- 一种动物低氧/复氧培养装置
- 本发明属于医疗试验设备领域，涉及一种动物低氧/复氧培养装置，培养箱通过隔板分隔为多个培养空腔，每个培养空腔中分别配置一个独立打开和关闭的培养抽盒，培养箱上表面设置有透明盖板，透明盖板上设置有给养水壶；连接控制器包括连通每...
- 曾先燕朱勇欧阳歆黄进
- 幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的体外活性被引量：9
- 2006年
- 目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间,评价其耐热性;在不同 pH的Tris-HCI中孵育一定时间,评价其耐酸性;加入胃蛋白酶并作用一定时间后,评价其对酶消化的耐受作用．以上评价均采用ELISA 法测定抗体效价变化．采用Hela细胞体外培养 MTT法分析VacA-IgY对H pylori细胞毒活性的中和作用．结果:本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴 15 min后活性保持约50％;在pH≥5时,抗体活性几乎无改变,pH<5时,抗体活性下降较快,pH2．0左右,抗体活性几乎丧失;pH4．0时, 60 kU／L胃蛋白酶作用1 h,抗体活性几乎无变化,2 h后活性仍保持50％以上．VacA-IgY能浓度依赖性地中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性．20 mg／L超声提取物即可降低1／2的 Hela细胞增殖能力,80-320 mg／L的VacA-IgY 能完全中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P<0．01)．结论:成功制备了重组VacA的IgY,且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性; 在其体外具有中和H pylori细胞毒活性的作用．
- 毛小琴杨致邦张绍兰田一玲黄进
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素蛋黄活性
- 融合蛋白VacA-HpaA卵黄抗体的体外研究被引量：4
- 2008年
- 目的:研究VacA-HpaA融合蛋白的鸡卵黄抗体(IgY)的理化特性和生物学活性,为制备集预防与治疗为一体的抗H.pylori感染的制剂奠定基础。方法:以纯化的VacA-HpaA融合蛋白免疫产蛋鸡,水稀释法获取蛋黄抗体(VacA-HpaAIgY)。(1)用硫酸铵沉淀法纯化IgY后,用SDS-PAGE分析其纯度,Bradford法测定蛋白含量。(2)用间接ELISA法检测该IgY的耐热性、耐酸性及其对酶消化的耐受作用。(3)采用Western blot分析IgY的特异性并检测其效价。(4)用MTT法检测不同浓度VacA-HpaAIgY对细胞毒活性的中和作用。(5)用扫描电镜观察VacA-HpaA IgY对AGS细胞粘附的中和作用。结果:(1)该IgY纯度为60%,蛋白浓度为22g/L;(2)具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶能力;(3)Western blot分析显示IgY的特异性,在相对分子量约27000和30000处出现在相应的条带;(4)该IgY对VacA细胞毒活性有中和作用,且具有量效性和时效性;(5)IgY可阻止H.pylori菌体蛋白的粘附作用。结论:该IgY具有良好的理化和生物学特性,可用于制备抗H.pylori感染的防治制剂。
- 叶翠莲杨致邦张吉黄进
- 关键词：IGY细胞空泡毒素粘附素体外试验
- 抗幽门螺杆菌rHpaA鸡蛋黄抗体的研制被引量：2
- 2006年
- 目的:采用基因工程技术表达重组幽门螺杆菌黏附素rHpaA,以此蛋白为抗原制备抗rHpaA的高特异性鸡蛋黄抗体。方法:诱导重组质粒pQE30-HpaA在大肠杆菌中大量表达rHpaA蛋白,用rHpaA免疫鸡,以水稀释法联合盐析法提取纯化IgY,采用Bradford法测定含量,SDS-PAGE电泳分析纯度,Western blot鉴定抗原特异性,ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果:IgY提纯后含量为24·6mg/ml,纯度约为90%,Western blot显示在相对分子量30000处出现单一条带,ELISA效价为1∶12800,巴氏消毒后未见效价损失。结论:成功获得了高浓度、高纯度、高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的特异性IgY制剂奠定了基础。
- 黄进杨致邦黄伟毛小琴邓颖叶翠莲
- 关键词：蛋黄抗体幽门螺杆菌黏附素
- 幽门螺杆菌VacA-HpaA融合蛋白的表达及其免疫学特性
- 2006年
- 目的构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性。方法用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性。将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性。结果SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0·72mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性。结论VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件。
- 叶翠莲杨致邦黄进邓颖刘淼吴利先
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素黏附素融合蛋白
- 一种新型EP管防爆夹持装置
- 本实用新型属于医学及分子生物学技术领域，涉及一种新型EP管防爆夹持装置，包括用于夹持EP管的夹持部、用于固定夹持部的支杆部和便于压紧EP管的盖板部，夹持部包括相互转动连接的两个夹臂和固定安装在夹臂上的扭转弹簧，两个夹臂的...
