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哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在不同发育阶段SD大鼠睾丸中的表达及作用被引量：8: 2012年; 精子发生是男性生殖中的主要过程,精原细胞的不断分裂增殖又保证了精子发生的顺利进行。随着年龄的不断增长,男性精子的数量、质量出现下降趋势。mTOR信号转导通路在细胞增殖分化中发挥着中心调控作用,因此,mTOR信号通路可能在精子发生过程中有着重要的地位。为了探明mTOR信号通路与精子发生的关系,首先,通过SD大鼠睾丸组织切片的免疫组化,发现mTOR是在生精小管的精原细胞胞浆中表达;其次,采用FQ-PCR检测mTOR mRNA在SD大鼠睾丸中的表达。结果显示,80周龄组mTOR的转录与8周龄组相比差异显著。最后利用Western blot检测出mTOR蛋白的表达及其对下游靶蛋白P70S6K的磷酸化效率均随年龄的增长逐渐下降。同时,在用雷帕霉素处理8周龄SD大鼠中,发现精子数量减少,P70S6K磷酸化效率降低并伴随生精小管萎缩和空泡化。通过这些结果,可以看出mTOR信号转导通路可能在精子发生中发挥着重要作用。; 许皓陈雪梅丁裕斌何俊琳王应雄杨德辉刘学庆; 关键词：睾丸精子发生 MTOR 雷帕霉素 P70S6K

Hsa-miR-200a真核表达载体的构建及鉴定: 2012年; 目的:通过构建及鉴定miR-200a的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-200a,为进一步研究miR-200a的功能奠定实验基础。方法:RT-PCR扩增pre-miR-200a基因序列,连接于表达载体pcDNA3.1(+)中,对重组质粒双酶切鉴定并测序验证。结果:pcDNA3.1(+)-miR-200a真核表达载体经酶切及测序鉴定正确。结论:pcDNA3.1(+)-miR-200a真核表达载体构建成功,为下一步深入研究miR-200a的生物学功能和验证miR-200a的靶基因提供有效工具。; 陈倩陈雪梅何俊琳王应雄丁裕斌杨德辉刘学庆; 关键词：MICRORNAS 真核表达载体肿瘤

Hsa-miR-193b抑制人子宫内膜腺癌细胞株HEC-1B侵袭能力被引量：4: 2011年; 目的探讨Hsa-miR-193b对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭的影响及其相关机制。方法将Hsa-miR-193b模拟物(mimics)、Hsa-miR-193b抑制剂(inhibitor)转染HEC-1B细胞,Real-time PCR证实转染是否成功;Transwell小室法检测转染Hsa-miR-193b mimics后HEC-1B细胞的侵袭能力;通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查Hsa-miR-193b指向与侵袭相关的靶基因;Real-time PCR检测转染Hsa-miR-193b mimics转染组和对照组mRNA水平;Western blot检测各组GRB7蛋白表达的水平。结果①Hsa-miR-193b mimics、Hsa-miR-193b inhibitor转染HEC-1B细胞成功,两转染组Hsa-miR-193b表达水平与未转染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②转染Hsa-miR-193b mimics组与对照组比较,肿瘤细胞的侵袭能力明显降低(P<0.05)。③转染后,靶基因GRB7蛋白Hsa-miR-193b mimics组表达下降(P<0.05)、Hsa-miR-193b inhibitor组表达增加(P<0.05),且各组GRB7 mRNA水平无显著变化。结论在HEC-1B中转染Hsa-miR-193b mimics能下调GRB7蛋白表达,并抑制HEC-1B细胞的侵袭。; 李荣陈雪梅何俊琳丁裕斌杨德辉许皓郑安舜刘学庆; 关键词：子宫内膜癌

