刘秀明
- 作品数：116 被引量：256H指数：10
- 供职机构：吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金高等学校科技创新工程重大项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)被引量：5
- 2011年
- 【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。
- 付宏岐李海燕庞实锋杨晶李洪志薛萍刘秀明李营王艳芳李校堃
- 关键词：农杆菌生物反应器番茄
- 去除选择标记基因的Cre/lox重组系统在植物中的应用被引量：2
- 2009年
- 获得无选择标记基因的转基因植物越来越受到研究者的重视。目前,应用得较广泛的去除选择标记基因的方法有共转化法和位点特异性重组法,其中位点特异性重组系统中Cre/lox重组系统研究最多。以下介绍了Cre/lox位点特异性重组系统的原理、特点及其近几年在植物中的应用,针对本实验室在这一领域的研究情况,重点阐述了Cre/lox系统的应用前景。随着植物反应器研究领域的不断壮大,去除筛选标记基因是植物反应器研究的必然趋势。
- 刘秀明孟欣欣李海燕杨晶付宏歧李校堃
- 关键词：转基因植物
- 利用苜蓿作为生物反应器生产天蚕素抗菌肽的方法
- 本发明公开了一种抗菌肽天蚕素B（CB）及杂合抗菌肽天蚕素B（CB<Sub>2</Sub>、CB<Sub>3</Sub>），在植物表达体pCAMBIA1390中插入了CaMV35S启动子，获得pCAMBIA1390R；分别...
- 刘秀明李海燕李校堃杜淑环万秋
- 文献传递
- 高温胁迫对刺芹侧耳菌丝生长及其抗棘孢木霉能力的影响被引量：19
- 2017年
- 耐高温性是食用菌抗逆性评价的重要指标。选取5个刺芹侧耳菌株为材料,通过观测常温培养和高温胁迫后恢复培养菌落的生长速率、生长势、恢复生长时间、菌丝显微形态特征以及受棘孢木霉侵染情况,研究高温胁迫对刺芹侧耳菌丝生长及其抗棘孢木霉侵染能力的影响。结果表明,刺芹侧耳不同菌株对高温胁迫的响应存在差异。供试PDA培养的菌丝经高温胁迫(37℃,2d)后,菌丝恢复生长时间2–3d,生长势变壮或无变化,顶端菌丝细胞长度、直径、菌丝体分支频率和菌丝生长速率等均呈现不同程度的降低。菌丝生长速率变化与其抗棘孢木霉能力的下降呈正相关。在此基础上,模拟生产试验发现,长满菌丝的菌棒经高温胁迫(35℃,7d)后,接种棘孢木霉菌丝的侵染率变为100%,接种棘孢木霉孢子的侵染率变为30%;未经高温胁迫的菌棒,接种棘孢木霉孢子/菌丝,未发生侵染。本研究表明,高温胁迫导致刺芹侧耳菌丝抗棘孢木霉侵染能力的下降。本研究将为科学指导食用菌菌种繁育、菌棒生产提供数据支撑,为食用菌育种提供基础数据。
- 刘秀明邬向丽陈强仇志恒张金霞黄晨阳
- 关键词：杏鲍菇高温胁迫
- 利用植物系统表达重组蛋白的研究进展被引量：3
- 2010年
- 植物是可以生产不同生物药剂品的成本低廉的生物反应器,综述了稳定转化系统、瞬时表达系统以及叶绿体基因组转化方法,这三种不同的植物表达系统的特点和研究现状,并对其存在的问题及未来的前景进行了分析。
- 江莺刘秀明杜美丽朱海林李巍李海燕李校堃
- 关键词：叶绿体转化重组蛋白
- 一种含有血管内皮生长因子活性多肽的植物油体护肤乳液
- 本发明公开了一种含有血管内皮生长因子活性多肽的植物油体护肤乳液，利用镶嵌于油体表面的油体蛋白与血管内皮细胞生长因子的融合表达产物可直接作为活性成分用于护肤品的开发，简化了血管内皮生长因子与乳化剂（或保护剂）混合的加工工艺...
