刘文浩
- 作品数：45 被引量：113H指数：6
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛流行热病毒山东流行株G基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2012年
- 为了解牛流行热病毒(BEFV)山东流行株G基因的特点,从临床病料中获得山东流行株牛流行热病毒的G基因,并对其进行序列测定和分析。参考GenBank中牛流行热病毒的G基因序列,设计并合成一对特异性扩增G基因引物进行PCR,扩增目的片段,并克隆于pEASY-T3载体上,筛选阳性重组质粒进行序列测定,用MEGA软件、NJ法构建进化树。结果显示,该流行毒株G基因与GenBank中其他BEFV株G基因的核苷酸推导氨基酸的同源性均大于96%;遗传进化关系分析结果表明,BEFV山东流行株与中国台湾流行株具有较高同源性和较近的亲缘关系。
- 侯佩莉杨宏军王洪梅刘文浩何洪彬
- 关键词：牛流行热病毒G基因
- 人MxA基因的原核表达及其抗血清的制备被引量：1
- 2013年
- 本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达MxA融合蛋白pET32a(+)-MxA,制备兔抗人MxA抗血清。采用PCR技术获得MxA基因,然后将MxA基因重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21(DE3)培养物,纯化蛋白质后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析结果显示,pET32a(+)-MxA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6400;West-ern blotting检测结果显示,抗血清可与真核表达的MxA蛋白进行特异性结合。试验结果表明,在大肠杆菌中成功表达了pET32a(+)-MxA融合蛋白,制备了具有高度特异性的兔抗人MxA抗血清,这样为采用酶标法测定病毒患者全血细胞或由干扰素诱导的细胞产生的MxA蛋白质含量及临床诊断试剂盒的开发和应用打下了基础。
- 辛婷婷王洪梅刘文浩孙涛王立群何洪彬
- 关键词：MXA原核表达抗血清
- 利用锌指核酸酶敲除牛整合素β6亚基基因的方法
- 本发明公开了一种利用锌指核酸酶(ZFNs)敲除牛整合素β6亚基基因的方法，其是根据牛整合素β6基因序列，设计可特异性识别该基因的锌指核酸酶ZFNs，构建表达载体并转染牛的细胞，如成纤维细胞，获得整合素β6亚基基因敲除的细...
- 何洪彬武建明王洪梅刘晓刘文浩方永志仲跻峰
- 文献传递
- 中国荷斯坦牛白细胞黏附缺陷症PCR-RFLP检测方法的研究被引量：7
- 2007年
- 本试验根据已知牛染色体上CD18编码基因序列设计引物,提取牛血液和精液DNA,可扩增出338bp的DNA片段,将PCR产物克隆到pMD18-T载体中,对阳性重组质粒进行测序,确定为牛的CD18基因。由于CD18基因的383位碱基由A变为G,而引起牛白细胞黏附缺陷症(BLAD),通过对济南市11个奶牛场356头奶牛及53头荷斯坦种公牛进行了BLAD的PCR-RFLP检测,共检出3头杂合母牛(携带者),占检测母牛群的0.84%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者。
- 王洪梅李建斌许尚忠高运东张秀红刘文浩仲跻峰
- 关键词：荷斯坦牛PCR-RFLP测序
- 牛黑素皮质素受体1(MC1R)基因与毛色表型的研究被引量：17
- 2007年
- 牛MC1R基因不仅与毛色有关,而且与牛乳中乳蛋白的含量有关。利用PCR-RFLP和DNA测序技术分析了中国荷斯坦黑白花牛,中国荷斯坦红白花牛,鲁西黄牛和渤海黑牛共4个品种的MC1R基因。共检测出3种等位基因(ED,E+,e)。中国荷斯坦黑白花牛主要是ED和E+等位基因(ED=0.12、E+=0.80);渤海黑牛也主要是ED和E+等位基因(ED=0.52、E+=0.47);中国荷斯坦红白花牛和鲁西黄牛大多为e等位基因(e=0.95)。中国荷斯坦红白花牛和鲁西黄牛还存在E+/e基因型。由此推测ED和E+等位基因导致黑色素合成。另外发现牛MC1R基因编码区725处存在一重要的SNP(单核苷酸多态性)。
- 甘海云李建斌王洪梅高运东刘文浩李景鹏仲跻峰
- 关键词：MC1R基因
- 与奶牛血液β-羟丁酸浓度相关的分子标记及应用
- 本发明属于奶牛酮病抗性育种技术领域，涉及与奶牛血液β‑羟丁酸浓度相关的分子标记及应用，所述分子标记包括位于UBA6基因上的SNP位点g.66266G>T。本发明提供了与奶牛血液β‑羟丁酸浓度相关的分子标记及应用，提...
- 鞠志花石雨生王金鹏刘文浩魏晓超高亚平杨春红肖遥张亚冉黄金明
- 文献传递
- 白山羊COC细胞质密度对卵母细胞体外培养成熟率和体外受精率的影响
- 1997年
- 按白山羊卵丘细胞—卵母细胞复合体（ＣＯＣ）的细胞质密度的不同，将其分成Ａ、Ｂ两个级别：Ａ级ＣＯＣ细胞质特别致密；Ｂ级ＣＯＣ细胞质比较致密。将Ａ级和Ｂ级ＣＯＣ分别放入相同的环境条件下培养２４～２６小时。Ａ、Ｂ两级ＣＯＣ的卵母细胞成熟率差异极显著（ｔ＝３．１６２５，Ｐ＜００１）。表明白山羊ＣＯＣ的细胞质密度与卵母细胞体外培养成熟率呈极显著正相关。Ａ级和Ｂ级ＣＯＣ经体外成熟培养后，其成熟卵母细胞的体外受精率差异不显著。
- 宋杰仲跻峰高运东王文英王庆国刘文浩
- 关键词：山羊卵丘细胞体外受精
- 牛尿苷酸合酶缺乏症PCR-RFLP检测方法的研究被引量：1
- 2006年
- 本研究通过PCR-RFLP建立了直接利用基因组DNA检测尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)突变的方法。对济南市6个奶牛场224头奶牛及53头荷斯坦种公牛进行了DUMPS的PCR-RFLP检测,共检出2头杂合母牛(携带者),杂合子占检测母牛群的0.89%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者。实验证明,该方法重复性好、灵敏性高、稳定性可靠。
- 王洪梅李建斌高运东韩波刘文浩仲跻峰
- 关键词：荷斯坦奶牛PCR-RFLP
- 一种鉴定牛TDP-43基因启动子活性区域的方法
- 本发明涉及一种鉴定牛TDP‑43基因启动子活性区域的方法，包括以下步骤：(1)牛TDP‑43基因启动子的克隆；(2)牛TDP‑43启动子5’端系列缺失片段荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定；(3)牛TDP‑43基因启动子系...
- 张亚冉张清兰王金鹏鞠志花肖遥杨春红王秀革魏晓超高亚平姜强刘文浩黄金明
- 牛主要遗传代谢病PCR-RFLP检测方法的建立与应用
- 牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)、尿苷酸合酶缺乏症(Deficiency of Uridine Monophophate Synthase,DUMPS)、红细胞生成性卟啉症(Erythropoietic ...
- 王洪梅刘文浩李建斌王长法何洪彬仲跻峰
- 关键词：基因突变PCR-RFLP
- 文献传递
