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新城疫诊断技术研究进展被引量：6: 2008年; 新城疫是危害世界养禽业的最严重的传染病之一,由于其传播速度快,给养殖业带来了极大的经济损失,因此对于该病的研究具有重要的意义。文章就新城疫诊断技术发展概况进行了综述,主要包括传统的病毒分离与鉴定、血清学诊断方法以及分子生物学检测方法。; 黄杰杨明娴刘珂黎满香; 关键词：新城疫

青海湖野生迁徙水鸟新城疫病毒的分离与鉴定被引量：1: 2008年; 从青海湖地区野生迁徙水鸟粪便中分离到1株新城疫病毒QH0601,其脑内接种指数(ICPI)为1.88。以RT-PCR扩增该分离株F基因片段,并进行序列分析,结果显示QH0601分离株F蛋白裂解位点具有强毒株的特征性氨基酸序列112R-R-Q-K-R-F117,其101位和121位的氨基酸残基具有新城疫病毒基因Ⅶ型特征。聚类分析表明,QH0601毒株与我国普遍流行的基因Ⅶ型NDV具有很高的同源性,提示野生迁徙水鸟与家禽新城疫的发生在流行病学和生态学上有着非常密切的关系。; 黄杰郭军庆尹可黎满香周继勇; 关键词：新城疫病毒

乳猪“高热症”猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与致病性分析被引量：5: 2008年; 本研究针对疑似高热症疫情的猪场,从分离病原的致病特性及基因特征,对高热症的病因进行了探索。以RT-PCR/PCR从临床病料中检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)核酸,利用Marc-145细胞从病料中分离到PRRSV(XS070425毒株)。测序结果显示,XS070425毒株Nsp2基因无高致病性PRRSV Nsp2基因533～561位连续29个氨基酸"RPVTPLSEPIPVPAPRRKFQQVKRLSSAA"的缺失;但遗传进化分析显示,XS070425毒株Nsp2、ORF5基因与近期我国报道的高致病性PRRSV-HuN4和JXA1有较高的同源性,达95%～96%。致病性试验显示,PRRSV-XS070425原始病料悬液和Marc-145细胞分离物接种健康猪后,病毒血症可持续26d,并出现典型的PRRS临床症状和体温升高,但不致死感染猪。这些结果说明,无NSP2蛋白29个氨基酸残基缺失的PRRSV也是猪高热症的重要病原。; 杨明娴邢刚孙文博黄杰姜学涛周继勇; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒

H5亚型猪流感病毒HA1重组蛋白的制备及间接ELISA检测方法的建立被引量：3: 2008年; 利用化学合成技术合成H5亚型猪流感病毒(SIV)的HA1基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+),构建了重组表达质粒pET28a-HA1/H5,用重组质粒转化表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,以镍螯合层析纯化表达蛋白;通过优化反应条件,建立了基于HA1重组蛋白的H5亚型SIV抗体间接ELISA(iHA1-ELISA)检测方法。SDS-PAGE分析结果显示,在大肠杆菌中成功表达了分子质量为45ku的His-HA1融合蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在;Western-blot分析结果显示,表达蛋白能被抗His单克隆抗体和抗H5亚型SIV阳性血清特异识别。优化iHAI-ELISA中HA1/H5重组蛋白的包被浓度为0.31μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1∶100。特异性测定结果显示,iHA1-ELISA方法不与H1、H3、H9亚型猪流感病毒抗体以及猪圆环病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒阳性血清发生交叉反应;iHA1-ELISA方法与血凝抑制试验的符合率达93.5%。表明利用重组HA1蛋白建立的检测H5亚型SIV抗体的ELISA方法具有良好的特异性和敏感性。; 尹可郭军庆黄杰黎满香周继勇; 关键词：猪流感病毒 H5亚型 ELISA

猪瘟病毒E2蛋白抗原表位的表达与免疫活性研究被引量：5: 2008年; 以猪瘟病毒全长基因组质粒为模板,PCR扩增出E2囊膜糖蛋白上A/D抗原区B细胞表位878aa～938aa;PCR扩增片段连接到pET-32a(+)载体构建pET-AD原核表达质粒,将阳性质粒转化到BL21大肠埃希菌中诱导表达,以Ni-NTA亲和柱纯化,纯化后的蛋白进行Western blot鉴定。结果表明,重组质粒pET-AD在BL21大肠埃希菌中可以高效表达,表达的蛋白质经纯化后仍然有反应原性。; 刘珂周斌黄杰尹可卿泰安黎满香; 关键词：猪瘟病毒抗原表位免疫印迹

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黄杰