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李韧: 作品数：36 被引量：114H指数：5; 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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高氧液对兔全脑缺血再灌注损伤生化指标的影响被引量：41: 2002年; 目的　探讨高氧液对兔全脑缺血再灌注损伤的保护作用 .方法　 18只家兔随机分 3组 (n=6 ) .用夹闭双侧颈总动脉加降压法建立全脑缺血模型 .A组再灌注时用平衡液 2 0m L· kg- 1 静脉推注 (对照组 ) ;在再灌注时用高氧液 2 0 m L·kg- 1 静脉推注 (治疗组 ) ;C组于实验前 3d用高氧液 2 0 m L·kg- 1静脉推注每日 1次 (预处理组 ) .各组在缺血前、缺血 2 0min和再灌注 4 5 min抽取颈内静脉血测定血浆一氧化氮(NO) ,超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA) .结果　再灌注后 B组和 C组 MDA含量明显低于 A组 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 ) ,B组和 C组血浆 SOD活性高于 A组 (P<0 .0 5 ) .B组和 C组血清 NO含量明显低于 A组 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 ) .结论　高氧液对神经元缺血损伤具有保护作用 .; 曾真徐礼鲜李韧; 关键词：高氧液全脑缺血再灌注损伤生化指标一氧化氮

新型自杀基因1inamaras／linamarinnamarase／Inamarin的构建及对肝癌细胞MHCC97的体外杀伤效应: 2008年; 目的构建表达亚麻苦甙水解酶（linamarase，lis）基因的重组真核载体，建立亚麻苦甙水解酶／亚麻苦甙（linamarase／linamarin，lis／lin）肿瘤自杀基因治疗系统并检测其对肝癌细胞MHCC97的体外杀伤效应。方法将lis基因定向克隆人真核载体pEGFPN1，并用限制性内切酶进行酶切及测序鉴定；用电转染法将pEGFP-N1-lis转染人肝癌细胞MHCC97，通过G418筛选建立稳定表达lis的细胞系，MTT法检测lis／lin自杀基因治疗系统在体外的抗肿瘤效应。结果经酶切鉴定和DNA序列测定，证明1is基因成功定向插入到pEGFP—N1载体中；G418压力筛选4周，得到稳定表达lis的MHCC97细胞，命名为MHCC97-lis。经检测，新型自杀基因系统lis／lin对肿瘤细胞有较强的杀伤作用并显示出旁观者效应。结论成功获取表达lis基因的真核表达载体，已建立显示出对肿瘤细胞的杀伤作用以及旁观者效应的自杀基因治疗系统，为进一步研究新型自杀基因lis／lin抗肿瘤作用奠定基础。; 马俊陈明浩李海民李军李韧张福琴窦科峰; 关键词：自杀基因

大鼠肝癌肺转移灶中肿瘤干细胞的分离与表型鉴定: 目的:探索和建立分离肝癌远处器官转移灶中干细胞样肝癌细胞的分离和鉴定方法,并探讨肝癌肿瘤干细胞与肝癌发生及转移之间的关系. 方法:利用二乙基亚硝胺(DEN)建立大鼠肝癌肺转移灶模型;组织块原代培养法扩增培养肺转...; 李韧窦科峰刘正才宋文杰千年松于恒超; 关键词：肝癌转移肿瘤干细胞肿瘤转移; 文献传递

NHE1 mRNA在肝癌组织的表达及意义被引量：2: 2009年; 目的探讨钠氢交换蛋白1(NHE1)mRNA在原发性肝细胞肝癌组织及癌旁组织的表达及意义。方法采用RT-PCR检测诊断为HCC患者34例的肝癌及癌旁组织中NHE1 mRNA的表达情况。结果所有肝癌组织和癌旁组织NHE1均有表达,相对表达量分别为2.892±0.882和0.802±0.206,两者存在显著性差异(P<0.001)。作为对照的21例肝组织NHE1的相对表达量为0.872±0.186。肝癌组织与对照肝组织比较存在显著性差异(P<0.001);癌旁组织与对照肝组织比较差异无统计学意义(P>0.10)。将从同一患者取材的肝癌组织和癌旁组织检测到的NHE1 mRNA的表达量进行配对t检验,两者间存在显著性差异(P<0.001)。结论NHE1 mRNA在肝癌组织的表达增高,可能在肝癌的发生中起一定的作用。; 李杰窦科峰张洪涛张超李韧张福琴王德盛; 关键词：肝细胞癌

大鼠肝硬化模型中小肝细胞分离培养方法的建立及其表型分析被引量：2: 2007年; 目的:探讨体外分离培养大鼠小肝细胞(SHC)的方法,并对其进行表型鉴定。方法:利用二乙基亚硝胺饲喂法,建立SD大鼠肝硬化模型。采用改进后两步胶原酶灌注消化法分离细胞。光镜下观察细胞形态。电镜下观察细胞形态及超微结构。采用计数法测定细胞生长曲线,流式细胞术(FCM)测定细胞周期。通过免疫细胞化学染色法进行表型鉴定。结果:原代培养的大鼠SHC,24h内即可见贴壁伸展,48h左右克隆形成。光镜下可观察SHC核仁小而清晰,胞质少,细胞体积较小;电镜下可见SHC表面少量短而小的微绒毛突起,细胞体积小,核浆比例高,呈现未分化细胞的形态。免疫细胞化学染色显示SHC胞质AFP、CK-7、CK-8及CK-19呈棕黄色阳性信号。结论:改进后的两步胶原酶灌注消化方法能较容易地获得大量纯度较高的SHC。; 于恒超李韧千年松窦科峰; 关键词：免疫细胞化学

