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肠道病毒71型灭活疫苗生产中氢氧化铝佐剂制备工艺优化被引量：3: 2017年; 目的:对肠道病毒71型灭活疫苗生产工艺中氢氧化铝佐剂的制备工艺进行优化。方法:采用氨水法制备氢氧化铝佐剂,取优化前3批及优化后3批,对制备过程中氨水的滴加方式以及透析方式进行优化;检测优化前后的氢氧化铝佐剂的粒径、沉降率、铵离子及铝含量,同时检测优化前后各3批氢氧化铝对肠道病毒71型灭活疫苗的吸附效果。结果:优化后的氢氧化铝佐剂平均粒径显著小于优化前(P<0.05),且平均粒径变异系数小于优化前3批,优化后3批氢氧化铝佐剂的沉降率均为0 m L,铵离子检测合格率100%,铝含量及氢氧化铝含量显著大于优化前(P<0.05)、分别提高了24.7%和26.1%;优化前后6批氢氧化铝佐剂所配制的半成品,其上清液抗原百分含量均≤1.25%,优化前后的氢氧化铝佐剂对EV71抗原的吸附效果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本部分的优化方式提高了自配氢氧化铝佐剂的质量和安全性,减少了批间差异,提高了生产效率,并且其有效性没有因为优化而受到影响。; 伍胤杰李传印张光贤朱小永周玮蒋润佳伊晓燕杜志云陈劲孙明波; 关键词：肠道病毒71型灭活疫苗氢氧化铝佐剂

微载体预处理方式对其灭菌温度及Vero细胞贴壁率的影响被引量：3: 2017年; 目前,商品化的微载体多以干粉状态储存和销售,在细胞培养前需要先进行预处理,即用无Ca2+、Mg2+的磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,PBS)溶液对干粉微载体进行水合吸胀和洗涤,然后将水合吸胀后的微载体进行高压蒸汽灭菌处理,之后才能够用于细胞的培养.在这个过程中,可能会对微载体产生影响,从而影响细胞的贴壁和生长.作者将Cytodex1微载体用无Ca2+、Mg2+的PBS以50、25、16.7 g·L-13种水合吸胀质量浓度,每种浓度以720、2 400、6 000 mL 3种装量进行预处理.然后置于高压灭菌器中进行121℃高压蒸汽灭菌,观察其水合吸胀浓度及装量差异对灭菌温度造成的影响.灭菌完成后取样对微载体进行显微镜观察,然后将各组微载体样品用于Vero细胞的7 L生物反应器培养,12 h后记录各组的贴壁率.实验证明,对微载体进行预处理时,不同水合吸胀质量浓度和装量会对其灭菌时的升温速率造成影响.预处理时水合吸胀质量浓度不超过50 g·L-1,121℃以上灭菌时间不超过212 min,对Cytodex1微载体物理特性和Vero细胞的贴壁率没有影响(P>0.05).同时,在利用生物反应器培养Vero细胞时,除了考虑微载体的水合吸胀浓度和灭菌温度差异对细胞贴壁率的影响外,更重要的是预处理时不同水合吸胀浓度和装量所造成的灭菌温度差异是否能够满足无菌控制的要求.; 伍胤杰张名周健周玮杨希蒋润佳孙明波; 关键词：微载体生物反应器

运用链特异性RT-PCR法进行脊髓灰质炎灭活疫苗的灭活验证被引量：4: 2010年; 运用链特异性逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)建立了一种快速、灵敏、特异的脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)的灭活验证体系.以Sabin株脊髓灰质炎病毒悬液作为阳性对照,对脊髓灰质炎灭活疫苗进行检测.结果表明,链特异性RT-PCR法对具有活性的脊髓灰质炎病毒检测为阳性,而对脊髓灰质炎灭活疫苗的检测结果为阴性.链特异性RT-PCR法可作为一种简便、快速、灵敏的脊髓灰质炎灭活疫苗灭活验证方法,大大缩短了检测周期,在脊髓灰质炎灭活疫苗灭活验证的常规检测中具有较好的实际应用价值.; 余芬孙明波周健高娜伍胤杰梁疆莉姬光禇嘉祐; 关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗

生物制品生产中6种常用液体培养基高压灭菌前后的pH变化特征分析被引量：3: 2015年; 目的:通过检测、分析改良马丁培养基等6种生物制品生产中常用液体培养基高压灭菌前后的pH变化,给实际配制培养基时预调pH的范围提供参考。方法:将培养基干粉按要求配制,用0.5 mol·L^(-1)NaOH溶液调节成不同的pH梯度(6.80~8.10),经高压灭菌后检测pH值,并对结果进行对比、分析、统计。结果:改良马丁培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、麦康凯肉汤培养基、胰酪胨大豆肉汤培养基4种灭菌后pH降低,其中,改良马丁培养基的下降幅度最大;营养肉汤培养基灭菌后pH升高;精氨酸支原体肉汤培养基变化不显著。结论:不同培养基灭菌前后的pH变化差异较大,根据pH检测结果变化规律得出各培养基高压灭菌前最适的pH预调范围。; 余芬孙明波沈伟杨兴鹅杨普珊伍胤杰李佳杨希; 关键词：培养基高压灭菌

