李爱
- 作品数：12 被引量：35H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 一种改良的精确分析酸敏感性离子通道特性的优化记录方法(英文)
- 2008年
- 目的用一种改良的灌流方法研究和再次证实HEK293细胞内源性酸敏感性离子通道的生物物理和药理学特性。方法使用全细胞膜片钳技术,将记录细胞与玻片分离,并使细胞位于输液管前,呈漂浮状态,以记录在低pH值外液中,HEK293细胞的酸敏感性1a型离子通道的电流。结果使用细胞漂浮方法,pH5.0的细胞外液诱发的酸敏感性1a型离子通道电流是传统细胞附着法诱发的两倍。在两种不同的方法下,通道电流达到峰值的时间分别是(21±5)ms和(270±25)ms,失活的时间常数分别是(496±23)ms和(2284±120)ms。细胞漂流法也明显增强amiloride对酸敏感性1a型离子通道的阻断效能。两种方法具有相似的pH激活的EC50(分别为6.6±0.6,6.6±0.7)。结论酸敏感性1a型离子通道的激活需要细胞外液快速的交换。通过细胞漂浮的方法,我们再次证明了酸敏感性1a型离子通道电流的存在,更精确地分析了HEK293细胞内源性酸敏感型离子通道的生物物理和药理学特性。这一改良的方法能够用于研究所有的酸敏感型离子通道和需要快速细胞外液交换的配体门控通道。
- 李爱司文胡新武刘长金曹晓华
- 关键词：PH值
- 大麻素对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸激活电流的抑制作用被引量：2
- 2007年
- 目的探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用。方法采用全细胞膜片钳技术。结果①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10～1000μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断。②预加WIN55,212-2(0.03～10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性。WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;最大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85μmol/Lvs25.76μmol/L)。③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断。细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用。结论大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一。
- 周莹刘长金李爱胡新武陈蕾刘烈炬
- 关键词：Γ-氨基丁酸A受体全细胞膜片钳
- 大麻素抑制大鼠三叉神经节神经元ATP激活电流(英文)被引量：1
- 2007年
- 本文在培养的大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)神经元上采用全细胞膜片钳技术,探讨大麻素对大鼠TG神经元ATP激活电流(ATP-activated currents,I_(ATP))的影响。结果显示:(1)胞外给予ATP,大部分受检细胞(67/75,89.33%)可记录到一个内向电流,且具有剂量依赖性。该电流可被P2X嘌呤受体特异性拮抗剂PPADS所阻断。(2)预加WIN55212-2[大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1受体)激动剂]可对I_(ATP)产生抑制作用,此作用呈剂量依赖性,并可被CB1受体特异性拮抗剂AM281阻断。预加不同浓度的WIN55212-2(1×10^(-13)、1×10^(-12)、1×10^(-11)、1×10^(-10)、1×10^(-9)和1×10^(-8)mol/L)对I_(ATP)(1×10^(-4)mol/L ATP)的抑制作用分别为(8.14±3.14)%、(20.11±2.72)%、(46.62±3.51)%、(72.16±5.64)%、(80.21±2.80)%和(80.59±3.55)%。(3)预加WIN55212-2后I_(ATP)的浓度-反应曲线明显下移:最大反应浓度时的I_(ATP)幅值减小了(58.02±4.21)%,而阈值基本不变;预加WIN55212-2前后曲线的EC_(50)值非常接近(1.15×10^(-4)mol/L vs 1.27×10^(-4)mol/L)。(4)预加forskolin[腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)激动剂]或8-Br-cAMP可以逆转WIN55212-2对I_(ATP)的抑制作用。以上结果表明,大麻素可能作用于CB1受体,通过抑制AC-cAMP-PKA途径发挥对I_(ATP)的抑制作用。