- 李校堃李海燕杨晶官丽莉郭咏昕王法微杜林娜王艳芳王南董圆圆刘秀明姚娜冯鹤齐玉红
- 文献传递
- CD20片段抗体在红花悬浮细胞中的表达研究被引量：2
- 2017年
- 【目的】研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件,并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体。【方法】以红花子叶为外植体,研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响,筛选优质愈伤组织进行悬浮培养,探索不同初始接种量、蔗糖质量分数、水解酪蛋白质量浓度对红花悬浮细胞生长的影响。将CD20复合片段抗体基因两端引入XmaⅠ/EcoRⅠ酶切位点,并将其与pEASY-T1和pBasta载体相连,构建pEASY-T1-CD20克隆载体和pBasta-CD20表达载体,再将构建的pBasta-CD20表达载体转入根瘤农杆菌,利用根瘤农杆菌介导红花悬浮细胞转化法表达CD20复合片段抗体。【结果】红花子叶愈伤诱导最佳条件为MS+NAA 2mg/L+6-BA 0.5mg/L、温度(25±0.1)℃、光照70μmol/(m2·s)连续光照,继代培养条件为MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、30μmol/(m2·s)连续光照、温度(25±0.1)℃。悬浮细胞体系培养最佳条件为不加琼脂粉的MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、接种量2.5g(50mL培养基)、蔗糖质量分数2%、水解酪蛋白800mg/L。pBastaCD20表达载体构建成功,且目的蛋白在红花悬浮细胞中成功表达。【结论】成功构建了红花悬浮细胞培养体系,并用该体系成功表达了CD20复合片段抗体。
- 王立勇刘秀明张玲姚娜王德仲历雯清蔡静波李海燕姜潮
- 关键词：悬浮细胞农杆菌介导
- 红花遗传转化受体系统的建立及转酸性成纤维细胞生长因子aFGF的初步研究被引量：13
- 2010年
- 目的:将aFGF与红花的油体蛋白融合,转入红花中,直接通过提取红花油来实现红花与aFGF的双重功效。方法:以不同日龄的红花子叶为外植体,采取正交试验设计的方法,摸索出红花再生体系的最佳条件。然后通过农杆菌介导法将aFGF基因转入到红花中,对不同浓度的抗生素进行筛选,进行PCR鉴定,计算阳性率。结果:根据不同的激素配比,确定了红花分化的最佳培养基为MS+BA1.0 mg.L-1+NAA0.2 mg.L-1;生根的最适培养基为1/4 MS+NAA2.0 mg.L-1+IAA0.5 mg.L-1。3种不同种类和浓度的抑菌抗生素对红花浸染后的抑菌效果略有不同,结合抑菌效果,污染率,芽的分化率以及成本问题等因素的综合考虑,抑菌抗生素选择用Tim,质量浓度为400 mg.L-1即可抑制细菌的生长,同时有利于芽的分化;hyg的筛选压力则选择6 mg.L-1为它的临界浓度;对8棵转化植株进行鉴定,阳性率为25%。结论:通过器官发生途径,确定出红花分化与生根的最佳激素组合与配比,建立了红花的再生体系;确定出最适的抑菌抗生素与筛选抗生素的浓度;经过筛选获得的再生植株,通过PCR检测,部分扩增出aFGF目的基因,证实了aFGF基因整合到红花基因组中。这为红花作为植物生物反应器的研究奠定了扎实的基础。
- 杨晶李海燕付宏歧刘秀明李校堃
- 关键词：红花AFGF
- 拟南芥表达植物油体蛋白-角质细胞生长因子-2融合蛋白的研究
- 随着新功能基因的分离、克隆以及各种农作物高效表达技术平台的逐步建立,植物反应器的研究越来越深入。本实验利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达植物油体蛋白-角质细胞生长因子-2(Keratino...
- 王兰李校堃王德仲杨晶官丽莉王艳芳刘秀明夏继桥李海燕姜潮
- 关键词：拟南芥角质细胞生长因子-2
- 含有aFGF的植物油体凝胶剂
- 本发明分开了油体的凝胶基质，它是由以下述组份按重量%组成：羧乙基纤维素1%—5%、甘油5%—40%、尼泊金甲酯0.01%—0.1%、尼泊金丙酯0.01%—0.1%、加注射用水至100%；它可以混入30%的植物油体，制成的...
- 李校堃李海燕官丽莉杨晶王法微姜潮杜林娜王艳芳董园园姚娜刘秀明王南
- 文献传递
