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胚胎期接触双酚A对雄鼠睾丸内PCNA和p53表达的影响被引量：2: 2010年; 目的研究胚胎期接触双酚A(Bisphenol A,BPA)对雄性胎鼠睾丸发育的影响及睾丸内增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和p53表达的影响。方法母鼠怀孕后第2天对其灌服双酚A(剂量5,50,100 mg/ml/day),一直持续分娩,F1代雄性小鼠饲养至75日龄,观察BPA对仔鼠成年后睾丸结构和PCNA和p53表达的影响。结果发现BPA处理组睾丸发育受到抑制,曲细精管直径和管腔直径变小(P<0.05),管腔内出现大量胞质残余体,部分管腔出现潴留管腔液,支持细胞生长受到抑制,生精细胞排列紊乱,细胞质出现空泡化。免疫组织化学结果显示在BPA处理组,PCNA除了在精原细胞大量表达外,在初级精母细胞中表达量明显升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光结果显示胚胎期接触BPA导致成年后睾丸内p53蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论胚胎期接触BPA对雄鼠睾丸发育有着长期的不良影响,可能源于BPA引起细胞的异常增殖和凋亡。; 解美娜庄文欣丁保清赵惠; 关键词：双酚A 胚胎期睾丸 PCNA

Snail沉默和过表达对ADM诱导MDR作用的研究: 2010年; 目的:研究乳腺癌细胞MCF-7中Snail表达与多柔比星(ADM)诱导的多药耐药(MDR)的关系,揭示上皮-间质转化(EMT)对乳腺癌细胞多药耐药的影响。方法:构建Snail真核表达载体pCDNA-Snail和RNA干扰载体pSUPER-siRNA,将载体转染乳腺癌细胞MCF-7;用多柔比星对细胞进行诱导。利用细胞毒性实验和多柔比星外排实验,对细胞的耐药状况进行评价;通过流式细胞术测量耐药细胞中P-糖蛋白(P-gp)表达,Real-TimePCR测量耐药细胞中MDR1、SnailmRNA的表达。结果:细胞毒性实验和多柔比星外排实验结果显示,细胞转染pCDNA-Snail和pSUPER-siRNA后经多柔比星诱导相对耐药指数(RR)分别为111.3和13.7,细胞内药物荧光强度分别为9.30±0.97和87.40±9.13;Real-TimePCR显示相对于未转染细胞,转染pCDNA-Snail后MDR1,SnailmRNA的表达明显升高,P<0.01,P-gp表达也显著升高,P<0.01;转染pSUPER-siRNA细胞则出现相反变化(P<0.01)。结论:Snail沉默和过表达分别使乳腺癌细胞的耐药能力降低或升高。; 王辉张义军陈伟娟王晓杰李莎莎丁保清; 关键词：RNA 小分子干扰 RNA

SNAIL诱导MCF-7细胞上皮间质转化致阿霉素耐药性增加被引量：1: 2010年; 目的观察SNAIL诱导后MCF-7细胞上皮间质转化(EMT)的发生和P-糖蛋白(P-GP)的表达,探讨EMT致乳腺癌细胞耐药性增强的作用。方法构建SNAIL真核表达载体,转染MCF-7细胞,用免疫荧光检测上皮标记物E-钙黏素、间质标志物波形蛋白的表达;MTT法评价细胞对阿霉素(ADM)的耐药性;流式细胞术检测细胞中P-GP和SNAIL的表达;Real Time PCR检测SNAIL、E-钙黏素、波形蛋白、MDR1mRNA的表达。结果MCF-7细胞转染SNAIL后,E-钙黏素表达较亲本细胞显著降低,波形蛋白表达显著升高(P<0.01),对ADM的耐药性及SNAIL、P-GP的表达也显著升高(P<0.01),与Real Time PCR结果一致。结论SNAIL诱导MCF-7细胞EMT后,增强了乳腺癌细胞中P-GP介导的对ADM的耐药。; 王辉张义军陈伟娟李文通李莎莎丁保清; 关键词：多药耐药上皮间质转化