- 申晶晶刘长金李爱胡新武陆永利陈蕾周莹刘烈炬
- 关键词：大麻素受体1P2X受体三叉神经节膜片钳技术
- 甲基汞诱导海马神经细胞凋亡及其机制研究被引量：5
- 2008年
- 目的研究甲基汞对海马神经元的损伤及致凋亡作用,并初步探讨甲基汞神经毒性的机制。方法以5d内新生SD大鼠海马神经元为实验对象,用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测甲基汞对培养的海马神经细胞活性的影响,原位末端标记(TUNEL)法和流式AnnexinV-FITC-PI法检测甲基汞诱导海马细胞凋亡细胞数和凋亡百分率,并用激光共聚焦技术,从单个细胞水平检测甲基汞对胞内游离Ca2+瞬间动态变化的影响。结果MMT法显示,0.1μmol/L甲基汞作用24h对培养的海马神经细胞杀伤率为(22.90±2.77)%(n=7)。TUNEL法显示,0.1μmol/L甲基汞作用24h组海马神经元凋亡指数[(34.45±1.30)%,n=10]高于溶剂对照组[(6.01±0.64)%,n=10],差异有统计学意义(P<0.01)。流式AnnexinV-FITC-PI法显示,0.1μmol/L甲基汞作用24h诱导海马神经细胞凋亡率为(51.20±4.98)%(n=5)。即时染毒0.01、0.1、1μmol/L甲基汞,使海马神经元细胞内游离钙离子浓度分别增加(5.58±2.37)%(n=5),(82.71±20.42)%(n=4)和(246.38±64.77)%(n=4)。预孵育硝苯的平可延缓甲基汞升钙作用的起效时间并降低胞内钙离子浓度增加的幅值。结论甲基汞对培养的海马神经细胞的急剧升钙作用可能参与了甲基汞的致细胞损伤和诱导凋亡作用,并且可能与细胞膜上的电压门控钙通道有关。
- 李爱陈雷胡新武张亮品曹雪红刘烈炬刘长金
- 关键词：汞神经元凋亡细胞内游离钙
- 缺氧对小鼠背根神经节细胞I_K电流的影响(英文)
- 2008年
- 目的:探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法:应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录IK电流。结果:当小细胞缺氧时,钾通道在3 min之内即可发生变化,表现为绝大多数(86%,6/7)细胞的IK减弱,1个细胞(14%,1/7)的IK电流增强;缺氧1 min时IK减弱,3 min时产生最大抑制。当测试电位从+10 mV至+70 mV时,急性缺氧显著性降低IK,IK电流密度降低最大幅度从(304.4±122.9)降为(253.9±106.4)pA.pF-1,但IK稳态激活曲线无明显变化。结论:急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞IK电流,而IK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。
- 李爱曹雪松曹雪红高琳琳胡新武张亮品陈蕾刘烈炬刘长金
- 关键词：缺氧电压门控钾通道全细胞膜片钳
- β-淀粉肽-(1-40)对电压依赖性钙电流的作用及铝和银杏内酯B对该作用的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨不同时期配制的 β 淀粉肽 (1 4 0 ) (Aβ1 40 )对大鼠海马CA1区锥体神经元高电压依赖性钙通道电流 (IHVA)的作用并观察铝和银杏内酯B (GB)对该作用的影响。方法 应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元IHVA电流 ,并观察药物对其的作用。结果 (1)细胞外给予老化处理的Aβ1 40 可以增强IHVA幅度 ,Aβ1 40 的作用具有不可逆性和浓度依赖性 ;新鲜配制的Aβ1 40 对IHVA几乎没有影响。 (2 )Aβ1 40 增强IHVA的作用可以被L 型钙通道阻断剂nifedipine抵消。 (3)PKA的抑制剂H 89可以抵消Aβ1 40 对IHVA的增强作用。 (4)Aβ1 40 增加IHVA的作用可被 1 0mmol/L的AlCl3 进一步增加。 (5 )细胞外给予GB对正常的IHVA没有影响 ,但可抵消Aβ1 40 对IHVA的增强作用。结论 β 淀粉肽(Aβ)通过增强IHVA可引起胞内钙超载 ,这可能是其产生神经毒性作用的机制之一 ,铝可以加强Aβ的毒性作用 ;GB可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用。
- 陈蕾刘长金唐明胡新武李爱张亮品骆红艳胡晓玲
- 关键词：AΒ1-40银杏内酯B细胞外淀粉
- 甲基汞诱导海马神经细胞调亡及其机制研究
- 甲基汞是一种具有神经毒性的环境污染物,它主要侵犯中枢神经系统,造成不可逆性脑损害。由于海马在学习记忆中具有重要地位,也是汞神经毒性的一个重要的靶位,所以本研究选用培养的海马神经细胞作为实验对象,用四甲基偶氮唑盐(MTT)...
