刘家福
- 作品数：9 被引量：32H指数：4
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- 一种钩端螺旋体DNA疫苗的免疫原性和免疫保护性研究被引量：13
- 1999年
- 为了研究赖型钩体内鞭毛蛋白基因在动物体内的表达及其免疫保护性，采用ＰＣＲ扩增内鞭毛蛋白编码基因，以表达质粒ＶＲ１０１２为载体，构建了含有钩体的内鞭毛基因的重组质粒。在新西兰大白兔四头肌内注射该重组质粒ＤＮＡ５００μｇ／只，重复３次，每次间隔３周，于每次注射前和末次注射后３周，检测血清抗赖型钩体抗体效价。结果显示：在第１次加强免疫注射后３周，试验组血清抗体效价显著增高。豚鼠免疫保护试验表明，该ＤＮＡ重组质粒有明显免疫保护作用，在无佐剂条件下试验组存活率为９０％（９／１０只）。本研究为钩体核酸疫苗研制奠定了基础。
- 游自立戴保民陈庄阎和平方之茂方之茂刘家福
- 关键词：钩端螺旋体DNA疫苗免疫原性免疫保护
- 问号赖型钩体内鞭毛基因重组质粒的构建及其在大肠杆菌的表达
- 1998年
- 为了获得重组表达的钩体内鞭毛亚单位蛋白抗原，以探讨制备新疫苗的途径，利用聚合酶链反应扩增其编码基因完整的开放阅读框架，扩增产物经ＳａｌⅠ、ＣｌａⅠ双酶切消化后定向克隆于ｐＴ７－７表达载体上。重组质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）中，经ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示此产物相对分子量为３４ｋｄ，产量占细菌总蛋白的１１．８％。用插入片段为探针，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交提示可能有两个相关的基因存在于钩体的基因组内。Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交证实该表达蛋白可与内鞭毛抗血清在３４ｋｄ处出现印迹，与钩体内鞭毛同类蛋白带位置一致，本实验克隆了钩体内鞭毛Ｂ类基因并表达了相应抗原。
- 游自立戴保民方之茂李胜富刘家福
- 关键词：钩端螺旋体病基因克隆大肠杆菌
- 钩端螺旋体疏水外膜蛋白(OmpL39)对豚鼠免疫功能影响的研究
- 1999年
- 目的研究钩体蛋白抗原的免疫保护力及其机制。检定纯化的强毒０１７钩体相对分子质量为３９×１０３的疏水外膜蛋白（ＯｍｐＬ３９）对豚鼠的免疫保护力。对免疫应答期豚鼠红细胞免疫功能的变化进行观察，以期对钩体基因疫苗的研制提供依据。方法用ＴＸ－１１４抽提钩体的不同蛋白成分，分三批对３６只豚鼠进行免疫保护力试验，检测红细胞免疫功能ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ、ＲＦＥＲ、ＲＦＩＲ的变化；用χ２检验、ｔ检验处理数据，进行分析。结果ＯｍｐＬ３９在豚鼠体内能产生高效价的显凝抗体（ＭＡＴ：１３２００）。ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ均明显升高（Ｐ＜０．０５）；红细胞免疫粘附因子促进率（ＲＦＥＲ）上升，抑制率（ＲＦＩＲ）下降，两者比值显著增大（Ｐ＜０．０５）。结论ＯｍｐＬ３９对豚鼠有有效的免疫保护力，在免疫应答期除增强体液免疫外。
- 张燕华刘家福曹勇曹勇阎蓉华
- 关键词：钩端螺旋体属免疫活性免疫学
- 赖型钩体内鞭毛基因的扩增、克隆、核苷酸序列测定及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 1996年