非小细胞肺癌中MTAP蛋白及基因表达水平的检测被引量：1: 2011年; 背景与目的 MTAP基因是一种肿瘤抑制基因,在多种肿瘤组织中存在表达异常现象。本研究旨在探讨MTAP在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织、癌旁组织以及边缘肺组织中的表达水平及临床意义。方法应用免疫组织化学方法及IPP图像分析软件观察52例NSCLC患者组织中MTAP蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR及2-ΔΔCt法定量分析MTAP mRNA的相对表达量。结果 MTAP在NSCLC组织中的蛋白表达分别明显低于癌旁组织和边缘肺组织(t分别为10.283、10.940,均P<0.001),MTAP蛋白的表达与肺癌患者性别、年龄、吸烟史以及肿瘤的病理类型无明显关系,但与肿瘤的分化程度有密切关系(t=2.310,P=0.025)。NSCLC组织中MTAP mRNA相对表达量明显低于癌旁组织(t=9.902,P<0.001)。结论肺癌组织中存在MTAP mRNA和蛋白表达水平下调,可能与NSCLC的发生和进展有关。; 李莎莎张义军李洪利丁保清; 关键词：甲硫腺苷磷酸化酶肺肿瘤实时定量PCR

哺乳期母鼠灌服双酚A对雄性后代生殖发育的影响及其机制被引量：5: 2010年; 母鼠(Mus musculus)分娩后第2天起每天灌服双酚A(BPA,剂量5、50、100mg/kg),仔鼠通过乳汁暴露于BPA,一直持续到第22天断奶,研究BPA对雄性仔鼠成年后精子生成、睾丸结构与睾丸内雌激素受体(ER)α和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响及雌激素、抗氧化酶水平变化。结果发现,BPA处理组血清谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(SOD)活力显著降低,雌激素水平升高。所有剂量组睾丸发育受到抑制,生精细胞排列紊乱,精子畸形率显著升高,5和100mg/kg剂量组附睾尾精子数降低。免疫组织化学结果显示,不同曲细精管间ERα表达呈现出两种模式,一种是仅在支持细胞核内表达,另一种是在支持细胞和精母细胞核内均表达。PCNA表达与ERα表达有一定相关性,后一种ERα表达模式的曲细精管内PCNA阳性细胞显著增多。哺乳期接触BPA雄鼠睾丸内ERα单细胞平均表达强度升高,初级精母细胞PCNA表达量升高。; 解美娜李锋杰丁保清赵惠; 关键词：双酚A 哺乳期 ERΑ

哺乳期接触双酚A对子代雄鼠睾丸结构及雌激素受体β表达的影响被引量：1: 2011年; 目的研究哺乳期接触双酚A(BPA)对雄性小鼠睾丸结构及雌激素受体β(ERβ)表达的影响。方法 20只妊娠母鼠,待分娩后随机分为高、中、低剂量组,BPA染毒剂量为100、50、5 mg/(kg.d)和对照组,母鼠分娩后第2天开始每天灌服BPA,仔鼠通过乳汁暴露于BPA,一直持续到第22天断奶,研究其成年后睾丸组织形态学改变,并用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot方法研究BPA对其成年后睾丸内ERβ表达的影响。结果睾丸形态学分析表明BPA处理组睾丸发育受到严重影响,生精细胞排列紊乱,支持细胞和各级生精细胞生长受到不同程度的抑制;免疫组化、RT-PCR及Western blot均显示,高、中、低剂量组雄鼠成年后睾丸组织中ERβ的表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论哺乳期接触BPA影响雄鼠睾丸发育,改变其成年后睾丸形态,提高睾丸组织内ERβ表达,提示BPA可能通过改变雌激素受体表达从而影响睾丸发育。; 丁保清张义军解美娜李莎莎; 关键词：双酚A 哺乳期睾丸雌激素受体Β

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丁保清