伏小平 作品数:54 被引量:145 H指数:6 供职机构: 甘肃农业大学动物医学院 更多>> 发文基金: 甘肃省自然科学基金 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
牛支原体二氢硫辛酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物酶比活性的测定 2015年 参照GenBank中牛支原体PG45株二氢硫辛酸脱氢酶基因(pdhD)的序列设计特异性引物,应用PCR扩增牛支原体武威株的pdhD基因,然后将其克隆至pMD19-T。在完成测序及点突变的基础上构建重组表达质粒pET-28a(+)-pdhD,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后纯化表达产物His-DLD,并对其酶促反应活性进行测定。结果显示,表达产物在底物NADH存在条件下,能将硫辛酰胺催化生成二氢硫辛酰胺,且其最适酶促反应温度为25℃、pH为7.5;其米氏常数Km(NADH)为9.72μmol/L,最大反应速率为25.6μmol/(L·min)。上述结果为研究二氢硫辛酸脱氢酶的生物学功能奠定了基础。 李娜 包世俊 苏炜德 邢小勇 伏小平 温峰琴 项海涛 薛慧文关键词:牛支原体 原核表达 乳杆菌XF-9301生长特性研究 被引量:1 1997年 乳杆菌XF┐9301生长特性研究1)伏小平(甘肃农业大学动物医学系兰州730070)乳杆菌是健康动物肠道的正常菌群之一,对动物宿主有益无害,且对致病性大肠杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌等均有抑制作用,并有促进动物生长,提高增重的作用。笔者... 伏小平关键词:乳杆菌 口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备 被引量:1 2008年 以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。 赵建勇 独军政 高闪电 林彤 邵军军 丛国正 伏小平 常惠芸关键词:口蹄疫病毒 受体 配体结合域 单克隆抗体 滑液支原体WVU1853株免疫相关膜蛋白的初步分析 被引量:14 2017年 膜蛋白是病原菌膜结构的主要组分,其不仅在病原菌的生命活动中具有重要的生理功能,且部分膜蛋白还与病原菌的感染及免疫应答密切相关。因此,本研究旨在应用免疫蛋白质组学方法分离、筛选并鉴定出滑液支原体免疫相关膜蛋白,以期为滑液支原体感染和免疫机制的研究及相关疾病诊断和防治方法措施的建立奠定基础。笔者应用培养至对数生长中后期的滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)WVU1853株全菌分别免疫鸡和新西兰兔,制备滑液支原体鸡多抗和兔多抗。提取滑液支原体WVU1853株的膜蛋白,应用二维电泳技术对其进行分离,继而应用所制多抗进行Western blot,筛选出免疫原性膜蛋白,并通过质谱分析进行鉴定。结果表明,在筛选的8个蛋白质点中,3个蛋白质点为延伸因子EF-Tu,其余蛋白质点分别是丙酮酸脱羧酶α亚基、β亚基、NADH氧化酶、组氨酰-tRNA合成酶和二氢硫辛酰胺脱氢酶。其中组氨酰-tRNA合成酶的质谱分析得分太低,尚需进一步验证,而丙酮酸脱羧酶α、β亚基与作为滑液支原体的免疫相关膜蛋白首次被证实。本研究筛选并初步鉴定出滑液支原体7种免疫相关膜蛋白,为深入研究目标蛋白质的生物学特性及新型亚单位疫苗和诊断试剂的研发奠定了基础。 包世俊 丁小琴 邢小勇 伏小平 薛慧文 温峰琴关键词:滑液支原体 膜蛋白 应用肠道微环境重组技术提高家禽抗病力的研究──雏鸡口服乳杆菌XF-9301制剂的安全性和效力试验 被引量:1 1995年 应用自制的XF-9301乳杆菌制剂给清净雏鸡群和染疫雏鸡群口服,进行安全试验和效力试验,证实XF-9301制剂是一种安全、有效的微生态制剂。染疫雏鸡群口服XF-9301组与未经处置组1月龄雏鸡存活率及雏鸡白痢等腹泻性疾病发病率间存在着显著差异(P<0.05)。 