朱明芬
- 作品数：16 被引量：32H指数：4
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省医学科学技术研究基金广东省教育厅“千百十工程”优秀人才培养基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种新的乙型肝炎病毒全基因组克隆技术的建立被引量：2
- 2006年
- 目的建立一种乙型肝炎病毒(HBV)全基因组扩增及克隆的新方法。方法设计含SalⅠ、NotⅠ酶切位点的引物,用一片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切后将PCR产物克隆入pBlueScript-(SK-)载体,进行HBV全基因组序列测定。结果用此方法成功获得35例HBV全基因组DNA序列。同时以重组质粒为模板进行敏感性和保真性测定,其敏感性为102个初始模板,核苷酸的人为突变率为1.6bp/kb。结论此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析,为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法。
- 李莉卢建溪谢冬英徐启桓朱明芬陈伟李刚
- 关键词：基因组聚合酶链反应
- 阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶水平的变化
- 2008年
- 目的研究新药阿德福韦（ADV）治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平的变化情况，从而指导临床用药。方法采集16例慢性乙型肝炎（CHB）患者用ADV治疗前血清，即基线（BL）血清，以及持续服药12、16、28．40、48、52、68、80、92周共10个时段的系列血清。用荧光定量PCR法检测其HBV DNA的水平。用全自动生化仪检测其ALT的水平。结果从BL到48周时段，HBV DNA中位数显著下降；在52周，HBV DNA中位数出现反弹；从52至92周时段，HBV DNA中位数再次下降。16例不同时段血清ALT中位数的变化与HBV DNA中位数变化一致。ADV治疗12周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．34lg拷贝／ml，无HBV DNA阴转、HBeAg血清学转换；治疗28周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．91lg拷贝／ml，有2例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗40．48周时，HBV DNA中位数较基线分别显著下降了3．83、3．95lg拷贝／ml，有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗52周时。HBV DNA中位数较基线下降了2．90lg拷贝／ml，出现反弹，但仍有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗68、80、92周时，HBV DNA中位数较基线显著下降了3．51、3．81、4．01lg拷贝／ml，分别有4、6、6例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换。16例患者接受ADV治疗的两年中，有9例患者分别从16、28、40周开始HBV DNA的水平显著下降；7例患者HBV DNA的水平下降但不显著。结论阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中，HBV DNA及ALT中位数的变化情况基本一致。52周时段HBV DNA水平出现反弹。提示52周可能是抗病毒的关键时段。
- 卢建溪王强陈文思谢东英徐启桓陆伟伦李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：肝炎乙型慢性阿德福韦聚合酶链反应
- 一种新的乙型肝炎病毒全基因组克隆技术的建立
- 目的;建立一种乙型肝炎病毒(HBV)全基因组扩增、克隆及序列分析的新方法。方法:用一片段PCR 法扩增出HBV全基因组,用Sal Ⅰ、Not Ⅰ双酶切后将PCR产物克隆入SK-载体,进行HBV全基因组序列测定。结果:用此...
