杨雨琪
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：天津医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- scFvCD20:sTRAIL蛋白诱导BJAB细胞凋亡的实验研究
- 2016年
- 研究融合蛋白scFvCD20:sTRAIL诱导B淋巴瘤细胞BJAB凋亡的发生以及凋亡相关蛋白的表达变化。采用PCR、重叠PCR、酶切、连接等方法构建pLentiR.scFvCD20:sTRAIL、pLentiR.ISZ-sTRAIL、pLentiR.scFvCD20及pLentiR.CopGFP慢病毒表达载体,瞬时转染293T细胞获得含有scFvCD20:sTRAIL融合蛋白的细胞培养上清,采用CCK8细胞增殖抑制实验检测scFvCD20:sTRAIL融合蛋白对CD20阳性BJAB细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其对BJAB细胞诱导凋亡,Western blotting检测凋亡过程中内源性及外源性凋亡信号传导途径相关蛋白的变化。结果显示,成功构建了慢病毒表达载体pLentiR.scFvCD20:sTRAIL、pLentiR.ISZ-sTRAIL、pLentiR.scFvCD20及pLentiR.CopGFP,瞬时转染293T细胞后并可获得融合蛋白的表达。与ISZ-sTRAIL比较,融合蛋白scFvCD20:sTRAIL可不同程度地提高对CD20阳性BJAB细胞的生长抑制作用,凋亡细胞增多,其中Bcl-2表达下降、Bax表达升高,Caspase 8、Caspase 9、Caspase 3及PARP被特异性剪切活化。研究表明,融合蛋白scFvCD20:sTRAIL可诱导BJAB细胞凋亡,与bcl-2/bax的表达变化以及Caspase的剪切活化有关。
- 杨雨琪张晓龙张砚君吕军强孙睿声安鹏姣于楠楠
- 关键词：CD20TRAILB淋巴细胞蛋白表达
- 二硫键稳定的抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的表达及活性测定被引量：1
- 2014年
- 构建了抗CD3/抗CD19(Diabody)微型双功能抗体,并且为增强其稳定性进一步改造为二硫键稳定的抗CD3/抗CD19(ds-Diabody)微型双功能抗体,表达并纯化后测定其生物学活性。构建二硫键稳定的抗CD3/抗CD19表达载体p AYZds CD3CD19,转化感受态大肠杆菌16C9进行原核表达,分离纯化后,经12%SDS-PAGE及Westen-blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测ds-Diabody与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞的结合活性。改造后的ds-Diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达,ds-Diabody在非还原性SDS-PAGE中,在45 k处可见一条带,Westen-blot在同一位置显示有带,在还原性SDSPAGE中45 k处条带消失,在28 k和26 k各有一条带,Western-blot在28 k显示有带,这些均与理论相符,45 k为二硫键稳定的二聚体,在还原剂巯基乙醇作用下二硫键断开,形成28 k和26 k的2条带。FACS检测ds-Diabody可与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制单抗HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合。说明改造后的二硫键稳定的抗CD3/抗CD19双功能抗体既能在原核系统中进行可溶性表达,同时又保留了与细胞的结合活性。
- 杨雨琪金锐高子璐岳凯李崴
- 关键词：DIABODY抗CD3二硫键药物稳定性
- 阿糖胞苷联合双功能抗体介导T细胞杀伤人急性B淋巴细胞白血病细胞体内外研究被引量：1
- 2014年
- 目的:通过体内外实验探讨阿糖胞苷对抗CD3/抗CD19双功能抗体介导的T淋巴细胞杀伤人急性B淋巴细胞白血病(B acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞的协同作用。方法:采用流式细胞术检测经阿糖胞苷(0.062 5、0.125、0.25、0.5μmol/L)刺激的Nalm-6细胞(1×106)及5例B-ALL患者临床标本CD80和CD86分子的表达;Ficoll-Hypaque法分选健康志愿者外周血T淋巴细胞,以4×105 Nalm-6细胞(经过或未经Ara-C刺激)为靶细胞,建立T细胞体外杀伤实验并分组加入各种抗体(PBS、抗CD3/抗CD19双抗、抗CD3scFv、抗CD19scFv、抗CD3scFv+抗CD19scFv和抗CD3/抗Pgp双抗组),通过实时定量PCR测定各组激活的T细胞细胞因子IL-3、IFN-γ和TNF-α的表达,利用流式细胞术检测各组T细胞穿孔素和颗粒酶B的释放。以1×107 Nalm-6细胞建立NOD/SCID鼠移植瘤模型,依次注射阿糖胞苷,T细胞及各种或各浓度抗体,比较各组体内靶向杀伤效果。建立临床标本的动物模型,重复上述分组,并进一步验证双抗联合阿糖胞苷介导的体内杀伤效果。结果:Nalm-6经阿糖胞苷刺激后,细胞CD80的表达量MFI为13.25±3.93,0.062 5μmol/L为20.58±3.94,P=0.015;0.125μmol/L为38.6±5.37,P=0.011;0.25μmol/L为62.56±6.24,P=0.007;0.5μmol/L为75.04±4.42,P=0.005,呈浓度依赖性。抗CD3/抗CD19组T淋巴细胞穿孔素(MFI为10.61±2.43,P=0.024)和颗粒酶B(MFI为20.60±2.61,P=0.037)的释放较其余各实验组明显升高,Ara-C刺激Nalm-6细胞组,穿孔素(MFI为23.11±2.90,P=0.015)和颗粒酶B(MFI为31.71±3.08,P=0.008),较未经Ara-C刺激组表达量高。抗CD3/抗CD19组T淋巴细胞IL-3(100.60±8.32,P=0.017)、IFN-γ(67.60±7.41,P=0.025)和TNF-α(47.60±3.24,P=0.031)表达对照T细胞组明显升高,并且Ara-C刺激Nalm-6细胞组IL-3(132.55±5.56)、IFN-γ(109.60±6.50)和TNF-α(64.30±8.55)较未经Ara-C刺激组表达量更高,P值均<0.05。在NOD/SCID鼠移植瘤模型的生物治疗实验中,阿糖胞苷联合双功能抗体组抑制移植瘤的生长�
