黄银霞
- 作品数：8 被引量：38H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划国家科技部科研院所技术开发研究专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PrP八肽重复突变体对细胞生长影响的探讨
- 2007年
- 目的探讨PrP八肽重复突变体对细胞生长的影响。方法将具有遗传性朊病毒病相关不同八肽重复区插入突变的PRM，基因表达载体瞬时转染HeLa细胞，经噻唑蓝比色法（MTT）、Annexin—V／PI双染流式细胞检测。结果多八肽突变PrP蛋白对细胞的毒性作用较野生型明显增强。多八肽突变PrP较野生型更容易诱导凋亡发生，多八肽突变组早、晚期凋亡率均高于野生组。结论遗传性朊病毒病相关多八肽突变PrP蛋白可能较野生型更易诱导细胞凋亡发生。
- 韩露万言珍韩俊陈岚孙力王小凡黄银霞董辰方姜慧英董小平
- 关键词：朊病毒肽类噻唑蓝比色法细胞凋亡
- 鼠源抗haPrP23—231噬菌体抗体库的构建和初步鉴定
- 2007年
- 目的构建和鉴定鼠源抗haPrP23—231噬菌体抗体库。方法利用纯化的朊蛋白抗原免疫BALB／c小鼠，取脾，提取细胞总RNA，逆转录cDNA，以其为模板进行免疫球蛋白Fab区基因的特异性PCR扩增，将轻链和重链Fd段基因分别构建到pComb3质粒，构建噬菌体抗体库。结果经过四轮“吸附-洗脱-富集”的过程后获得了12株阳性克隆。挑取5株进行序列分析，并将结果与GenBank中已知序列库中的IgG序列进行比较，得到了两株不同的抗体，并进行了初步鉴定。结论本研究为朊病毒病的研究奠定了基础。
- 黄银霞韩俊董辰方孙力高晨王小凡韩露周伟张宝云姜慧英梁米芳董小平
- 关键词：朊病毒肽库细菌噬菌体
- 帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备被引量：1
- 2006年
- 目的利用分子克隆技术在原核细胞中表达α-共核蛋白(SNCP),并制备兔多克隆抗体。方法从人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA。利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列,测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上,在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白。融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备特异性抗血清,并对该抗体进行检测。结果琼脂糖凝胶电泳显示获得的SNCP cD-NA序列为420 bp。SDS-PAGE和W estern b lot分析,表达的融合蛋白呈可溶性,相对分子质量约为45 000。以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1:32000,并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应。结论人SNCP可在原核细胞中可溶性表达。用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清,为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础。
- 黄银霞韩俊张晓光姚海兰王小凡张瑾张宝云董小平
- 关键词：Α-共核蛋白神经退行性变原核表达抗体制备
- PrP^C转化成PrP^(Sc)的影响因素研究进展被引量：2
- 2005年
- 朊病毒蛋白有两种形式,即PrPC和PrPSc。PrPC是正常的细胞蛋白;而PrPSc是PrPC的异构体,具有致病性。大量的证据表明朊病毒是由PrPC错误折叠从而转变成PrPSc的,朊病毒病的发生与发展与PrPC转变成PrPSc密切相关,朊病毒病属于蛋白质构象病。本文将着重叙述PrPC转化成PrPSc的各种影响因素。
- 黄银霞董小平
- 关键词：影响因素
- α-synuclein生物学功能的初步研究和PrP特异性基因工程抗体的制备
- 第一部分：帕金森氏病相关蛋白α-synuclein的表达纯化及生物学功能的初步研究
α-synuclein蛋白（SNCP）广泛存在于大脑内，是一种脂结合的突触前蛋白。最近发现α-synuclein基因（SNCA...
- 黄银霞
- 关键词：神经退行性变噬菌体展示技术基因工程抗体
- 文献传递
- α-Synuclein与14-3-3蛋白在体外分子间相互作用的鉴定被引量：3
- 2007年
- 帕金森病(Parkinson's disease,PD)涉及两种蛋白——α-synuclein蛋白(SNCP)与14-3-3蛋白.通过重组,将这两种蛋白在大肠杆菌DH5α中表达,通过谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析将其纯化,得到GST-14-3-3蛋白;利用凝血酶对纯化的融合蛋白GST-SNCP切割,再经谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析获得SNCP.通过免疫共沉淀、GSTpull down和ELISA等技术,证明SNCP能够与14-3-3蛋白结合;为了进一步证明SNCP也与在脑组织中的天然14-3-3蛋白发生作用,利用His pull down方法进行实验.结果证明,SNCP能够和脑组织中的14-3-3蛋白发生相互作用.这些结果从分子水平提供了SNCP与14-3-3蛋白相互作用的实验证据,为进一步了解SNCP的结构和功能,及其在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础.
- 黄银霞韩俊韩露董辰方高晨王小凡周伟董小平
- 关键词：退行性疾病免疫共沉淀PULLΑ-SYNUCLEIN
- 一种基于链霉素沉淀的PrP^(Sc)检测方法的建立被引量：1
- 2008年
- 建立一种新的基于链霉素沉淀的PrPSc的Western blot检测方法,用终浓度为60mmol/L的链霉素处理蛋白酶K消化的PrPSc贮存液,通过离心沉淀PrPSc,用Western blot对PrPSc的链霉素富集效果进行检测。结果显示,链霉素能够与PrPSc结合形成高分子量复合物,但不影响糖基化形式。此外,基于链霉素沉淀的Western blot,无论是在低浓度或是大容积的条件下,均可显著地提高对PrPSc检测的敏感性。基于链霉素沉淀的Western blot试验是一种敏感、特异、快速及灵活的检测方法,有潜力用于脑组织、外周组织及体液中低水平的PrPSc的检测。
- 董辰方黄银霞安润陈建明王小凡单冰雷艳君韩露张宝云韩俊董小平
- 关键词：朊病毒WESTERNBLOT分子诊断技术
- 应用反向遗传学技术在哺乳动物细胞中产生甲型流感病毒被引量：31
- 2002年
- 在国内首次应用反向遗传学技术将多个质粒共转染哺乳动物细胞 ,得到了具有活性的甲型流感病毒。采用自行构建的含有 polⅠ和polⅡ启动子和终止子序列的pIVV2质粒 ,将A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基因组全部 8个RNA节段的cDNA分别克隆到该质粒的两个启动子之间 ,得到了 8个可在真核细胞中复制和表达的质粒。将这 8个质粒共转染 2 93T细胞 ,培养 4 8h后吸取上清液 ,转接入MDCK细胞中 ,再经过 72h培养 ,发现在MDCK细胞中有明显的流感样细胞病变产生 ,测上清病毒血凝滴度为 1:10。将MDCK细胞冻融液继续接种鸡胚和MDCK细胞 ,培养后将鸡胚尿囊液和MDCK细胞冻融上清液进行血凝和血凝抑制实验 ,证明所得病毒为A/PR/8/34(H1N1)。
- 陈稚峰张立国董婕吴昆昱陈爱珺孙梅生黄银霞齐立张智清郭元吉
- 关键词：哺乳动物细胞甲型流感病毒质粒共转染