- 李莉朱明芬李刚卢建溪陈伟
- 文献传递
- 阿德福韦酯抗病毒疗效与乙型肝炎病毒基因型的关系被引量：4
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）不同基因型对阿德福韦酯（ADV）抗病毒疗效的影响。方法对16例应用ADV治疗的慢性乙型肝炎（CHB）患者，采用荧光定量PCR法检测其HBVDNA的水平，全自动生化仪检测其丙氨酸氨基转移酶（ALT）的水平。用PCR法扩增用药前（基线）、用药后28、52和92周时的HBV全基因组，克隆后进行全基因组序列测定及基因型分型。观察治疗12、16、28、40、48、52、68、80及92周时抗病毒疗效。结果（1）不同基因型CHB患者治疗前HBVDNA及AI．T水平差异无统计学意义（均P〉0．05）。HBV基因型B型、C型CHB患者治疗12、16、28、40、48、52、68、80和92周时HBVDNA载量的变化、ALT复常及HBeAg血清转换等指标差异均无统计学意义（均P〉0．05）。HBV基因型B型、C型患者治疗92周HBV DNA有效抑制率均为100％。（2）16例CHB患者的HBV基因型分布为B型9例，C型6例，B和C混合型1例。5例患者在接受ADV治疗后基因型由B型变为C型或从C型变为B型。结论HBV基因型为B型或C型的CHB患者对ADV治疗的病毒学、血清学和生物化学应答无显著差异，提示HBV基因型可能对ADV的疗效无影响。
- 卢建溪王强陈文思李莉朱明芬李刚
- 关键词：基因型阿德福韦酯抗病毒治疗
- 两种HBV全基因组克隆方法的比较
- 2008年
- 目的通过比较血清HBVDNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究。方法采集了乙型肝炎患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定。同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBVDNA滴度。结果本研究建立的一片段法扩增成功需要的血清HBVDNA浓度高于二片段法,两种方法扩增的效率比较为一片段方法扩增的成功率低于二片段方法(P<0.05)。一片段方法的保真性:核苷酸的人为突变率为1.13bp/kb。灵敏度:为102个初始模板,大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低。结论血清HBVDNA水平对两种扩增方法的成功率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据。HBVDNA滴度大于103copies/ml的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBVDNA滴度小于103copies/ml样本,则可选用两片段法的全基因组扩增、克隆技术。本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但需进一步优化。
- 卢建溪李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：基因组聚合酶链反应
- 基因芯片检测HepG2、HepG2.2.15细胞株及Lumican在多个肝癌细胞株的表达
- 目的:基因芯片检测HepG2和HepG2.2.15两种细胞株之间的差异基因表达,研究差异基因lumican在多个肝癌细胞株的表达。材料与方法:提取细胞总RNA,纯化后反转录合成荧光分子（Cy3/Cy5）标记的cDNA探针...
- 李永伟郭云蔚张彤陆慧琼朱明芬凌小强李刚
- 关键词：基因芯片LUMICAN癌基因
- 文献传递
- 淋巴瘤Daudi细胞SHP-1甲基化及5-杂氮脱氧胞苷抑制性效应的研究被引量：4
- 2006年
- 目的研究甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxyeytidine.5-Aza-CdR)对 Bur-kitt’s淋巴瘤细胞系 Daudi 细胞中的 SHP-1抑癌基因的转录调控作用及对 Daudi 细胞生长增殖的生物学影响,寻找肿瘤治疗新靶点:方法应用 MTT 法检测5-杂氮脱氧胞苷200.00,20.00,2.00,0.20μmol/L 等不同剂量,作用24,48,72h 对 Daudi 细胞存活率的影响。应用流式细胞术观察5-杂氮脱氧胞苷作用1,3,5d 细胞周期及凋亡率的变化。用亚硫酸氢盐测序 PCR(bisulfite sequencing PCR.BSP)、T-A 克隆及 DNA 测序分析甲基化状态。RT-PCR、免疫组织化学法检测5-杂氮脱氧胞苷(2.00μmol/L)处理前和处理7dDaudi 细胞 SHP-1 mRNA 及蛋白表达的变化。