胡永浩 项光华 伏小平关键词:乳杆菌 效力试验 雏鸡 安全性 鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白β-内酰胺酶报告系统的建立 被引量:1 2012年 目的构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内。方法将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫菌研究的TEM报告基因载体。把待分析的鼠疫菌基因及启动子区克隆入TEM基因上游,使鼠疫菌蛋白与TEM蛋白融合表达。将鼠疫菌基因-TEM融合表达载体电转化到鼠疫菌中,并感染HeLa细胞2 h后,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦显微镜下观察结果。结果与结论应用本系统检测了YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla进入宿主细胞的情况,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa细胞呈蓝色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa细胞呈绿色,表明YopK及YscX可以进入宿主细胞,而YscK和YscL则不能。本研究成功地构建了适于鼠疫菌的TEM报告基因系统,该系统可作为分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的过程中进入宿主细胞的工具,为鼠疫菌T3SS相关蛋白致病机制研究奠定了基础。 韩伟 谭亚芳 杨慧盈 郭兆彪 杨瑞馥 伏小平 杜宗敏关键词:鼠疫耶尔森菌 质粒 西北地区鸡新城疫流行病学调查情况分析 被引量:9 2004年 伏小平 张银田 胡永浩 余四九关键词:新城疫 流行病学 病毒分离 疫苗 爱得福消毒剂对病毒和霉形体的杀灭效力试验 被引量:2 1996年 爱得福消毒剂是一种新型复合碘消毒剂。猪瘟兔化弱毒家兔感染试验,最大有效杀灭稀释度为1:800,进口同类产品雅好生为1:400;鸡新城疫病毒鸡胚试验,最大有效杀灭稀释度为1:800,雅好生为1:600;鸡传染性法氏囊病病毒鸡感染试验,最大有效杀灭稀释度为1:600,雅好生为1:600;口蹄疫病毒小白鼠感染试验,最大有效稀释度为1:600;对霉形体的最大有效杀灭稀释度,爱得福为1:1500,雅好生为1:1200。 夏文江 薛明 周宗田 罗永江 史彦斌 伏小平 胡永浩 魏怀录关键词:消毒剂 病毒 霉形体 鸡伤寒-白痢沙门氏菌生长动力学 被引量:5 1992年 为了测定鸡伤寒—白痢沙门氏菌的生长动力学,用该菌的标准菌株C79—13接种5种液体培养基,于接种后0,4,8,12,16,20,24,36和48小时取材,按标准琼脂平板计数法计算了每ml培养基内的活菌数。结果表明,营养成分和培养时间对本菌的生长繁殖具有明显而强烈的影响。每ml培养基内活菌平均数以接种后4小时最少;以接种后16或20小时最多。本菌的世代时间不是常数,以2号培养基接种后12~16小时最短(18′16″),以4号培养基接种后4~8小时最长(83′20″)。本试验还试图建立本菌生长动力学的数学模型,包括3个直线方程和1个确定性模型。 潘光炎 罗德英 伏小平 刘磊 陈金顶关键词:伤寒 白痢 动力学 牛支原体脂蛋白P48单克隆抗体的制备及鉴定 2016年 为制备牛支原体表面脂蛋白P48的单克隆抗体,应用纯化的牛支原体武威株脂蛋白P48基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠,继而取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆和筛选,获得2株能分泌抗牛支原体脂蛋白P48抗体的杂交瘤细胞融合株,并分别命名为C7及E5。ELISA和W estern-blot检测结果表明,2株单克隆抗体均可与牛支原体特异性地结合,而与牛的其他常见病原菌无任何反应。亚类鉴定结果表明,2株单克隆抗体重链均为Ig G 1,轻链均为λ型。稳定性试验结果表明,2株杂交瘤细胞均可稳定分泌单克隆抗体。本研究结果为建立牛支原体有效的检测方法和深入研究脂蛋白P48的生物学功能奠定了基础。 包世俊 胡国明 邢小勇 郝宝成 薛惠文 伏小平 温峰琴 胡永浩 项海涛关键词:牛支原体 单克隆抗体 杂交瘤