小鼠胎肝干细胞的生长和分化模式及鉴定被引量：1: 2009年; 目的体外培养小鼠胎肝细胞，探索其生长和分化模式，并进行干细胞特征的表型鉴定。方法分离培养不同时期小鼠胎肝细胞，动态观察细胞形成的集落数及生长模式；收获集落进行干细胞表面标记物流式检测；传代培养胎肝细胞，探索甲胎蛋白（AFP）变化趋势及细胞分化模式。结果经体外培养，第15天胎肝细胞形成明显集落，生长状况最好，干细胞的表面标记提示形成的集落具有肝干细胞特性。传代培养中，第15天胎肝干细胞以线性模式生长；分化模式中AFP呈现正态分布变化。结论随胎龄增加，有干细胞特性的细胞逐渐减少。体外培养中，肝干细胞呈线性模式增殖，逆向线性方式分化。; 刘卫辉李韧窦科峰; 关键词：肝干细胞分化

肝癌组织中Fas和FasL mRNA表达水平的变化及其意义被引量：6: 2005年; 目的　探讨肝癌、癌旁及正常肝组织中Fas和FasL mRNA表达水平的变化与肝癌发生、发展的关系及其意义。方法　应用半定量RT PCR的方法检测肝癌(40例)、癌旁(40例)及正常肝(25 例)组织中Fas及FasLmRNA表达的相对含量。结果　正常肝组织、癌旁及肝癌组织中Fas 和FasL mRNA 表达的相对含量分别为0.792±0.039和0.245±0.043、0.857±0.031和0.429±0.035以及0.473±0.047和0.185±0.041。肝癌组织中Fas mRNA表达的相对含量明显低于正常肝组织和癌旁组织(P<0.05); 肝癌组织中FasL mRNA表达的相对含量亦明显低于正常肝组织(P<0.05)和癌旁组织(P<0.01),但癌旁组织中FasL mRNA表达的相对含量高于正常肝组织中的表达(P<0.05)。结论　肝癌组织不仅通过低表达Fas来逃避机体的免疫监视作用,而且还通过癌旁组织FasL的高表达,使与之接触的淋巴细胞(表达Fas)凋亡,最终使肝癌细胞逃脱机体的免疫杀伤作用,得以增殖和转移。; 李海民窦科峰李韧周景师帝振宇张福琴; 关键词：肝癌癌旁组织正常肝组织 FAS FASL

罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定被引量：4: 2008年; 目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HeDG2细胞分为Rho^(low)和Rho^(high)2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50% vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P<0.01),Rho^(low)亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rho^(low)亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.; 千年松李韧于衡超曹云新张福琴窦科峰; 关键词：肝细胞癌罗丹明123 肿瘤干细胞

反义cortactin基因真核重组质粒的构建及鉴定: 2006年; 目的:构建一个包含人皮层肌动蛋白(cortactin)反义基因的全部功能区的重组真核表达载体pcDNA3.0/cortac-tin,为进一步研究人皮层肌动蛋白对人肝癌细胞的转移影响的研究奠定基础.方法:Trizol试剂法提取体外培养的人肝癌高转移细胞株MHCC97总RNA,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段,PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌Ecoli.Dh5α扩增以获得重组载体.结果:RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段,经PCR、双酶切鉴定及测序证实已将人皮层肌动蛋白基因cDNA片段正确的反向插入真核表达载体中.结论:成功获得反义pcDNA3.0/cortactin重组质粒.; 许朱定宋振顺安家泽李韧张福琴窦科峰; 关键词：基因表达逆转录聚合酶链反应

犬下颌骨牵张成骨过程中咀嚼肌肌球蛋白重链mRNA含量变化的研究: 2003年; 目的　通过对犬下颌骨牵张成骨过程中咀嚼肌肌球蛋白重链mRAN相对含量的测定 ,研究牵张成骨过程中肌肉的增殖与改建能力 ,探讨牵张成骨术的术后稳定性。方法　 12只西安本地杂种犬分为 6组 :对照组、牵张 5天组、牵张 10天组、固定 2周组、固定 4周组和固定 8周组。麻醉后分别取嚼肌与颏舌骨肌的中央部分对MHCⅠ、MHCⅡ及GAPDH (内参照 )的mRNA进行RT -PCR。结果　试验各组嚼肌中各项检测指标与对照组相比没有显著性差异。牵张 5天后颏舌骨肌中MHCⅠ的mRNA转录增加 ,MHCⅡ的mRNA转录受到抑制 ,而MHCⅠ +MHCⅡ的mRNA含量出现上升 ,刚刚牵张完成时变化最为明显 ,牵张完成固定 4-8周时基本恢复。结论　在下颌骨牵张成骨过程中 ,相关的咀嚼肌会发生增生与肥大 ,并发生适应性的改建。; 夏春鹏丁寅李韧李菲菲张春光; 关键词：咀嚼肌牵张成骨肌球蛋白重链 MRNA

李韧

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