夏晓玲
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：盐城卫生职业技术学院更多>>
- 发文基金：盐城市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 十二指肠钩虫ASP-2基因密码子优化及在大肠杆菌中高效表达被引量：3
- 2014年
- 目的:获得十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)分泌蛋白2(mAd-ASP-2)编码基因,构建其高效表达的大肠杆菌表达体系。方法:以RT-PCR的方法得到克隆了编码mAd-ASP-2的成熟肽全基因序列,克隆入原核表达载体pET-22b(+)中,组装成表达载体pET-22b-mAd-ASP-2。利用大肠杆菌偏爱密码子和GenScript rare codon analysis软件获得优化密码子优化的mAdASP-2*基因序列并人工合成该基因,将其克隆入原核表达载体pET-22b(+),组装成表达载体pET-22b-mAd-ASP-2*。将这2个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株Rosetta-gami-2(DE3)中,经IPTG诱导表达。结果:同样条件下,密码子优化的mAd-ASP-2*基因比优化前能够获得较高的表达,且以可溶形式存在。利用His Trap HP亲和柱获得了纯化的重组蛋白mAd-ASP-2*,确定了纯化重组蛋白咪唑洗脱液最佳浓度为200 mmol/L。Western blot分析结果进一步显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag抗体发生特异性结合,说明表达蛋白为目的蛋白。结论:通过密码子优化实现了十二指肠钩虫ASP-2的高效表达,为进一步研究Ad-ASP-2的功能和以其作为血清学诊断抗原或保护性疫苗奠定了基础。
- 夏晓玲俞敏孙炜
- 关键词：十二指肠钩虫密码子优化原核表达
- 十二指肠钩虫ASP-1成熟蛋白基因的克隆、原核表达及纯化被引量：2
- 2013年
- 目的获得十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)分泌蛋白1(mAd-ASP-1)编码基因全长并实现其原核表达。方法根据GenBank AAD13339公布的序列,设计并合成引物,RT-PCR扩增mAd-ASP-1的成熟肽全基因序列,测序后克隆至pET-22b(+)载体,转化大肠埃希菌,诱导表达Ad-ASP-1,亲和层析纯化。结果 RT-PCR扩增获得了mAd-ASP-1基因全长,成功构建了原核表达质粒pET-22b-mAd-ASP-1,转化大肠埃希菌Rosetta-gami 2(DE3)菌株,经IPTG诱导,表达预期47ku的重组蛋白Ad-ASP-1,且主要以可溶形式存在。利用His Trap HP亲和柱获得了纯化的重组蛋白Ad-ASP-1,确定纯化重组蛋白咪唑洗脱液最佳浓度为100mmol/L。Western blot显示,该融合蛋白可被鼠抗His-tag抗体识别。结论获得了mAd-ASP-1基因全长,并成功构建其原核表达体系,为获得大量Ad-ASP-1基因工程产品奠定了实验基础。
- 夏晓玲孙炜
- 关键词：十二指肠钩虫克隆原核表达
