张宝福
- 作品数：28 被引量：31H指数：3
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京军区医学科学技术研究“十一五”计划课题江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 溶瘤腺病毒介导RNA干扰人端粒酶逆转录酶抑制HeLa细胞生长被引量：1
- 2009年
- 目的观察表达人端粒酶逆转录酶siRNA(hTERT-siRNA)的溶瘤腺病毒ZD55-TERT-siRNA对体外培养人宫颈癌HeLa细胞生长及hTERT基因表达的影响。方法以溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达hTERT-siRNA的增殖缺陷腺病毒AD-TERT-siRNA和增殖缺陷腺病毒AD-EGFP作为对照组。不同滴度四种病毒分别感染HeLa细胞,结晶紫法检测细胞毒作用,MTT法测定细胞生长抑制率;RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学(ICC)法分别检测hTERT的mRNA、蛋白质及抗原表达,Western blot和ICC法分别测定腺病毒E1A蛋白及抗原表达。结果对HeLa细胞的生长抑制作用和细胞毒作用ZD55-TERT-siRNA>AD-TERT-siRNA和ZD55-EGFP>AD-EGFP;ZD55-TERT-siRNA和ZD55-EG-FP感染的HeLa细胞表达E1A;抑制hTERT表达作用依次为ZD55-TERT-siRNA>AD-TERT-siRNA>ZD55-EGFP、AD-EGFP。结论溶瘤腺病毒介导RNA干扰hTERT能有效抑制HeLa细胞生长及hTERT基因表达。
- 刘艳华郑骏年毛立军孙方浩温儒民张宝福李望刘俊杰裴冬生
- 关键词：溶瘤腺病毒RNA干扰
- 调节性T淋巴细胞在Ⅱ期结肠癌组织中的表达及临床意义
- 徐为付海啸邱磊宋军李慧中张宝福郑骏年
- 胃癌组织中调节性T淋巴细胞浸润与临床预后关系的研究
- 徐为邱磊付海啸宋军李慧中张宝福郑骏年
- Treg细胞在Ⅱ期结肠癌组织中的数量及临床意义被引量：2
- 2013年
- 目的:研究肿瘤浸润调节性T淋巴细胞(Treg)在TNM分期II期结肠癌癌巢、癌间质中的数量及其临床意义。方法:采用免疫组化技术检测49例原发性II期结肠腺癌局部浸润Treg细胞的分布,并分析其临床意义。结果:癌组织中浸润的Treg细胞数量与年龄、性别及肿瘤大小无关(均P>0.05);高中分化癌组织Treg细胞数量多于中低分化组癌组织,癌巢中浸润的Treg细胞数量低于癌间质中浸润的Treg细胞数量(P<0.001);癌组织Treg细胞高数量组、癌间质Treg细胞高数量组的总生存率(OS)分别明显高于癌组织Treg细胞低数量组与癌间质Treg细胞低数量组(均P<0.05);癌巢Treg细胞高数量组的OS低于癌巢Treg细胞低数量组,但差异无统计学意义(P=0.299)。结论:Treg细胞在II期结肠癌癌巢及癌间质中发挥不同的作用,癌组织、癌间质及癌巢中浸润的Treg细胞数量可能分别是影响结肠癌临床预后的预测指标。
- 徐为付海啸邱磊宋军李慧中张宝福郑骏年
- 关键词：结肠肿瘤病理学T淋巴细胞调节性
- Ki-67启动子的克隆及其转录活性被引量：8
- 2009年
- 目的克隆肿瘤特异Ki-67启动子，观察其在人肿瘤细胞中的转录活性。方法提取。肾癌Ketr-3细胞基因组总DNA作为模板，聚合酶链反应（PCR）获取1．6kb的Ki-67启动子DNA片段。克隆到pGL3-Basic载体构建双荧光素酶检测质粒pGLB-Ki-67。将pGLB—Ki-67转染4种人肿瘤细胞及人脐静脉内皮Huvec细胞，使用双荧光素酶检测系统鉴定启动子活性及肿瘤特异性。结果电泳与测序结果显示克隆出的Ki-67启动子片段序列与Genbank中记录一致，pGLB．Ki-67质粒构建成功。其启动子活性在Hela、BIU-87、Ketr-3、A5494种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter／enhancer活性的21．0％、31．1％、23．9％和7．2％；在Huvec细胞内仅为0．5％。结论克隆出Ki-67基因启动子（-820～＋771），并证明其具有良好转录活性。
- 孙方浩郑骏年徐为刘晓昀张宝福宋文哲刘俊杰章龙珍顾玉明高超李望裴冬生
- 关键词：KI-67基因肿瘤启动子基因治疗
- 含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白的表达及其生物活性
- 2009年
