唐龙盘
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华侨大学更多>>
- 发文基金：福建省高校产学合作科技重大项目国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学自动化与计算机技术更多>>
- 甘油脱氢酶基因在大肠杆菌中的密码子优化表达被引量：3
- 2011年
- 【目的】利用密码子优化技术,提高甘油脱氢酶基因gldA在大肠杆菌中的表达水平。【方法】针对gldA起始密码子下游区域,优先选择AT含量最高的同义密码子,从而在不改变氨基酸序列的前提下,提高该区域的AT含量。利用大引物PCR的方法对野生型gldA-WT进行定点突变,获得优化型基因gldA-4,与pET-32a(+)连接后,构建表达质粒pET-gldA-4,转入E.coli BL21(DE3),得到工程菌E.coli-4。同时,设定包含gldA-WT的工程菌E.coli-WT作为对照,摇瓶发酵后,以甘油为底物检测比较表达产物的酶活力。【结果】gldA-4相对gldA-WT而言,改变了第2、5、6位密码子中的4个碱基,AT含量从53.3%提高到80.0%。相应地,E.coli-4的粗酶液的酶活力为191.3 U/mL,比E.coli-WT的48.3 U/mL提高了3倍多。【结论】本优化方案简便、快捷,但可明显提高甘油脱氢酶的酶活力,有望成为改善目的基因异源表达水平的一种通用方法。
- 唐龙盘余劲聪戴丹凤方柏山
- 关键词：甘油脱氢酶异源表达密码子优化大肠杆菌
- 起始密码子下游区域AT含量优化工具BestAT的开发与应用
- 2012年
- 基因的表达水平受到起始密码子下游区域AT含量的影响,从巨大的序列集中筛选出具有特定AT含量和密码子用法特征的同义序列是一个繁琐的工作。本文研发AT含量优化工具"BestAT",初步解决了自动获取海量同义序列和充分展示同义序列的密码子用法特性两个关键问题,并且实现了与密码子用法数据库(CUD)的无缝结合,采用了密码子参数的原位标示和AT含量曲线等直观方式展示序列特性,为这类实验设计提供有力的支持。
- 余劲聪唐龙盘方柏山
- 关键词：密码子优化甘油脱氢酶