- 根据钩体内鞭毛蛋白（Ｅｎｄｏｆｌａｇｅｌｌｉｎ）ｆｌａＢ基因核苷酸序列自行设计一对引物，以赖型钩体ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ扩增到约８４０ｂｐ的片段。扩增片段经酶切（ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ）定向克隆入ｐＵＣ８。重组质粒ｐＬＦ１插入片段与哈勒焦型钩体ｆｌａβ基因相比，核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性很高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明有一约３３ｋｄ的特异蛋白带，表达量占菌体蛋白１１％。免疫印迹试验表明此区带能被抗赖型钧体内鞭毛（轴丝）抗血清识别。首次以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠钧体病模型为基础，用含重组质粒ｐＬＦ１的大肠杆菌作免疫原进行免疫保护试验，实验组存活率高子对照组，表现了一定程度的保护作用。本研究结果在所查国内外文献中尚属首次报道。
- 陈庄戴保民阎和平李胜富赵慧业刘家福宋绍忠杨耀张云刘富先屠云人杨洪斌黄自英梁莉胡利贞赵慕愚
- 关键词：钩端螺旋体基因扩增聚合酶链反应克隆
- 钩体017株基因库pDJH_2与L．alstoni重组DNA探针同源性及pDJH_2在大肠杆菌中表达产物的分析被引量：2
- 1995年
- 用地高辛标记含完整ＯｍｐＬ１结构基因之Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ２．５ｋｂＥｃｏＲ１重组ＤＮＡ探针与我们构建的赖型钩体０１７株基因库重组质粒ｐＤＪＨ＿２进行ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交。结果显示：该重组ＤＮＡ探针与ｐＤＪＨ＿２１．９ｋｂ插入片段同源；使用ＩＰＴＧ诱导重组质粒ｐＤＪＨ＿２后，其在大肠杆菌中表达了６８ｋｄ产物。经蛋白酶Ｋ消化、免疫印迹及斑点一酶联免疫吸附试验，提示此６８ｋｂ产物是蛋内质抗原；用该６８ｋｂ蛋白质抗原主动免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，可抵抗强毒力赖型钩体０１７株的攻击，表现出对小鼠的免疫保护性，从而为赖型钩体０１７株基因工程疫苗的研制奠定了一定基础。此赖型０１７株钩体重组ＤＮＡ经ＩＰＴＧ诱导后能在大肠杆茵中表达，以及其表达产物的保护性动物试验结果，在所查国内外文献中尚属首次报道。
- 江南戴保民李胜富赵慧业刘家福宋绍忠杨耀张云屠云人杨洪彬黄自英梁莉
- 关键词：钩端螺旋体重组质粒基因表达
- 以λgt11作载体构建赖型钩体基因文库及其重组质粒pDL121的克隆和在E.coli表达的研究被引量：4
- 1997年
- 为探讨赖型钩体抗原基因特点及其表达产物作为疫苗的可行性，采用问号赖型０１７株钩体经ＨｈａⅠ和ＡｌｕⅠ限制性内切核酸酶部分消化，行ＥｃｏＲⅠ限制酶切位点甲基化，加上ＥｃｏＲⅠ接头与去磷酸化的λｇｔ１１ＤＮＡ－ＥｃｏＲⅠ臂连接，体外包装后转染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０，建成含２．１×１０６重组子的问号赖型０１７株钩体基因文库。用抗赖型钩体兔血清从上述基因文库中筛选出一个强阳性克隆，λＤＬ１２，亚克隆入ｐＵＣ１８质粒，获重组质粒，ｐＤＬ１２１。ＥｃｏＲⅠ酶切证实该重组质粒含有１ｋｂ的外源插入片段。ｐＤＬ１２１经ＩＰＴＧ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现２３ｋｄ特异条带。免疫印迹表明该蛋白带可被抗赖型钩体兔血清识别。
- 刘洪斌戴保民敬保迁伍卫华敬保迁方之茂李胜富叶丹霓阎蓉华刘家福杨耀阎蓉华刘富先刘家福屠云人张云黄自英梁莉胡利贞赵慕禺
