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基于生物质谱的乙酸酐稳定同位素标记定量蛋白质组学方法的建立与优化被引量：4: 2007年; 建立了一种基于生物质谱的乙酸酐稳定同位素标记,定量蛋白质组学研究方法,优化了影响标记效率的各种条件。在pH8.0的Na2B4O7/H3BO3缓冲体系中,当乙酸酐摩尔浓度25倍过量于肽段摩尔量,22℃反应30 min时,标记即可完全。对多对H6/D6-乙酸酐标记肽段在基质辅助激光解吸电离质谱中的动态范围及定量准确度进行了考察,并通过串联质谱分析确定了乙酰化位点。结果表明:在10倍和30倍动态范围内,线性关系良好(r=0.99,r=0.98),理论值和观测值的偏差分别为0.5%和20%。; 刘新应万涛周春喜蔡耘钱小红; 关键词：定量蛋白质组学生物质谱

同系物标记结合凝胶电泳和质谱技术用于蛋白质N端肽鉴定及相对定量被引量：1: 2008年; 通过酸酐同系物标记蛋白质的N-末端,经过凝胶电泳分离,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪进行鉴定,建立了一种基于化学标记和质谱技术的、用于蛋白质的N-末端鉴定和相对定量新方法。标记后的蛋白质的N端肽以相差14 Da的成对峰形式在质谱中出现,而非N-末端肽则是以单峰呈现,从而实现了末端肽的特异性识别;通过端肽的信号强度对3种标记蛋白质的不同比例的混合溶液实现了相对定量分析。; 赵丽艳周春喜张养军刘新蔡耘钱小红; 关键词：化学修饰电泳分离蛋白质组学

比较蛋白质组学研究中的稳定同位素标记技术被引量：3: 2007年; 比较蛋白质组学是指在蛋白质组学水平上研究正常和病理情况下细胞或组织中蛋白质表达变化,以期发现具有重要功能的生物标识物,为疾病的早期诊断提供依据。近年来它正成为蛋白质组学研究的热点和发展趋势。比较蛋白质组学的研究方法和策略有多种,本文就最近几年来稳定同位素标记技术(体内代谢标记技术和体外化学标记技术)在比较蛋白质组学研究中的进展进行综述。; 刘新应万涛钱小红; 关键词：比较蛋白质组学

基于乙酰化稳定同位素标记—液相色谱—傅立叶变换离子回旋共振质谱联用的定量蛋白质组研究策略的建立、评价与应用: 本研究目的是开发一整套具有自主知识产权的基于稳定同位素标记和液质联用的蛋白质组学定量新策略，实现高通量，高准确性，高灵敏度的蛋白质组学定量分析，用来克服商业化试剂存在的不足，摆脱对于商业化标记试剂的依赖性。首...; 刘新; 关键词：蛋白质组学; 文献传递

应用超高分辨双向凝胶电泳技术进行正常人类肝脏蛋白质组研究被引量：1: 2010年; 肝脏是人体最大的实质器官,承担着人体许多关键的生理功能,在生命活动中占有重要地位.根据人类肝脏蛋白质组计划,本实验旨在构建人肝脏蛋白质双向凝胶电泳表达谱,尽可能分离和鉴定更多的蛋白.在双向凝胶电泳第一向等电聚焦水平上,从上样方式、水化液配方、聚焦时间等方面优化了碱性蛋白的分离条件,利用超放大胶分离技术搭建了高分辨的双向凝胶电泳分离平台,构建了人类肝脏蛋白质2-DE参考谱,检测到5481个蛋白质点.这是目前国际上最为全面的人体器官蛋白质组2-DE参考谱,为其他肝病的研究提供了较好的参照系.成功鉴定了429个非冗余蛋白,对pH4.0～7.0,5.0～6.0,5.5～6.7,6.0～9.0部分蛋白质点在胶上进行了注释,由此构建了人肝2-DE蛋白质表达谱数据库.对蛋白质的理化性质、功能及亚细胞定位进行了全面分析.研究中构建的人类肝脏蛋白质2-DE图谱将为肝脏比较蛋白质组学研究提供参考.; 米薇刘新贾伟李蕾蔡耘应万涛钱小红; 关键词：双向凝胶电泳质谱

乙肝纤维化分级相关血浆蛋白标志物的定量蛋白质组筛选被引量：5: 2011年; 非创伤性肝纤维化检测对于评价肝炎进程、临床治疗以及药效评价等方面,都具有非常重要的作用.通过N末端标签的蛋白质组定量手段,从血浆中筛选肝纤维化分级相关的蛋白候选标志物.首先利用目前纤维化诊断黄金标准——肝穿病理检测,获得纤维化不同分级的合格样本血浆,并对肝纤维化各级间的血浆混合样本进行了蛋白质组定量比较分析,发现了72个与乙肝纤维化分级呈明显相关性的血浆蛋白,构成了一个有重要参考价值的、纤维化分级诊断的候选蛋白标志物库.用WB法进一步验证了定量结果的准确性.利用IPA在线分析后获得了4个生理代谢网络图,提示这些差异蛋白在肝纤维化进程中代表的不同功能影响.总之,利用N末端标签定量蛋白质组技术,全面定量挖掘了血浆中与乙肝纤维化分级相关的差异蛋白及变化规律,对于加深肝纤维化发病机制的认识和理解具有很大帮助,同时也为肝脏纤维化临床诊断和治疗提供有益信息和参照.; 李树龙刘新魏来王慧芬张继阳魏汉东钱小红姜颖贺福初; 关键词：定量蛋白质组学肝脏纤维化标志物血浆乙型肝炎

^(18)O稳定同位素标记定量蛋白质组研究技术的建立与优化被引量：11: 2007年; 建立了18O稳定同位素标记方法,用于复杂体系蛋白质相对定量分析。对影响蛋白质标记稳定性的实验条件进行了比较和优化。结果表明,采用酶切后标记的方法,酶切肽段在胰酶催化下,在pH 5.0的K2HPO4/KH2PO4缓冲体系中,37℃18O标记反应16 h,绝大部分肽段即可达到100%的标记效率。对多个16O/18O成对肽段峰强度的动态范围及定量准确度进行了考察。结果表明,18O标记方法是一种简便、稳定、可靠的相对定量方法,10倍动态范围内,标记率相对标准偏差在18.4%以内,16O/18O峰强度呈很好的线性关系。本实验考察了标记后的肽段在不同溶液体系中的稳定性,为复杂样品的预处理和预分离的溶液条件提供了依据。; 钱林艺应万涛刘新卢庄蔡耘何建勇钱小红; 关键词：定量蛋白质组学质谱液相色谱

液相色谱串联质谱和气相分段扫描用于人肝脏蛋白质组表达谱研究: 针对复杂体系蛋白质混合物的蛋白质组表达谱研究,利用二维全蛋白或多肽水平的分离手段和质谱鉴定结合如2-DE-MALDI-TOF-TOF/MS和二维shotgun分析,已难以提供足够的分辨能力。最近几年来,涌现出了更多维的蛋...; 应万涛巩燕李蕾刘新陈明杨兵蔡耘钱小红; 文献传递

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刘新