周帅
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
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- 表面表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白枯草芽孢的免疫原性被引量：1
- 2014年
- 目的 构建表面表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白（NAP）的重组枯草芽孢,并鉴定其免疫原性.方法 以构建的pGEX-4T-1-NAP质粒为模板,采用特异性引物扩增幽门螺杆菌NAP基因,与构建的以枯草芽孢外衣蛋白Cotc融合表达的质粒Pus186-Cotc连接,转化枯草杆菌WB600,提取质粒进行酶切、测序鉴定.应用营养耗竭法诱导枯草芽孢生成,提取重组芽孢外衣蛋白进行电泳及免疫印迹分析,并使用NAP特异性抗体免疫荧光检测芽孢表面重组蛋白的表达.以普通芽孢作为对照组,使用表面表达NAP的重组枯草芽孢口服免疫小鼠,ELISA法检测小鼠免疫后0、15、30、45 d的NAP特异性血清IgG水平,判断重组芽孢免疫原性.结果 以pGEX-4T-1-NAP质粒为模板,扩增了NAP基因,并成功克隆入Pus 186-Cotc质粒,重组Pus 186-Cotc-NAP双酶切鉴定可见435 bp目的片段,测序结果显示NAP在正确读框中.营养耗竭法可诱导重组枯草芽孢生成,产量达1×10^11/L,提取芽孢外衣蛋白电泳见相对分子质量25 600的目的条带.免疫印迹显示使用NAP特异性抗体在相应相对分子质量25 600可见识别带.并且使用NAP特异性抗体可检测到重组芽孢免疫荧光,表明NAP在芽孢表面成功表达.与对照组相比,NAP重组芽孢口服免疫小鼠15d后,NAP特异性IgG升高即达高峰,30、45 d后一直维持在高峰平台期（均P＜0.05）,表明重组芽孢具免疫原性.结论 成功构建了表面表达NAP的枯草芽孢工程菌,重组芽孢口服免疫小鼠具免疫原性,为幽门螺杆菌枯草芽孢疫苗的研制提供了依据.
- 周珍文姚淑雯关锐梨周帅谢永强陈吟霜钟华敏黄莲芬杨镒宇龚四堂
- 关键词：中性粒细胞激活蛋白免疫测定
- 金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：5
- 2016年
- 目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。
- 李飞周帅董慧黄艳梅梁秉绍李娟龙燕王洁琳谢永强杨镒宇周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B克隆
- 金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及原核表达被引量：4
- 2012年
- 目的从分离培养的金黄色葡萄球菌中提取肠毒素A(SEA)基因,亚克隆入表达载体pET-28a(+),诱导融合蛋白的表达,为肠毒素A应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEA的序列,设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增SEA,纯化DNA进行BamHⅠ、XholⅠ双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21,并对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达。结果以金黄色葡萄球菌DNA为模板,成功扩增了SEA基因,基因大小为774bp,重组PET-28a(+)-SEA双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEA在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.9%。经IPTG诱导后,SDS-PAGE可见pET-28a(+)-SEA/BL21在相应分子量(约30000Mr)条带大量表达,免疫印迹能检测到目的蛋白条带,说明其与His标签融合表达。结论克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为肠毒素A应用研究奠定了基础。
- 周帅杨镒宇张妙莲关锐梨邓秋连谢永强容莉莉邓力周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A克隆
- 金黄色葡萄球菌EsxA基因的克隆及表达被引量：5
- 2015年
- 目的在原核质粒中克隆金黄色葡萄球菌(S.aureus)Esx A基因,并进行表达及纯化,为其功能研究奠定基础。方法根据Gene Bank中S.aureus Esx A序列,设计特异性引物PCR扩增Esx A基因,PCR产物纯化后经Eco RΙ和XhoΙ双酶切,连接至p ET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,His柱纯化重组Esx A蛋白,SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白的表达。结果成功克隆Esx A基因,基因全长294 bp,起始于ATG,终止于TAA,预测的分子量为11 036.2,等电点为4.61,经双酶切在294 bp处可见目的条带,基因测序显示Esx A在正确阅读框内,提示重组蛋白构建成功。SDS-PAGE显示重组蛋白在分子量大约14.5×103 Mr处左右见到可溶性的蛋白表达,Western blot分析识别14.5×103 Mr重组蛋白。结论在大肠杆菌中成功克隆表达Esx A蛋白,为其功能研究奠定基础。
- 黄艳梅周帅陈吟霜谢永强龙燕邓秋莲杨镒宇周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆原核表达
- 代谢综合征及其组分和泌尿系结石相关性的循证医学研究
- 【背景】 泌尿系结石在泌尿外科中是最常见的与高发的疾病，在泌尿外科住院病人中占居榜首。不管是国外还是我国国内，泌尿系统结石疾病的发病率都是一直不断上升的，尽管我国总体泌尿系结石发病率1%-5%较之国外的发病率明显低，但...
- 周帅
- 关键词：糖尿病高血糖代谢综合征泌尿系结石循证医学
- 文献传递
- 脓毒血症患者血液分离金黄色葡萄球菌毒素基因的检测被引量：3
- 2014年
- 目的了解脓毒血症患者金黄色葡萄球菌(SA)血液分离株毒素基因的携带情况。方法对从临床标本分离出的50株SA,设计特异性引物,PCR扩增sea、tsst-1、eta和hlg毒素基因。结果 50株SA中有44株携带以上毒素,占88%,各基因携带率分别为sea 42%(21/50)、tsst-1 52%(26/50)、eta 30%(15/50)、hlg 22%(11/50),同时携带2种及2种以上毒素的占44%(22/50),其中11株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)毒素携带率为100%(11/11),以sea为主,占90.91%(10/11),甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)39株毒素携带率79.49%(31/39),以tsst-1为主,占48.72%(19/39)。结论临床脓毒血症患者SA大部分携带毒素,MRSA的带毒率高于MSSA,表明MRSA致病性及毒性高于MSSA,临床需重视MRSA监控,合理使用抗生素,有效控制院内感染。
- 陈吟霜周帅杨镒宇谢永强钟华敏黄莲芬姚淑雯周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌毒素基因
- 原核表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白及其对小鼠哮喘的预防研究
- 目的：本研究旨在构建中性粒细胞激活蛋白原核表达质粒，通过原核表达获得纯化重组幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白;以卵清蛋白（OVA）诱导小鼠建立哮喘动物模型;并使用重组HP-NAP(rNAP)对模型小鼠进行干预，探索重组HP-...
- 周帅
- 关键词：哮喘幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白免疫调节
- 文献传递