早孕小鼠胚胎着床窗口期子宫内膜mmu-miR-106b表达规律及其作用: 2013年; 目的:探讨mmu-miR-106b在早孕小鼠胚胎着床过程中的表达规律,阐明其对胚胎着床的调控作用。方法:应用realtime PCR和原位杂交检测mmu-miR-106b在早孕小鼠孕4 d、孕5 d及孕6 d子宫内膜中的表达;子宫内膜基质细胞转染mmumiR-106b的模拟物和抑制剂后,MTT和流式细胞仪检测细胞的增殖凋亡情况;结合靶基因预测数据库,利用Western blot确定mmu-miR-106b在子宫内膜中的靶基因。结果:mmu-miR-106b在小鼠孕6 d子宫内膜的表达较孕4 d明显下调(P=0.039),孕5 d着床点与着床旁组织表达无明显差异(P=0.606),定位于子宫内膜基质细胞;上调mmu-miR-106b会促进子宫内膜基质细胞的增殖,下调其表达会促进细胞凋亡;通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查获得与胚胎着床相关的靶基因核磷蛋白1、肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,Tsg101)和10号染色体缺失的同源性磷酸酶张力蛋白等,其中Tsg101的表达受到mmu-miR-106b负调控(P=0.042)。结论:mmu-miR-106b可能通过靶向Tsg101,影响胚胎着床过程中子宫内膜基质细胞增殖,对胚胎着床发挥调控作用。; 耿艳清杨德辉鲁之中陈雪梅何俊琳王应雄丁裕斌刘学庆; 关键词：胚胎着床子宫内膜

mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜中的表达及作用被引量：2: 2012年; 目的:探讨mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜组织中的表达及作用。方法:荧光定量PCR(FQ-PCR)及原位杂交检测早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜mmu-miR-141的表达;MTT和流式细胞术检测孕第4日(d 4)子宫内膜基质细胞被mmu-miR-141抑制剂作用72 h后其细胞活力和细胞凋亡情况。结果:mmu-miR-141在小鼠胚胎着床后(d 6)子宫内膜组织中的表达明显低于着床前(d 4)(P<0.05),且表达于基质细胞;其表达下调能使基质细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:mmu-miR-141通过调控子宫内膜基质细胞的增殖或凋亡,在早孕小鼠胚胎着床前、后的子宫内膜组织中发挥重要的作用。; 郑安舜杨德辉何俊琳陈雪梅丁裕斌王应雄刘学庆; 关键词：胚胎着床

hsa-miR-200a对HEC-1B人子宫内膜腺癌细胞系增殖与凋亡的影响被引量：1: 2012年; 目的探讨hsa-miR-200a对人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法应用荧光实时定量PCR(FQ-PCR)法检测hsa-miR-200a在人子宫内膜腺癌细胞HEC-1B中的表达水平;人工合成hsa-miR-200a模拟物、抑制剂,分别转染HEC-1B细胞;采用MTT法、流式细胞仪检测上调及抑制hsa-miR-200a的表达对HEC-1B细胞增殖活性与凋亡的影响;运用生物信息学分析hsa-miR-200a指向的与增殖和凋亡相关的靶基因;Western blot、FQ-PCR检测转染前后靶蛋白及其mRNA的表达水平。结果子宫内膜腺癌细胞HEC-1B表达hsa-miR-200a;FQ-PCR检测hsa-miR-200a模拟物、抑制剂转染HEC-1B细胞成功;MTT法检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞增殖抑制明显;流式细胞仪检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞凋亡增加;生物信息学分析结果表明hsa-miR-200a调控的靶基因是SON、Pdcd4、磷酸酶-张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN);靶蛋白PTEN在转染模拟物组表达下调,抑制剂组中表达上调,且转染前后靶基因mRNA水平无显著变化,而蛋白SON、Pdcd4的表达量没有显著变化。结论 HEC-1B细胞中hsa-miR-200a表达与PTEN蛋白表达呈负相关,表明hsa-miR-200a可能通过调节PTEN蛋白表达水平从而影响HEC-1B细胞的增殖与凋亡。; 杨德辉陈雪梅何俊琳王应雄丁裕斌李荣刘学庆; 关键词：子宫内膜癌 PTEN

MicroRNA-200a通过靶向肿瘤抑制因子PTEN影响HEC-1B细胞的增殖与凋亡: 目的：　　人工合成hsa-miR-200a mimics、inhibitor，分别转染HEC-1B细胞;采用MTT法、流式细胞技术检测上调及抑制miR-200a的表达对HEC-1B细胞增殖活性与凋亡的影响;运用生物信息学...; 杨德辉; 关键词：增殖抑制子宫内膜癌

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杨德辉

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