- 目的获得含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽的白细胞介素（IL）-24突变体（RGD—IL-24）蛋白，研究其生物活性。方法用重叠聚合酶链反应（PCR）技术在IL-24cDNA序列中引入甘氨酸密码子GGC，构建RGD—IL-24eDNA，将其克隆入质粒pET28a（＋）获得pET28a／RGD—IL-24。pET28a／RGD—IL-24转化菌株BL21（DE3），采用亲合层析纯化蛋白，透析复性。SDS—PAGE电泳和Western blot鉴定RGD—IL-24蛋白。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测RGD-IL-24刺激外周血单核细胞（PBMC）产生IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α和干扰素（IFN）-γ的能力来测定RGD—IL-24免疫活性。细胞黏附实验检测RGD—IL-24与多种肿瘤细胞结合特性。结果成功获得RGD—IL-24基因，并构建表达质粒pET28a／RGD—IL-24。表达的RGD-IL-24蛋白约占菌体总蛋白的30％，纯化后蛋白纯度超过90％。RGD—IL-24处理的人PBMC培养上清IL-6、TNF-α和IFN-γ浓度（ng／L）分别为（780．5±98．3、2399．1±113．2、2130．1±98．6），显著高于IL-24处理组（551．0±52．1、1982．5±138．2、1762．9±119．8）。黏附实验证实RGD—IL-24能增强与肿瘤A549、HeLa和ACHN细胞靶向结合作用。结论含RGD肽的RGD—IL-24蛋白免疫生物活性及与肿瘤细胞靶向结合能力较IL-24明显增强。
- 符炜徐为顾玉明张宝福李海龙韩正祥高超刘俊杰郑骏年
- 关键词：白细胞介素-24突变体蛋白肿瘤
- 尼美舒利提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的机制探讨被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨尼美舒利对人γδT细胞功能影响。方法:按常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的尼美舒利(分别为0.25、0.5、1、2、4μmol/L)诱导24 h后收集培养上清液检测细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12,沉淀细胞流式细胞测定穿孔素、粒酶B和NKG2D,LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果:经尼美舒利诱导后γδT细胞穿孔素、粒酶B表达量(分别为62.8%和72.7%)明显高于对照组(分别为51.4%和60.9%)P<0.05,尤其尼美舒利浓度在1μmol/L时最显著;经尼美舒利诱导后γδT细胞分泌IFN-γ和TNF-α浓度(分别为262.3 ng/L和177.5 ng/L)明显高于对照组(分别为196.1 ng/L和158.5 ng/L)P<0.05;分泌的IL-12浓度与对照组比较无明显差异(P>0.05)。γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901和BCG-823的活性在1μmol/L时最高(分别为73%和70%),明显高于对照组(分别为54%和53%)P<0.05。结论:经尼美舒利诱导后γδT细胞的穿孔素、粒酶B含量和γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901、BCG-823活性明显高于对照组。其培养上清液中IFN-γ和TNF-α浓度也明显高于对照组。这一结果为临床尼美舒利预防和治疗消化道肿瘤提供了实验依据。
- 刘军权陈复兴巩新建李慧忠蔡凯张宝福张颂张娟
- 关键词：尼美舒利
- G250启动子的克隆及其在人肾癌细胞中的特异生物活性
- 目的构建含人G250基因启动子的表达载体,探讨G250启动子在肾癌细胞中的特异生物活性。方法采用RT-PCR方法从人宫颈癌Hela细胞提取总DNA,扩增出G250基因两段不同长度的启动子片段,并将其克隆到pGL3-Bas...
- 郑骏年刘晓昀郝林毛立军刘俊杰张宝福
- 文献传递
- 肿瘤Ki-67抗原HLA—A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定
- 2009年
- 目的鉴定Ki-67抗原HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位，为制备肿瘤疫苗提供依据。方法根据BIMAS和SYFPEITHI数据库对人Ki-67抗原CTL表位综合评分结果，合成7条候选肽。通过T2-肽结合实验检测候选肽与HLA—A2分子亲和力；通过酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测HLA—A2阳性CTL细胞分泌IFN-γ能力，评价候选肽免疫原性。结果合成的候选肽及阳性对照肽HIV-1pol476484纯度均超过95％。T2-肽结合实验结果显示280—288位置Ki-67氨基酸序列LQGETQLLV与HLA-A2分子结合力较强，其能够诱导特异性CTL活化。结论LQGETQLLV（280～288）是Ki-67抗原的HLA—A2限制性CTL表位。
- 徐为郭贞宋文哲李海龙孙晓磊姚元虎张宝福刘俊杰刘斌顾玉明高超郑骏年
- 关键词：KI-67抗原细胞毒性T淋巴细胞表位
- 调节性T淋巴细胞在结肠癌组织中不同部位的浸润及临床意义
- 徐为付海啸邱磊宋军张宝福郑骏年