- 李爱陈雷胡新武张亮品曹雪红刘烈炬刘长金
- 文献传递
- β-淀粉肽(1-40)对海马神经元高电压激活钙电流的作用及银杏内酯B对该作用的影响(英文)被引量：9
- 2006年
- 应用全细胞膜片钳技术探讨β-淀粉肽(1-40)(β-amyloid peptide1-40,Aβ1-40)对新鲜分离的大鼠海马CA1区锥体神经元高电压依赖性钙通道电流(high voltage-activated calcium channel current,INVA)的作用并观察银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对该作用的影响。利用细胞外灌流或者电极内液给药的方法,比较加药前后电流幅度的变化以判断药物是否发挥作用。细胞外给予老化处理的Aβ1-40可以浓度依赖性地增强IHVA的幅度,Aβ1-40的浓度为0．01-30 μmol/L时可分别使IHVA幅度增加(5．43±3．01)％(n=8, P>0．05)、(10．49±4．13)％(n=11,P>0．05)、(40．69±8．01)％(n=16,P<0．01)、(58．32±4．85)％(n=12,P<0．01)和(75．45±5．81)％ (n=6,P<0．01);新鲜配制的Aβ1-40对IHVA几乎没有影响(n=5,P>0．05)。L-型钙通道阻断剂nifedipine可以抵消Aβ1-40对IHVA的增强作用。Aβ1-40(1．0 μmol/L)对IHVA的增强作垌可以被cAMP的类似物8-Br-cAMP和腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)的激动剂forskolin增强[分别为(66．19±5．74)％,P<0．05和(73．21±6．90)％,P<0．05],被蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的抑制剂H- 89减弱[(20．08±2．18)％,P<0．05]。GB可有效地减弱Aβ1-40对IHVA的增强作用。以上结果表明Aβ1-40可通过AC-cAMP-PKA 增强IHVA引起胞内钙超载,这可能是其产生神经毒性作用的机制之一。GB可通过抑制Aβ1-40引起的异常钙离子内流对神经元起一定保护作用。
- 陈蕾刘长金唐明李爱胡新武周莹Jürgen Hescheler
- 关键词：海马银杏内酯B膜片钳技术
- 低渗透压对大鼠三叉神经节神经元GABA激活电流的抑制作用被引量：1
- 2008年
- 目的探讨低渗透压对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用及胞内信号转导机制。方法全细胞膜片钳技术。结果实验中大部分受检细胞(89.2%)对外加GABA(10～1000μmol/L)敏感,可产生一具有明显浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱阻断。预加低渗透压(567.3、670.5、773.6kPa)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性和非电压依赖性。低渗透压+GABA的量效曲线较单独的IGABA量效曲线明显下移,而两者的阈值和最大反应浓度基本不变,分别为10μmol/L和1000μmol/L;两条曲线的EC50值非常接近,分别为29.41μmol/L和33.02μmol/L;预加低渗透压后最大反应浓度时,IGABA的幅值减少了(31.38±2.13)%。低渗透压对IGABA的抑制作用可被瞬时感受器电位辣椒素4亚型(TRPV4)受体非特异性阻断剂钌红部分阻断,可被TRPV4受体激动剂4α-PDD增强。细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转低渗透压对IGABA的抑制作用。结论低渗透压作用于TRPV4受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,这可能是低渗透压对IGABA的调节机制之一。
- 衡璐李爱胡新武陈筱雨刘长金
- 关键词：GABAA受体全细胞膜片钳
- 抗同型磺基丙氨酸单克隆抗体的制备和定性被引量：1
- 2001年
- 用戊二醛将 L-同型磺基丙氨酸 ( L- HCA)连接到牛血清白蛋白 ( BSA) ,形成 L- HCA- BSA连接物。用 L- HCA-BSA免疫小鼠后 ,收集脾淋巴细胞 ,并与骨髓瘤细胞融合。用含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核甙 ( HAT)培养基保留杂交细胞。用 EL ISA法筛选能够分泌与 L- HCA- BSA产生免疫反应的杂交细胞。通过 EL ISA抗体系列稀释试验和抗体吸收试验 ,确定抗体特异性。结果表明 ,抗 L- HCA单克隆抗体 ( Mc Ab) 2 D4能特异地与 L- HCA- BSA产生免疫反应。用 L- HCA- BSA吸收 L- HCA Mc Ab,可明显降低或取消 L- HCA抗体与 L- HCA- BSA的免疫反应。结果提示 :L- HCAMc Ab对 L- HCA- BSA具有特异性 ,可用于免疫组织和细胞化学研究 L- HCA在神经系统中的分布和定位。
- 刘长金李爱胡新武张亮品
- 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附测定
