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HTGF-β1基因转染脂肪干细胞及其表达被引量：2: 2011年; 目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染人ADSCs。转染72h后,RT-PCR检测重组腺病毒转染后ADSCs的hTGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附(ELASA)定量测定hTGF-β1蛋白的表达。结果转染后72h,ADSCs能有效表达hTGF-β1 mRNA,免疫细胞化学证实重组腺病毒转染后ADSCs胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,ELISA结果提示其hTGF-βl表达量是转染Adeno-lacZ的3.85倍(<0.05)。结论重组腺病毒adeno-hTGF-β1能够被导入ADSCs并表达hTGF-β1蛋白,为hTGF-β1基因转染的ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。; 夏万尧孙恒赟陈瑾君刘伟周广东曹谊林; 关键词：脂肪干细胞基因转染腺病毒转化生长因子Β1

重组hTGF-β1基因转染人脂肪干细胞对其向软骨分化的影响被引量：4: 2012年; 目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hTGF-β1蛋白的表达,然后分别从大体观察、组织学和II型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果 hTGF-β1蛋白量在14d时达最高峰,随后逐渐降低。连续细胞团聚集诱导培养21d,细胞团收缩成近似小球形的组织块,外观成乳白色。HE染色可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜,下部区域有巢状软骨样细胞组成,有些区域可见软骨样细胞包埋在软骨陷窝内。Safranin'O染色显示,形成的软骨组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。而对照组苏木素-伊红染色观察见无软骨样组织形成或有向软骨分化现象。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示实验组细胞团出现较明显的阳性染色区域,可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。对照组Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示无明显的阳性染色区。结论重组hTGF-β1腺病毒转染人ADSCs诱导人ADSCs向软骨细胞表型分化形成软骨样组织,为hTGF-β1基因转染的人ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。; 夏万尧陈瑾君孙恒赟刘伟周广东曹谊林; 关键词：人脂肪干细胞基因转染腺病毒转化生长因子Β1

组织工程耳软骨再生关键科学问题、核心技术及其临床转化: 曹谊林周广东蒋海越刘豫殷宗琦唐胜建李丹刘伟张文杰肖苒周栩何爱娟周佳宇孙恒赟; 各种原因造成的耳廓缺损临床常见，但由于缺乏理想耳再造支架，如何实现符合生理要求的外耳重建仍是国际难题。组织工程技术有望根本解决这一难题，因其具有独特优势：1)供区损伤小，仅需一小块软骨体外扩增后即可获得足量软骨细胞；2)...; 关键词：

CD61阳性人脂肪来源细胞体外软骨分化潜能的初步研究被引量：1: 2013年; 目的利用流式细胞仪分选人脂肪来源细胞(adipose derived cells,ADCs)软骨潜能亚群并初步检测其体外成软骨能力。方法采用酶消化法分离ADCs,以CD61为表面标志,通过流式细胞仪分选纯化,所得CD61+和CD61-两群细胞进行体外成软骨诱导,3周后进行软骨特异性细胞外基质二型胶原免疫荧光染色和软骨特异性基因SOX9和COL II定量PCR检测。结果采用CD61作为分选标志可通过流式细胞仪分选纯化获得两群细胞亚群。免疫荧光染色结果显示两群细胞经软骨诱导后均表达二型胶原。定量PCR结果表明CD61+组SOX9和COL II表达高于CD61-组(p<0.05)。结论 CD61+ADCs具有较强体外软骨分化能力,CD61有望成为ADCs软骨潜能亚群体外分选标志。; 孙恒赟周广东曹谊林; 关键词：CD61

肋软骨支架耳廓再造术后感染的治疗和预后分析被引量：4: 2017年; 目的探讨肋软骨耳廓再造术后软骨支架感染的处理方法及预后。方法回顾性分析肋软骨支架耳廓再造术后软骨支架感染的12例病例，细菌培养结果：金黄色葡萄球菌5例，凝固酶阴性葡萄球菌3例，肺炎克雷伯杆菌2例，嗜水气单胞菌l例，普通培养无细菌生长1例。采用局部加强换药结合静脉滴注抗生素治疗，抗生素盐水冲洗、通畅引流，并结合临床具体情况治疗。结果12例患者换药时间12～67d，平均35d，其中6例感染控制愈合，软骨支架变形不明显或轻度变形；1例感染持续存在，软骨完全液化，软骨支架取出后清创换药控制感染，需半年后再行耳再造手术修复；5例感染早期取出软骨支架，彻底切除软化的软骨后埋人患者胸部皮下，耳后皮瓣及耳后筋膜瓣舒平，半年后取出支架，修整后再次植入。结论肋软骨耳廓再造术后感染早期可通过外科换药、冲洗和通畅引流控制感染，保留耳廓三维形态；对于渐进发展的严重感染病例，需尽早取出软骨支架，彻底清除易感染的软骨组织，待感染完全控制后再次植入。; 孙恒赟赵延勇蒋海越杨庆华何乐人潘博林琳韩景健刘莹; 关键词：软骨手术后并发症预后

CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究: 2012年; 目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力。方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞。将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点;成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性;同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力,并以HE、Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定。结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达阳性率约为10%。分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,但CD204-细胞具有更强的增殖能力。成脂诱导10 d后,两组细胞油红O染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但CD204+细胞具有更强的成脂潜能。成骨诱导2周后,两组细胞茜素红染色均可见钙结节红染,而CD204-细胞具有更强的成骨潜能。同时,细胞pellet成软骨诱导4周后,大体观可见CD204-细胞组pellet形成白色透明样软骨成分,而CD204+细胞组pellet外观微黄。HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均显示CD204-组pellet可见成熟软骨陷窝形成,Safranin O染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积;而CD204+细胞组pellet则呈纤维化改变。结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点,且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。; 丁金萍孙恒赟陈谨君张文杰刘伟曹谊林周广东; 关键词：细胞分选

耳垂逆转位在低位耳垂型小耳畸形外耳再造中的应用被引量：2: 2017年; 目的探讨耳垂逆行转位法在低位耳垂型小耳畸形外耳再造中的应用。方法 2014年1月至2015年12月,对20例残耳位置较健侧明显低下的单侧小耳畸形患者,以扩张器法进行外耳再造,一期于残耳后乳突区植入50 m L肾形扩张器,术后1周拆线,并以每周3次的频率进行注水扩张,注水期约1个月。注水完成约1个月后,行二期耳再造术。于二期术中将残耳下缘切开,以残耳上部为蒂,逆行旋转,形成再造耳耳垂,切取残耳的创面直接缝合。结果 20例耳再造术后,再造耳耳垂血运良好。术后随访6~24个月,再造耳外形自然饱满,耳垂位置与健侧基本对称。结论对于一些严重半侧颜面短小症的患者,残耳位置较健侧明显低下,耳垂逆行转位法可有效矫正再造耳垂位置,使再造耳与健侧耳位置基本对称,形成良好的耳垂形态。; 孙恒赟赵延勇蒋海越杨庆华何乐人潘博林琳刘莹韩景健; 关键词：小耳畸形外耳再造

脂肪干细胞在软骨组织工程中的应用被引量：1: 2009年; 软骨是最早应用组织工程技术成功构建的组织之一，但由于缺乏合适的软骨构建种子细胞，因此其发展相对落后。随着干细胞研究的兴起，脂肪干细胞（ASC）因其具有分布广泛、可利用细胞量大、取材容易等优点，为ASC作为种子细胞应用于组织工程研究提供了可能；但是ASC构建软骨组织的效果却不如骨髓间充质干细胞（BMSC）理想。因此ASC在软骨组织工程中的应用仍面临着诸多问题与挑战，其中最核心的问题是如何提高ASC成软骨的效率。为此从如何纯化脂肪来源细胞、尽可能保持其中干细胞的生物学特性并优化软骨诱导方案3个方面予以综述，为提高ASC成软骨的效率提供参考。; 孙恒赟周广东曹谊林; 关键词：脂肪干细胞软骨组织工程种子细胞

一种大量快速分离脐带间充质干细胞的新方法被引量：5: 2010年; 目的：探讨体外快速大量分离脐带间充质千细胞的新方法。方法：采用复合胶原NB4、dispasell、透明质酸酶三种酶消化3h，加入PBSA溶液稀释，离心获得脐带间充质干细胞，培养；用流式细胞仪对P3代细胞进行表面标记的鉴定，用化学诱导的方法使第3代细胞向脂肪、骨、软骨细胞分化，2～4周后，分别行oil red、Safranin’O和茜素红染色，倒置显微镜下观察诱导结果。结果：经3种酶消化和PBSA稀释，短时间内从脐带中获得了大量间充质干细胞；伴随着细胞的传代，形态逐渐均一，传至第3代，细胞的形态已基本相似；流式细胞仪鉴定，细胞强表达间充质细胞的特异性标记CD90，CD73，CD105，而不表达造血系或内皮系细胞的标记CD45、CD14、CD11、CD34、CD19，也不表达主要组织相容性抗原HLA—DR；向脂肪细胞诱导后第4周，oilred染色见细胞内大量红染的脂滴；向软骨细胞诱导后第4周，Safranin’O染色见多数切片呈阳性，细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构；向骨细胞诱导后第4周，茜素红染色发现肉眼可见的广泛散在的红色阳性钙结节．结论：本研究所采用的3种酶消化结合PBSA稀释的方法可以快速获得脐带间充质干细胞：; 祝加学沈尊理秦金保张涛孙恒赟金羽青周广东; 关键词：脐带间充质干细胞多向分化

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孙恒赟

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