何涛
- 作品数：8 被引量：50H指数：5
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：广东省科学事业费计划项目广东省社会发展科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 镍钛尿道支架管在尿道下裂修复术中的作用被引量：17
- 2006年
- 目的探讨镍钛记忆合金尿道支架管在预防尿道下裂术后尿瘘及尿道狭窄中的作用。方法2001年1月～2004年12月,应用镍钛记忆合金尿道支架管作为尿道支架修复63例尿道下裂,其中阴茎近端型19例,阴茎阴囊型22例,阴囊会阴型8例,为一期尿道重建;尿道下裂术后尿瘘行尿瘘修补术10例;尿道下裂术后尿道狭窄再次重建尿道4例。结果63例伤口均期愈合,术后获随访2个月～2年,排尿通畅,均无尿瘘和尿道狭窄发生。其中62例于术后2～3个月后拔除尿道支架,1例于12个月后拔除。结论镍钛记忆合金尿道支架管可有效预防尿道下裂术后尿瘘及尿道狭窄的发生。
- 张金明陈小萱潘淑娟梁伟强崔永言何涛
- 关键词：尿道下裂尿瘘支架管镍钛合金支架
- 兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定
- 2005年
- 目的为构建组织工程化尿道提供种子细胞。方法切取新西兰兔阴茎头,采用组织块贴壁培养法体外原代培养,光镜、HE染色等观察细胞形态, MTT法作生长曲线间接反应细胞增殖能力,以及免疫组化法鉴定细胞本质。结果经10～14d养后,培养瓶底铺满梭状细胞,呈明显的"峰-谷"样生长。免疫组化法鉴定确认为尿道海绵体平滑肌细胞。结论兔阴茎头平滑肌细胞组织块贴壁法培养简便可靠,细胞可大量扩增,可为于组织工程尿道构建的研究提供种子细胞。
- 何涛
- 关键词：平滑肌细胞原代培养尿道细胞增殖能力新西兰兔培养法
- 肌源性干细胞分离培养及诱导分化为平滑肌细胞的研究被引量：13
- 2006年
- 目的探讨兔肌源性干细胞分离、鉴定及诱导分化为平滑肌细胞的方法。方法取1.5个月龄新西兰兔大腿肌肉,采用Preplate技术分离培养肌源性细胞,并进行流式细胞仪(FCM)、免疫细胞化学、Western blot等确定细胞表型。采用添加血管内皮生长因子(VEGF)和与兔阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)共培养的方法诱导分离而得的细胞分化为平滑肌细胞并运用免疫细胞化学和Western blot检测特异性α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果经过连续6d的差速贴壁分离得到小圆形或短梭形的小体积细胞,FCM结果显示这些细胞＞80%为desmin+,＞70%为bcl-2^+,＞95%为CD45^-。免疫细胞化学定性结果显示desmin+。高汇合度(＞50%)或低血清培养时容易融合形成肌管或肌细胞核链。诱导处理后分离的细胞表达α-SMA。结论采用Preplate技术能很好地分离出肌源性干细胞,并能在体外诱导分化为平滑肌细胞,为组织工程提供种子细胞。
- 张金明何涛黄红军
- 关键词：干细胞平滑肌细胞分化共培养
- 兔肌源性干细胞的生物学特性及表型分析(英文)
- 2008年
- 背景：骨髓间质干细胞作为种子细胞具有巨大的分化潜力和优势，但对于再生障碍性贫血或骨髓源性肿瘤等疾病的应用受限。现已发现肌源性干细胞具备与其相似的优越性，已引起相关领域研究者的注意。目的：观察兔肌源性干细胞的生物学特性，并对其进行表型分析。设计、时间和地点：细胞体外观察，于2005-08／2006-03在中山大学附属第二医院医研中心完成。材料：清洁级1．5月龄新西兰大白兔1只，增殖培养基为DMEM—LG＋体积分数0．1胎牛血清＋100gm/L血清，融合培养基为DMEM-LC＋2％胎牛血清。方法：兔麻醉后取大腿肌肉，采用差速贴壁Preplate技术分离培养肌源性干细胞，以Ⅺ胶原酶、dispase蛋白酶及胰蛋白酶分步消化，沉淀用增殖培养基重悬，接种在胶原包被的培养瓶中，该培养瓶为PP1。PP1于37℃、含体积分数为0．05的CO2培养箱中静置过夜，随后将悬液转移到另一个胶原包被的培养瓶，此为PP2。随后同法建立PP3，PP4，PP5，PP6。将PP6接种到6孔板进行融合实验，分为两组：一组使用增殖培养基培养，在汇合度超过50％后继续培养，不传代；另一组使用融合培养基进行培养，汇合度达30％时传代培养。主要观察指标：收集PP1～PP6，采用流式细胞仪、免疫细胞化学及Western Blot法鉴定细胞表型。通过不同汇合度及不同浓度血清培养，检测PP6融合情况。结果：PP6细胞〉80％为desmin^＋，〉70％为Bcl-2^＋，〉95％为CD45，提示为高浓度肌源性干细胞，随着纯化步骤的进行，α-SMA表达逐渐减弱，至高度纯化的PP6时己无α-SMA表达。PP6在高汇合度（〉50％）或低血清（仅含2％血清）培养时，极易融合成肌管或肌细胞链，骨骼肌肌球蛋白呈阳性表达。结论：肌源性干细胞具有高水平表达desmin，Bcl-2，极低水平表达CD45，不表达α-SMA的生物学特性，在高汇合度�
- 张金明何涛冀晨阳梁伟强黄红军Munnee Krishna