- 李崴王东骆惊涛张强高子璐杨雨琪金锐
- 关键词：阿糖胞苷CD3CD19白血病
- 人类B细胞淋巴瘤耐药细胞株BJAB/ADR的建立及其耐药机制的初步研究被引量：1
- 2014年
- 目的 建立人类淋巴瘤B JAB多药耐药细胞株BJAB/ADR,并初步研究其耐药机制.方法 采用多柔比星浓度梯度递增法建立人类B细胞淋巴瘤耐药细胞模型BJAB/ADR,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法鉴定耐药细胞株对多种化疗药物的耐药性并计算耐药指数;提取耐药细胞株RNA,实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测相关耐药基因MDR1 mRNA的表达;流式细胞术检测细胞表面P糖蛋白（Pgp）的表达;通过罗丹明外排实验,检测Pgp功能.结果 成功建立B细胞淋巴瘤耐药细胞模型BJAB/ADR,并在160 ng/ml多柔比星溶液中稳定生长,耐药细胞较敏感细胞生长缓慢,细胞形态无明显变化.MTT检测结果表明BJAB/ADR细胞对多柔比星的耐药指数为43倍,同时对柔红霉素、依托泊苷、高三尖杉酯碱（HHT）及米托蒽醌（MX）也具有一定的耐药性.实时定量PCR结果表明,耐药细胞BJAB/ADR MDRl mRNA明显高于药物敏感细胞BJAB（P＜ 0.01）.流式细胞术检测结果显示,耐药细胞表面Pgp高表达;罗丹明外排实验表明Pgp对多柔比星具有外排功能,使B JAB/ADR细胞获得耐药特性.结论 建立了人类B细胞淋巴瘤的耐药细胞株BJAB/ADR,其对多柔比星耐药性稳定,并呈现多药耐药细胞的基本生物学特性,为进一步研究肿瘤多药耐药发生的机制及逆转耐药提供有利的模型.
- 鲍世琦姜琳琳张晓龙李真真邵晓枫齐怀丰杨雨琪熊冬生
- 关键词：P糖蛋白多柔比星
- 融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM对B细胞淋巴瘤的抑制作用被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM在体内对B细胞淋巴瘤生长的抑制作用。方法利用流式细胞检测技术分析anti-CD19（Fab）-LDP抗体与B型淋巴瘤细胞体外免疫结合活性，并分析其平衡解离常数。建立Balb/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型，活体成像技术观察Cy5标记的anti-CD19（Fab）-LDP在裸鼠体内靶向定位作用。将融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM经尾静脉注射入Raji荷瘤裸鼠体内，观察其对肿瘤生长的抑制情况，计算抑瘤率，评价疗效。结果 anti-CD19（Fab）-LDP抗体与靶抗原的亲和活性与anti-CD19（Fab）抗体相当，两者的平衡解离常数分别为3.3＆#215;109M-1和4.3＆#215;109M-1。成功建立Raji淋巴瘤细胞皮下移植瘤模型，体内活体成像结果表明，融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDP可靶向定位到肿瘤部位。融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM对裸鼠移植性CD19＋B细胞淋巴瘤的生长具有抑制作用，并且具有剂量依赖性。结论融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM，具有较强的特异抗肿瘤疗效，作为抗体靶向药物，在B系淋巴瘤治疗中具有很好的应用前景。
- 张晓龙杨圆圆杨雨琪卢杨赵英新姜琳琳熊冬生范冬梅
- 关键词：重组融合蛋白质类抗肿瘤药移植瘤模型
- ABCB5和MDR1对急性髓系白血病耐药的影响
- 2014年
- 目的探讨ABCB5和MDR1在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)干祖细胞系KG1a和来源于AML病人标本中的表达及对白血病耐药的影响。方法 FACS和Western blot的方法检测KG1a细胞表面ABCB5及MDR1蛋白表达产物P-gp的表达水平;利用lipo2000转染siRNA的方法瞬时干扰ABCB5的表达;FACS检测细胞内Rhodamine123的蓄积;MTT法确定维拉帕米(verapamil,Vera)对KG1a的无毒剂量,并检测KG1a、siABCB5-KG1a及联用无毒剂量维拉帕米的KG1a对阿霉素(adriamycin,ADR)的敏感性;Real time-PCR的方法检测AML病人标本中ABCB5及MDR1的表达水平。结果 KG1a高表达ABCB5和P-gp,Pgp表达量高于ABCB5;siABCB5瞬时干扰可以降低KG1a中ABCB5的表达水平,进而增加KG1a细胞中Rhodamine123的蓄积;siABCB5-KG1a对阿霉素的敏感性提高8.6倍;而联用无毒剂量维拉帕米使KG1a对阿霉素的敏感性提高67.4倍。ABCB5在71例AML临床标本中的表达水平明显高于健康组,其中在38例复发或难治型病例中的表达水平明显高于其余33例化疗敏感型病例(P<0.01),且ABCB5的mRNA表达水平与MDR1呈正相关。结论 ABCB5与已知的P-gp相同,也参与介导AML的多药耐药,这为复发及难治的AML病例的临床治疗提供新的潜在靶点。
- 李真真张晓龙杨雨琪张晴袁向飞范冬梅
- 关键词：P-GP急性髓系白血病多药耐药复发难治