结果①经5-杂氮脱氧胞苷2.00μmol/L 作用7d 的 Daudi 细胞基因组 DNA 的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,未经5-杂氮脱氧胞苷作用的对照组 Daudi 细胞基因组 DNA 的胞嘧啶保持不变;②经5-杂氮脱氧胞苷作用7d,SHP-1mRNA 和蛋白均重新表达;③5-杂氮脱氧胞苷抑制 Daudi 细胞的增殖,在一定范围内与药物浓度及作用时间呈正相关,药物作用72h,剂量为200.00,20.00,2.00和0.20μmol/L 时,瘤细胞增殖的抑制率分别为72.0%.65.1%.51.5%.28.8%和23.4%:④5-杂氮脱氧胞苷可使 Dandi 细胞凋亡率增加,且作用也呈时间依赖性,用药1,3,5d 细胞凋亡率分别为2.3%,10.8%和17.1%:⑤5-杂氮脱氧胞苷对于细胞周期的影响,主要体现在 S 期和 G_1期,最显著的是 5-杂氮脱氧胞苷2.00μmol/L 作用24h 后92.7%的细胞阻滞在 S 期;其次,在相同药物浓度下.G_1期细胞数量随培养时间延长而增加,药物作用1,3,5d 时,G_1期细胞分别占细胞总数的1.2%,7.9%和21.5%。结论 DNA 异常甲基化是导致 Daudi 细胞 SHP-1基因缄默的重要原因:特异性甲基转移酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷能较好地逆转 Daudi 细胞 DNA 异常甲基化,并有效地激活因高甲基化所致 SHP-1基因缄默的再转录,诱导该基因的表达,从而抑制�
- 方建晨苏祖兰邱耕何丹冯智英朱明芬李莉何向蕾
- 关键词：淋巴瘤脱氧胞苷甲基化蛋白质酪氨酸磷酸酶
- 抗乙型肝炎病毒药物阿德福韦酯的耐药性研究进展被引量：1
- 2006年
- 阿德福韦酯为核苷类抗乙型肝炎病毒(HBV)新药,是一种逆转录酶抑制剂,对HBV 野生株及对拉米夫定耐药的HBV变异株均有抑制活性。应用阿德福韦酯治疗2年的耐药变异率为1．6％,其耐药与HBV P基因D区的rtN236T变异有关,该变异株对阿德福韦酯的敏感性下降,伴随HBV DNA升高和(或)丙氨酸氨基转移酶反跳。对阿德福韦酯耐药的 HBV对拉米夫定仍有反应,联合用药有望减少阿德福韦酯耐药的发生。对治疗前、后的血清HBV DNA多聚酶区以套式聚合酶链反应扩增后进行序列分析,是目前监测阿德福韦酯耐药的常用方法。
- 朱明芬李刚
- 关键词：阿德福韦酯乙型肝炎耐药性
- 阿德福韦酯抗病毒治疗对乙型肝炎病毒核酸序列及体外转录水平的影响
- 2010年
- 阿德福韦酯（ADV）能有效抑制HBV复制，且对拉米夫定耐药株有效，是一种新型核苷类抗病毒药物，其耐药相关变异有rtN236T和A181V突变。我们采用HBV全基因组克隆及体外转染的方法，观察了4例慢性乙型肝炎（CHB）患者在使用ADV抗病毒治疗的不同时期HBV全基因组序列及HBV病毒株体外转录水平的变化。
- 朱明芬李刚
- 关键词：抗病毒治疗阿德福韦酯体外转染转录水平HBV复制核苷类抗病毒药物
- TLR2、TLR4在乙型肝炎病毒转染的HepG2细胞株的表达被引量：2
- 2008年
- 目的探讨乙肝病毒全基因组瞬时转染HepG2细胞后,对HBV抗原分泌,病原识别受体Toll样受体2、4(TLR2、4)的表达及细胞增殖的影响。方法已构建pBlueScript-HBV质粒并经测序,转化宿主菌,菌后提取质粒,用Sapl酶切,获得HBV3.2kb基因组,采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2,IMX检测HBV所分泌抗原,台盼蓝计数检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率,并与空白对照绗对比。结果HBsAg利HBeAg的分泌随着转染HBVDNA量的增加而升高,除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外,差异均有显著性意义(P<0.05)。TLR2、4在转染后均有上调,TLR4在各组间差异显著(P<0.05),但TLR2只在最大剂量转染组时差异有显著性(P<0.05)。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少(P<0.05),但4μg和6μg两组间比较无显著意义(P>0.05)。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR2、4的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论研究结果初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR2、4的上调,而且TLR的上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制,成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。
- 李永伟郭云蔚朱明芬尉秀清陈伟凌小强李刚
- 关键词：乙型肝炎病毒HEPG2细胞株
