何峻峰
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金广东省自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经生长因子基因重组逆转录病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建神经生长因子(NGF)基因重组逆转录病毒表达载体,研究NGF在神经干细胞(NSC)中的表达情况。方法从大鼠海马组织提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得编码大鼠β-NGF的基因片段,应用基因重组技术,将大鼠β-NGF基因片段克隆到逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1中,通过脂质体Lipofectamine2000转染包装细胞PT67,经G418筛选后,收集阳性克隆病毒上清,用于感染神经干细胞(NSC),观察该NSC表达的NGF对PC12细胞突起生长的作用。结果限制性内切酶酶切分析鉴定表明为正确重组子,β-NGF基因在NSC中获得表达,该NSC的培养上清液可以促进PC12细胞突起生长。结论重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-NGF构建成功,β-NGF基因可在NSC中表达并具有生物学活性。
- 何峻峰龙大宏李佳楣冷水龙谷海刚宣爱国潘学兵
- 关键词：神经生长因子逆转录病毒载体神经干细胞基因重组阿尔茨海默病
- 重组质粒pEGFP-Brn-4的构建及其在神经干细胞中的表达
- 2007年
- 目的构建神经发育转录因子Brn-4基因真核表达重组质粒,研究Brn-4在神经干细胞(NSC)中的表达情况。方法从新生鼠脑组织提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得编码鼠Brn-4的基因片段,应用基因重组技术,将鼠Brn-4基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-C2中,应用脂质体转染NSC,荧光显微镜观察该Brn-4基因在NSC中的表达。结果限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组子,Brn-4基因在NSC中获得表达。结论新构建的真核表达重组质粒pEGFP-Brn-4通过鉴定,结构正确;Brn-4基因可在NSC中表达,可作为后续研究老年性痴呆动物模型转基因实验的基因来源。
- 宣爱国龙大宏何峻峰陈艳
- 关键词：真核表达载体神经干细胞绿色荧光蛋白
- 重组质粒pEGFP-Brn-4的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 本研究构建了真核表达重组质粒pEGFP-Brn-4,并观察了其在大鼠骨髓间质干细胞(MSC)中的表达情况。提取新生鼠脑组织总RNA,利用RT-PCR的方法扩增Brn-4的基因片段,用基因重组技术将Brn-4基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-C2中,测序及PCR进行鉴定;将重组质粒应用脂质体转染的方法转入MSC中,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达。经酶切及DNA测序结果证实pEGFP-Brn-4表达质粒的DNA序列完全正确,将此质粒转染MSC后Brn-4基因获得表达。研究结果提示成功构建真核表达重组质粒pEGFP-Brn-4,且Brn-4基因可在MSC中表达,为后续探讨Brn-4修饰的MSC治疗老年痴呆的可行性奠定了基础。
- 宣爱国龙大宏陈艳何峻峰
- 关键词：重组质粒骨髓间质干细胞绿色荧光蛋白
- 脑源性神经营养因子体外诱导神经干细胞向神经元分化被引量：7
- 2008年
- 目的观察脑源性神经营养因子(BDNF)对新生SD大鼠海马神经干细胞在体外分化为神经元的作用。方法取新生SD大鼠海马组织,以无血清培养技术培养获得神经干细胞,在BDNF诱导下让其在体外分化,7d后,通过免疫荧光技术结合图像分析技术来观察分化所得神经丝(neurofilament,NF)抗原阳性神经元的比率及其最长突起的长度。结果BDNF组分化所得细胞NF阳性率为13.66%,神经元突起长度为(146.27±26.30)μm,对照组分化所得细胞NF阳性率为9.38%,神经元突起长度为(117.00±23.98)μm,两组结果有显著性差异。结论BDNF能提高新生SD大鼠海马神经干细胞体外定向分化为神经元的比率,并且能刺激新生神经元突起的生长。
- 罗媚龙大宏谷海刚何峻峰冷水龙杨丹迪
- 关键词：神经干细胞海马脑源性神经营养因子分化神经元