应用同源重组技术快速构建乙型流感M蛋白通用疫苗的表达载体被引量：2: 2017年; 目的应用同源重组技术快速构建pUC57和乙型流感M基因的表达载体。方法分析2006~2016年世界卫生组织在北半球推荐使用乙型流感病毒疫苗株的变化趋势和云南省内的优势流行病毒株,筛选4株典型毒株做实验毒株。提取病毒RNA基因组,进行RT-PCR后,胶回收后与线性化的载体pUC57后,在37℃同源重组30min,即完成一步法重组。通过转化大肠杆菌筛选阳性克隆,并对阳性质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。将表达产物进行初步纯化后免疫小鼠,经过三次加强免疫后,通过中和实验评价表达产物的免疫效果。结果平板菌落数计数法获得的同源重组阳性率83.3%,PCR阳性质粒能获得大小正确的目的片段,使用EcoRⅠ单酶切后,其大小正确,测序后发现质粒碱基没有发生突变或缺失,序列正确,同源重组技术共计耗时34h。中和实验结果显示,相同谱系内的抗原保护效价在1024,并在不同谱系间的交叉保护在256~512。结论同源重组技术能在流感通用疫苗的上游开发环节中快速、高效的构建重组质粒,表达产物能够诱导小鼠产生良好的免疫保护效果。; 高承刚杨伟李卫东伍胤杰郑俊杰李开伟钏鸿云赵卫中郑勇史小军廖国阳; 关键词：同源重组乙型流感病毒快速克隆

血清对Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测结果的影响: 2018年; 目的比较6种不同血清对Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度(CCID50)检测结果的影响。方法分别采用6种未处理血清和6种预处理血清组(免疫吸附法)进行Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测(微细胞病变法),检测了不同组血清中Ⅱ型脊髓灰质炎病毒中和抗体滴度,并使用处理血清组进行促细胞生长试验。最后分析不同血清对感染性滴度的影响。结果6种未处理血清组病毒感染性滴度检测结果差异有统计学意义(P<0.01),6种处理血清组病毒感染性滴度差异无统计学意义(P>0.05)。未处理组2号血清的中和抗体滴度为1∶4,6号血清的中和抗体滴度为1∶8,其余各组血清的中和抗体滴度均<1∶4。6种处理血清组的中和抗体滴度均为1∶2。血清促细胞生长试验显示6种处理组血清细胞生长趋势正常。结论Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测前使用免疫吸附对血清进行预处理,可降低血清中存在的中和抗体对检测的影响,为比较不同实验室数据提供可能。; 张名伍胤杰沈武玲周健寸怡娜平玲彭佳孙明波; 关键词：脊髓灰质炎病毒滴度中和抗体血清

Sabin IPV基础免疫后不同时间的中和抗体水平研究: 2012年; 目的探讨不同剂量配比的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（SabinIPV）基础免疫后中和抗体的持续时间及加强免疫前后中和抗体水平的变化。方法用不同配比的Ⅰ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备两批SabinIPV，并使用GSK制备的DTaP—WIPV作为阳性对照组，对18只Wistar大鼠进行3针基础免疫后，每间隔3个月采血直到加强免疫前，并同时于加强免疫后1个月采血，并对血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型别的中和抗体效价进行初步研究。结果大鼠采用0、1、2月免疫程序进行3针免疫后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度随着时间的变化均有所下降，但绝大部分组大鼠的血清中和抗体阳转率仍维持在100％，在加强免疫后，各组的三个型别的中和抗体水平在短期内明显升高。结论SabinIPV有良好的免疫持久性，并在加强免疫后，可产生更高水平的中和抗体。; 刘婧马艳孙明波伍胤杰周武刚谢炳锋张名唐聪杨卉娟杨晓蕾; 关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗灭活抗体病毒

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗纯化工艺的建立被引量：11: 2010年; 目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)纯化工艺。方法采用Sepharose CL-6B凝胶过滤和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析两步纯化法纯化脊髓灰质炎病毒,进行各项检定后再经除菌过滤和灭活。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒纯化后的蛋白去除率均不低于98.81%,病毒滴度分别为8.75、8.50和8.63lgCCID50/ml,DNA残留量均<100pg/ml。除菌过滤和灭活后,D抗原含量略有下降。结论已建立了Sabin株IPV的纯化工艺,纯化后制备出了高纯度的Sabin株IPV。; 衡燮高娜伍胤杰林小瑞周武刚王微唐聪姜述德杨净思孙明波; 关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗凝胶过滤层析离子交换层析

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伍胤杰

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