- 朱勇曾先燕欧阳歆黄进
- 文献传递
- 一种动物低氧/复氧培养装置
- 本实用新型属于医疗试验设备领域，涉及一种动物低氧/复氧培养装置，培养箱通过隔板分隔为多个培养空腔，每个培养空腔中分别配置一个独立打开和关闭的培养抽盒，培养箱上表面设置有透明盖板，透明盖板上设置有给养水壶；连接控制器包括连...
- 曾先燕朱勇欧阳歆黄进
- 文献传递
- 利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含256μg/mL利福平和无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含利福平的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基内返祖培养。将含利福平和无利福平的培养物及返祖菌进行细胞壁染色和透射电镜观察其细胞壁完整性,扫描电镜观察其表面微观结构。含利福平的培养物转种L型菌琼脂平板培养,无利福平的培养物和返祖菌转种营养琼脂平板培养,观察其菌落形态。对诱导前接种菌和返祖菌的16S rDNA进行鉴定。结果在含256μg/mL利福平浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌的细胞壁缺失,形态为球形,L型细菌琼脂平板上菌落呈典型油煎蛋样,而无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上呈圆形菌落。256μg/mL利福平浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌经返祖后,返祖菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上菌落也呈圆形。16S rDNA鉴定返祖菌与诱导前接种菌的同源性达100%,为同一种细菌,即脓肿分枝杆菌。结论利福平成功诱导脓肿分枝杆菌L型。
- 范贵荣杨致邦黄进
- 关键词：脓肿分枝杆菌L型细菌利福平细胞壁
- 脓肿分枝杆菌耐利福平机制的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨脓肿分枝杆菌耐利福平的机制。方法采用棋盘微量稀释法,分别测定利福平在加入不同浓度的改变细胞壁通透性的试剂和主动外排泵抑制剂时对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度。通过利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度的变化情况来分析细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平机制中的作用。结果随着TWEEN-80、Trixon X-100、甲苯、乙醚、CCCP、利血平和泮托拉唑浓度的增加,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度逐渐降低。对于TWEEN-80、Trixon X-100、CCCP和泮托拉唑,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512μg/mL降至小于32μg/mL,0.1%的TWEEN-80、0.006 25%的Trixon X-100、0.1μg/mL的CCCP和32μg/mL的泮托拉唑为最适浓度;对于甲苯、乙醚和利血平,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512μg/mL降至64μg/mL,0.25%的甲苯、0.25%的乙醚和8μg/mL的利血平为最适浓度。它们均能促进利福平对脓肿分枝杆菌的抑菌作用。结论细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平的机制中有重要作用。
- 范贵荣杨致邦黄进高继业
- 关键词：脓肿分枝杆菌利福平主动外排
- 脓肿分支杆菌分子生物学鉴定的研究进展被引量：1
- 2005年
- 目前,由脓肿分支杆菌引起的医源性感染和暴发流行不断增多,但是该菌对大多数抗生素耐受,尤其对抗结核药物耐药。因此,临床快速检测、鉴定,该菌对于该菌感染的防治具有十分重要的作用。传统的生化方法鉴定耗时长,结果不易准确判定,而采用分子生物学方法能快速、准确地得出结果。现就临床上脓肿分支杆菌分子生物学鉴定的研究进展作一综述。
- 黄进杨致邦
- 关键词：分支杆菌细菌感染聚合酶链反应
