常晓月
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：复旦大学生物医学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙肝疫苗免疫不应答群体的蛋白组和microRNA组表达差异性研究
- 全球有超过20亿人感染过乙肝病毒。乙肝疫苗接种是预防乙肝的最有效方法，但仍有5％-10％的人群，对于乙肝疫苗免疫后不能有效的产生免疫应答反应。目前对于乙肝免疫不应答机理的研究主要集中在免疫系统缺陷和MHC多态性等方面，但...
- 常晓月
- 关键词：蛋白组学
- eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化被引量：2
- 2011年
- eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分。通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子。为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础。
- 郭艳荣常晓月崔晓君魏勋斌朱乃硕
- 关键词：基因克隆分泌表达融合蛋白蛋白纯化
- 乙型肝炎病毒疫苗免疫不应答群体中蛋白质组表达差异性的初步研究
- 2014年
- 以往研究显示,人群中约有10%无法通过接种乙型肝炎病毒(HBV)疫苗而产生保护性水平的应答。为研究HBV疫苗免疫后不应答发生的机制,本研究对108例经正常免疫程序(大连汉信产HBV疫苗,10μg/支,共接种3针)后不同应答水平人群的血浆蛋白质组差异进行分析,将其分为无应答(抗体效价检测结果为阴性)组和高应答(抗体效价约1 000mIU/ml)组。用多重亲和去除系统(MARS)亲和柱去除14种高丰度蛋白后,采用双向荧光差异电泳(2D-DIGE)与基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)相结合的方法,鉴定获得11种差异表达蛋白质。在这些差异表达蛋白质中,α1微球蛋白、激肽原1的表达在无应答人群中较高应答人群上调,而α1抗胰凝乳蛋白酶、维生素D结合蛋白、afamin、抗凝血酶Ⅲ和玻连蛋白表达下调。其中,α1抗胰凝乳蛋白酶、激肽原1和α1微球蛋白的差异性表达进一步得到酶联免疫吸附试验(ELISA)或蛋白免疫印迹法验证。以上蛋白质的表达情况与HBV疫苗免疫应答状况相关,可能成为检测HBV疫苗免疫应答水平的分子标记,为进一步研究免疫不应答机制奠定基础。
- 常晓月朱嗣博高学鹏朱玮朱乃硕
- 关键词：分子标记乙型肝炎病毒疫苗血清
