孙国芳
- 作品数：39 被引量：41H指数：4
- 供职机构：南昌大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江西省卫生厅科技计划项目更多>>
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- siRNA对人脐静脉内皮细胞中人剪切修复基因表达和凋亡的影响
- 2014年
- 目的向人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中导入靶向人剪切修复基因D干扰序列(XPD-siRNA),观察其对HUVEC的XPD基因表达和凋亡的影响。方法以XPD为靶基因,构建3个特异性siRNA重组质粒,经转染后观察其对HUVEC中XPD的沉默作用;并转染沉默效率最佳的siRNA,观察其对细胞凋亡的影响。结果Western blot和RT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,3个重组质粒XPD-siRNA的转染均能降低HUVEC中XPD的表达(P<0.01),其中XPD-siRNA-2的沉默效率最高(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,与阴性对照组相比,XPD-siRNA-2组能降低HUVEC凋亡率(P<0.01)。Western blot结果显示,与阴性对照组相比,转染XPDsiRNA-2能下调Bax(P<0.01)和上调Bcl-2(P<0.01)的表达。结论 XPD-siRNA转染能有效沉默HUVEC中XPD基因的表达。所筛选沉默效率最佳的XPD-siRNA能抑制HUVEC凋亡,而Bax和Bcl-2可能参与了此过程。
- 俞菊梅孙国芳李菊香洪葵程晓曙
- 关键词：人脐静脉内皮细胞转染
- 着色性干皮病基因B对白介素-6介导血管平滑肌细胞增殖作用的影响及机制
- 目的 探讨着色性干皮病基因B(xeroderma pigmentosum B,XPB)对白介素-6(IL-6)介导入血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响.方法 用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-XPB和空载...
- 李菊香丁浩洪葵孙国芳张南吴延庆吴清华程晓曙
- 关键词：白介素-6血管平滑肌细胞增殖凋亡
- 着色性干皮病基因D对ox-LDL促血管平滑肌细胞增殖作用的影响及机制
- 目的探讨着色性干皮病基因B（xeroderma pigmentosumD,XPD）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）促人血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及凋亡的影响。方法用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-XPD和空...
- 李菊香丁浩洪葵张南孙国芳吴延庆吴清华程晓曙
- 文献传递
- T波峰-末间期、T波峰-末间期离散度与心肌缺血的关系被引量：7
- 2015年
- 目的对冠心病患者T波峰-末间期(Tp-Te间期)和Tp-Te离散度(Tp-Ted)进行测定,探讨心肌缺血与Tp-Te间期、心室肌跨壁复极离散度的关系,寻找一种便捷的观察指标。方法选择2010年1月至2012年6月在南昌大学第二附属医院做平板运动试验阳性,并住院行冠状动脉造影证实存在冠状动脉狭窄的冠心病患者56例(冠心病组)及健康体检者(行平板运动试验阴性者)56例(正常对照组),分别测量2组Tp-Te间期和Tp-Ted。结果与正常对照组比较,冠心病组Tp-Te间期显著延长,Tp-Ted明显增大(P<0.05)。结论心肌缺血时,Tp-Te间期和Tp-Ted均增大,Tp-Te间期和Tp-Ted可作为反映跨壁复极离散度的无创性指标。
- 陈静孙国芳丁颖黄慧萍汤俐雯
- 关键词：心肌缺血TP-TE间期平板运动试验
- 沉默bim的表达对缺氧所致大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨唯BH3域蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧所致大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:在体外原代培养出生1～3 d的大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA。实验分组:(1)正常对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+脂质体组;(4)缺氧+阴性对照siRNA组;(5)缺氧+bim-siRNA组。倒置显微镜下观察心肌细胞的搏动频率和节律。全自动生化分析术检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,用MTT法测定心肌细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blotting检测细胞Bim、Bax、Bcl-2和p-p38 MAPK和p38 MAPK蛋白的表达。结果:免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。bim-siRNA转染均能有效沉默bim基因的表达(P<0.01),其中第2对沉默效率最高,达到86.73%。缺氧使心肌细胞的搏动频率显著减慢,节律不规则,而沉默bim基因的表达能使细胞搏动频率增加。缺氧损伤导致细胞培养液中LDH含量较空白对照组明显增加(P<0.01),心肌细胞存活率明显下降(P<0.05),细胞凋亡率较空白对照组明显增加(P<0.01),转染bim-siRNA后细胞培养液中LDH含量显著减少,细胞存活率升高,细胞凋亡率下降。缺氧损伤导致心肌细胞Bax和p-p38 MAPK表达升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01),bim-siRNA的转染能够抑制缺氧导致的上述改变(P<0.01或P<0.05),并且与心肌细胞凋亡发生率降低一致,p38 MAPK表达无明显变化。结论:沉默bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制Bax、p-p38 MAPK的表达和增强Bcl-2蛋白表达有关,这有望为冠心病的治疗提供新方向。
- 夏珍李菊香丁浩孙国芳洪葵吴延庆程晓曙
- 关键词：BIM蛋白小干扰RNA缺氧细胞凋亡
- 内质网应激在Bim介导心肌细胞缺氧损伤中的作用
- 目的探讨内质网应激在Bim介导心肌细胞缺氧损伤中的作用。方法用脂质体转染法将Bim-siRNA转染H9C2心肌细胞,制作缺血缺氧损伤模型(转染48 h后给予缺氧12 h处理)。实验分组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(...
