类感染的主要是A、B、C三组。现已确定A组轮状病毒是引起婴幼儿腹泻，特别是需要住院治疗的重症腹泻的最重要病原。许多研...; 霍云雯; 关键词：轮状病毒昆虫细胞感染性腹泻; 文献传递

A组轮状病毒我国地方株VP6基因的序列测定及其在杆状病毒系统中的表达被引量：14: 1999年; 通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）获得了轮状病毒地方株Ｔ１１４ＶＰ６全基因的ｃＤＮＡ片段，将其克隆入转移载体质粒ｐＶＬ１３９３中，构建成重组质粒ｐＶＬ１３９３－ＶＰ６。对克隆的ＶＰ６基因进行序列测定，并用它和杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）野毒株ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞，筛选纯化得到含ＶＰ６基因插入片段的重组杆状病毒，并进行了表达重组蛋白ＶＰ６的检测。测序结果显示ＶＰ６基因全长１３５６ｂｐ，序列分析显示与Ｗａ株非常接近，提示Ｔ１１４为亚组Ⅱ病毒株。用高价免疫血清经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物，结果显示，重组病毒感染细胞裂解液样品中可见大小约４５ｋＤ的特异条带；亚组Ⅱ特异性单抗检测到大小约１２０ｋＤ的条带，提示重组蛋白ＶＰ６获得了表达，具有正常的抗原反应性和天然ＶＰ６的三体结构。; 李国华钱渊何湘君霍云雯; 关键词：轮状病毒杆状病毒

用无菌小猪模型研究轮状病毒腹泻被引量：8: 2000年; 实验无菌小猪作为轮状病毒 ( RV)腹泻研究模型 ,具有很多优点。建立起该腹泻模型 ,可以研究人轮状病毒的体内感染、RV致病机理、毒力和宿主限制性相关基因 ,评价不同种类疫苗的保护作用以及确定保护作用相关因素等 ,对 RV腹泻的防治有重要指导作用。; 霍云雯钱渊; 关键词：轮状病毒腹泻病理疫苗

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