- 关键词：肌源性干细胞生物学特性表型
- 兔肌源性干细胞的生物学特性及表型研究被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨兔肌源性干细胞(MDSCs)的分离及特征和表型研究。方法:取1.5月龄新西兰兔大腿肌肉,采用差速贴壁分离Prep late技术,分别用Ⅺ胶原酶、d ispase蛋白酶以及胰蛋白酶分步消化肌肉,并用差速贴壁法分离晚期贴壁的细胞,流式细胞仪(FCM)、免疫细胞化学以及W estern b lotting等检测初步确定细胞表型。结果:进行连续6 d的差速贴壁分离。第3 d开始得到较多量的圆形或短梭形细胞,簇样生长,体积明显小于骨骼肌细胞及其它杂细胞,10 d左右汇合,有极强的融合生长倾向。细胞在汇合度<30%传代可较好地保持原形态,流式细胞仪检测示MDSCs>80%为desm in+,>70%为Bc l-2+,>95%为CD45-,免疫细胞化学定性示desm in+。W estern b lot-ting检测显示随着细胞的纯化,α-SMA表达越来越弱。而细胞高汇合度(>50%)或低血清培养时极易融合成肌管或肌细胞链,skeletalmyosin+。结论:MDSCs具有desm in、Bc l-2高水平表达和CD45极低水平表达的特性,具有多向分化能力的MDSCs是组织工程研究的一种新型种子细胞。
- 张金明何涛梁伟强黄红军
- 关键词：肌源性干细胞
- 骨髓间充质干细胞体外诱导分化为平滑肌细胞的实验被引量：7
- 2006年
- 目的:探讨新西兰兔骨髓间充质干细胞在体外不同条件下定向分化为阴茎海绵体平滑肌细胞的可行性。方法:实验于2004-10/2005-05在中山大学第二附属医院实验中心完成。采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞;分别通过添加血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子进行体外直接诱导以及与阴茎海绵体平滑肌细胞不同比例(据骨髓间充质干细胞与阴茎海绵体平滑肌根细胞数量比,共培养诱导分为4∶1组、2∶1组以及1∶1组。每6孔作为1个诱导组,每孔兔骨髓间充质干细胞终浓度为1×10L-1,阴茎海绵体平8滑肌细胞相应终浓度分别为0.25×10L-1、0.5×108L-1及1×10L-1)进行88共培养两种方法诱导干细胞分化为阴茎海绵体平滑肌细胞。培养2d后的细胞爬片进行荧光免疫细胞化学染色测定抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达,全程避光进行。完成染色后,立即进行激光共聚焦显微镜镜检。每孔爬片随机取5个视野,计算出每孔中Hoechst33342与FITC(Cy3)或双阳性细胞数及Hoechst33342单阳性的细胞数的比值以计算每孔的诱导率,应用SPSS软件进行完全随机设计的方差分析。结果:①阴茎海绵体平滑肌细胞的生长特性、形态及鉴定:组织块贴壁后细胞渐游出,呈梭形或长条形,原代细胞汇合90%约需16～19d,传代后生长加快,90%汇合时1∶2传代后约3d可再次传代。细胞融合时呈现典型的“峰-谷”样形态。传至10代之后细胞生长放缓,胞体渐变宽大,胞内颗粒增多。荧光免疫细胞化学检测特异性抗α平滑肌肌动蛋白抗体见绝大部分细胞呈阳性。②直接诱导以及共培养诱导的初步分析结果:骨髓间充质干细胞之细胞核标记良好,诱导后见胞浆表达多量抗α平滑肌肌动蛋白抗体,与阳性对照组相似;高倍镜下可清晰见平滑肌肌动蛋白肌丝,而阴性对照组只有核显色,无抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达。③不同组别诱�
- 张金明何涛黄红军
- 关键词：干细胞骨髓细胞生物医学工程细胞学骨髓间充质干细胞平滑肌细胞体外诱导分化
- 新西兰兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的为构建新西兰兔组织工程尿道提供种子细胞。方法取新西兰兔阴茎头,用含10%胎牛血清的高糖DMEM作体外原代培养,并行免疫组织化学法鉴定。结果经10～14d培养后,培养瓶底铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为兔尿道海绵体平滑肌细胞。结论兔阴茎头平滑肌细胞可在体外条件下生长传代、扩增,可作为构建组织工程尿道的种子细胞。
- 张金明黄红军何涛
- 关键词：平滑肌尿道海绵体体外原代培养平滑肌细胞新西兰兔免疫组织化学法构建组织工程
- 肌源性干细胞的研究进展被引量：14
- 2006年
- 骨骼肌中含有丰富的细胞成分，从原始的干细胞到终末分化的成熟细胞。近年在骨骼肌中发现了一群被称为MD—SCs（muscle-derived stem cells）的细胞群体，预期它们在组织工程应用领域特别是细胞移植和基因治疗方面前景广阔。而当某些骨髓疾患（如再生障碍性贫血或肿瘤）使得骨髓源性干细胞不敷使用时，这种干细胞更可派上用场。本文就其特征、来源、与其他干细胞群的关系及应用等问题作一综述。
- 何涛黄红军张金明
- 关键词：肌源性干细胞细胞群体细胞成分成熟细胞终末分化细胞移植