- 夏珍李菊香丁浩孙国芳洪葵吴延庆程晓曙
- SOCS1对氧化型低密度脂蛋白促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响被引量：6
- 2011年
- 目的探讨细胞因子信号转导抑制因子-1(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS1)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)促进人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响。方法用脂质体转染法将靶向人SOCS1基因的siRNA(SOCS1-siRNA)和阴性对照siRNA(NC-siRNA)转染VSMC,然后给予100μg/mL的oxLDL孵育48 h。实验分为6组:空白对照组、NC-siRNA组、SOCS1-siRNA组、oxLDL组、oxLDL+NC-siRNA组、oxLDL+SOCS1-siRNA组。用RT-PCR和Western blot法检测SOCS1、Bcl-2、Bax和野生型p53(wt-p53)表达量的变化,用MTT法观察细胞存活力,用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果 RT-PCR和Western blot检测发现,SOCS1-siRNA的转染使细胞SOCS1表达降低(P<0.05,P<0.01),同时使Bcl-2表达降低,Bax和wt-p53表达增高(P<0.05,P<0.01),并能抑制oxLDL促进VSMC的Bcl-2表达增高,Bax和wt-p53表达降低的作用(P<0.05,P<0.01)。MTT结果显示,SOCS1表达下调抑制了细胞存活力(P<0.05),并能抑制oxLDL促进VSMC增殖的作用(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,SOCS1表达下调引起了细胞G0/G1期增加(P<0.05)、S期减少(P<0.05)、凋亡率增加(P<0.01),并能抑制oxLDL促进VSMC G0/G1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用(P<0.01)。结论 SOCS1表达下调能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制oxLDL促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的作用靶点。
- 丁浩李菊香洪葵孙国芳张南程晓曙
- 关键词：SOCS1OXLDL血管平滑肌细胞增殖
- SOCS1对氧化低密度脂蛋白促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响
- 目的血管平滑肌细胞（vascular smooth musclecell,VSMC）过度增殖是促进动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）发生发展的一个关键因素。而且在AS损伤中,氧化型低密度脂蛋白（oxid...
- 丁浩孙国芳李菊香洪葵程晓曙
- 文献传递
- 细胞信号转导抑制因子-1表达下调对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的大量研究表明,内皮细胞的凋亡参与了动脉粥样硬化的发生与发展。另外有研究表明,细胞信号转导抑制因子-1(SOCS1)的表达下调可促进某些细胞的凋亡。然而,SOCS1表达下调是否与内皮细胞的凋亡有关,目前未见相关报道。为此,本研究利用RNA干扰沉默SOCS1的表达,然后观察内皮细胞凋亡的变化,探讨SOCS1与动脉粥样硬化之间的关系。方法 (1)培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cel,HUVEC),利用RT-PCR和Western Blotting检测SOCS1在HUVEC中的表达。(2)设计并化学合成4对靶向SOCS1的siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4。(3)将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25、50、75、100 nmol/L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光显微镜下观察转染效率,得出有最佳转染效率的浓度。(4)HUVEC根据不同的处理因素分成8组:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组。将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48小时后收获细胞。利用RT-PCR和Western Blotting,筛选出1对对SOCS1沉默效率最高的siRNA。(5)将筛选出来的沉默效率最高的siRNA和阴性对照siRNA以有最佳转染效率的浓度转染细胞,转染24小时后分为4组:①阴性对照siRNA;②阴性对照siRNA+缺氧20小时/复氧4小时;③SOCS1 siRNA;④SOCS1 siRNA+缺氧20小时/复氧4小时。最后,利用Western Blot检测Caspase3和Bax的表达,利用流式细胞仪检测凋亡。结果 (1)siRNA在50 nmol/L时有较高的转染效率。(2)4对siRNA干扰后,SOCS1的表达水平与四个对照组相比明显下调(P<0.05),其中siRNA-3的沉默效率最高(P<0.05)。(3)对HUVEC进行RNA干扰和缺氧复氧处理后,SOCS1 siRNA+缺氧复氧组的Caspase3、Bax蛋白表达水平与其它3组相比明显升高(P<0.05),阴性对照siRNA+缺氧复氧组的Caspase3、Bax蛋白表达水平与阴性对照siRNA组相比明显升高(P<0.05),阴性对照siRNA+缺氧复�
- 丁浩万磊李菊香孙国芳洪葵程晓曙
- 关键词：培养人脐静脉内皮细胞内皮细胞凋亡凋亡率表达下调转染细胞
- 着色性干皮病基因D对白介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响
- 2011年
- 目的血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)过度增殖是促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生发展的一个关键因素。而且在AS损伤中,白介素-6(interleukin-6,IL-6)起到了刺激VSMC过度增殖的作用。有研究发现,着色性干皮病基因D(xeroderma pig-mentosum D,XPD)表达上调能促进某些类型细胞的凋亡。然而,XPD对VSMC的增殖和凋亡是否有影响目前未见相关报道。为此,本研究探讨XPD对IL-6促进人VSMC增殖作用的影响及其与AS之间的关系。方法用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2稳定转染VSMC,然后给予100 U/mL的IL-6孵育48h。实验分为6组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)IL-6组;(5)IL-6+pEGFP-N2组;(6)IL-6+pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53(wild type P53,wtP53)表达量的变化。结果在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空载质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力(P<0.01)。结论 XPD能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。
- 丁浩孙国芳李菊香洪葵程晓曙
- 关键词：细胞增殖活力着色性干皮病增殖作用凋亡率血管平滑肌细胞