- 关键词：钩端螺旋体基因文库重组质粒分子克隆
- 缓释伤寒荚膜多糖微球疫苗免疫动物的实验研究被引量：10
- 2003年
- 用 PEL A为材料包裹伤寒沙门菌荚膜多糖 ,制成缓释微球疫苗 ,分别以口服及皮下注射的方式免疫BAL B/ C小鼠 ,分别在第 2 ,4 ,8周取血 ,收集唾液 ,用 RIA方法检测血清中 Ig G抗体及唾液中 s Ig A抗体效价。第 8周腹腔注射伤寒沙门菌活菌攻击各组免疫动物 ,计算免疫动物保护率。单剂微球疫苗皮下注射比常规液体疫苗更有效地诱导全身免疫应答 (P<0 .0 5 ) ,而口服微球疫苗组和微球疫苗皮下注射组均可诱导较强粘膜免疫 (P<0 .0 5 )。动物保护力实验表明 ,口服微球疫苗组免疫保护率 4 0 % ,微球疫苗皮下注射组免疫保护率为 10 0 % ,常规液体疫苗免疫保护率为 6 0 %。缓释伤寒荚膜多糖微球疫苗具有在体内释放速度慢 。
- 杨春阎容华曾蔚张燕华贾文祥刘家福周绍兵李孝红邓先模
- 关键词：免疫动物伤寒
- 问号赖型钩体重组质粒pDJH_2 DNA 序列测定及其与其它细菌omp基因序列比较分析被引量：2
- 1996年
- 对ｐＤＪＨ２片段ＤＮＡ进行了序列测定，结果：插入片段为１８１１个核苷酸；可读框２个：ＯＲＦ１，１－５６５ｂｐ；ＯＲＦ２（从最后一个密码倒算）１－６６２ｂｐ，计算机序列同源性或类似性匹配（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）表明，ＯＲＦ１与ＯＲＦ２的核苷酸类似性为４９．３６％；ＯＲＦ１与Ｌ．ｋｉｒｓｃｈｎｅｒｉ（Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ）流感伤寒型ｏｍｐ核苷酸序列类似性为４９．２６％；ＯＲＦ２与Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ类似性为５１．５６％；ＯＲＦ１与其它细菌（包括螺旋体）ｏｍｐ核苷酸序列对准比较，序列类似性均在４３％以上。经查阅ＥＭＢＬＤＮＡ序列数据库未见类似序列。作者认为ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂ插入ＤＮＡ片段（ＯＲＦ１与ＯＲＦ２）可能是具有保护作用的ｏｍｐ基因片段。
- 江南戴保民鄢正新杨文天杨文天方之茂李胜富伍卫华方之茂阎蓉华刘家福伍卫华张云刘富先阎蓉华屠云人刘家福黄自英梁莉胡利贞赵慕愚
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白基因
- 问号状钩端螺旋体OmpL_(39)的表达和免疫保护力检定的研究被引量：1
- 1998年
- 本文报道了纯化的强毒O17钩体39kd疏水外膜蛋白（OmpL39）在问号状钩体中的表达和对豚鼠的免疫力进行正规检定的研究。结果表明，OmpL39编码基因在问号状钩体中均有表达，但表达的量有所不同，强毒株明显多于弱毒株，同时，其抗原性也有较大差异。参照卫生部《中国生物制品规程》制造和检定钩体疫苗规程，对36只豚鼠进行三批随机对照试验。结果表明，OmpL39在豚既体内能产生高效价的阳性抗体，免疫力判定合格。经统计学处理：OmpL39组与生理盐水阴性对照组的免疫力有显著差异（P＜0．05），OmpL39组与阳性对照死菌苗组的免疫保护户相当，无显著差异（P＞0.05），OmpL39显示出极强的完全性免疫保护作用。本研究表明，赖型钩体O17株外膜免疫保护性抗原的分离，纯化有了新的进展，研究OmpL39编码基因和高效表达OmpL39研制新型口服OmpL39靶向控释基因疫苗已是较现实的目标。
- 张燕华曹勇向红刘家福闫蓉华
- 关键词：钩端螺旋体基因表达免疫保护力
