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梁旺: 作品数：16 被引量：25H指数：3; 供职机构：复旦大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市重大科技攻关项目上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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兔股动脉粥样硬化斑块模型中TF及TFPI的变化被引量：2: 2008年; 目的:观察兔股动脉粥样硬化斑块发展过程中斑块内组织因子(TF)及组织因子途经抑制物-1(TFPI-1)、组织因子途经抑制物-2(TFPI-2)的变化。方法:新西兰雄兔通过高脂饲养合并股动脉球囊损伤建立动脉粥样硬化斑块模型。在建模8周、10周和12周,分别截取球囊损伤处股动脉标本,检测斑块组织内TF、TF-PI-1和TFPI-2的蛋白表达;并测定斑块内TF、TFPI-1和TFPI-2的mRNA水平。结果:自8周、10周到12周,血管斑块中TF、TFPI-1和TFPI-2的观测区域内阳性染色面积均逐渐增加。自8周、10周到12周,血管斑块中TF的mRNA水平和TFPI-1的mRNA水平均逐渐增加;TFPI-2mRNA表现为前期无明显变化,12周时显著下调。结论:在兔股动脉粥样硬化斑块的形成过程中,随着斑块内TF基因及蛋白表达的增加,TFPI-1和TFPI-2反应性表达增加,但其表达水平未能完全抑制斑块的进展。; 黄成磊罗心平李剑梁旺林伊凤金波沈伟施海明马端; 关键词：动脉硬化

丹参多酚酸盐对动脉硬化斑块组织因子及组织因子途径抑制物影响的实验研究被引量：6: 2007年; 目的研究丹参多酚酸盐对动脉粥样硬化(AS)斑块中组织因子、组织因子途径抑制物(TFPI)表达的影响,探讨丹参药理作用的新机制。方法24只新西兰雄兔分为正常对照组、球囊损伤对照组及丹参多酚酸盐治疗组;后两组建立高脂饲养加股动脉球囊损伤AS斑块模型。治疗组每天给予丹参多酚酸盐50 mg／kg,每天1次静脉注射,共7 d;球囊损伤对照组给予0．9％氯化钠溶液注射。4周后采用定量病理切片图像分析技术测量动脉内斑块组织中膜厚度和泡沫细胞阳性面积;免疫组化技术检测斑块组织内组织因子、TFPI-1、TFPI-2和MMP-2的分布及蛋白表达;实时定量PCR检测斑块内组织因子、TFPI-1, TFPI-2的基因变化。结果与对照组比较,丹参多酚酸盐治疗组内膜／中膜比值降低,斑块内泡沫细胞阳性面积显著下降(P值均<0．001);同时丹参多酚酸盐减少斑块内TF及MMP-2的表达(P<0．001),并对斑块组织TFPI-1和TFPI-2基因及蛋白表达均有显著影响(P<0．001)。结论丹参多酚酸盐影响AS斑块内TF、TFPI-1、TFPI-2代谢,可能是其抑制内膜增生、改善血液高凝状态和防止局部血栓形成的另一机制。; 黄成磊罗心平梁旺梁旺金波沈伟施海明马端; 关键词：动脉硬化斑块球囊损伤雄兔高脂饲养中膜厚度

hTFPI-2的基因克隆表达及生物学性质研究被引量：4: 2006年; 目的克隆人组织因子途径抑制物-2(human tissue fact0r pathway inhibitor-2,hTFPI-2)的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得有活性的目的蛋白。方法应用 RT-PCR 法从人胎盘总 RNA 中获得人组织因子途径抑制物-2的编码基因,将该基因片段克隆至原核表达载体 pET19b 中,转化表达宿主 BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达。获得的包涵体经离子交换法进行纯化,并使其在体外进行复性。采用发色底物法测定 hTFPI-2对纤溶酶、胰蛋白酶的抑制作用;明胶酶谱法测定对基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)的抑制作用;采用人工基底膜法观察hTFP1-2对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响。结果成功获得了序列完全正确 hTFPI-2的编码基因,hTFP1-2在大肠杆菌中以包涵体的形式获得高效表达,占细菌总蛋白的20%～30%。经纯化、复性后可得到纯度大于90%的目的蛋白。复性后的 hTFPI-2具有抑制胰蛋白酶、纤溶酶、MMP-2和 MMP-9的活性,同时亦具有抑制纤维肉瘤细胞 HT-1080侵袭转移的能力结论采用原核表达系统高效地获得了具有活性的 hTFPI-2。; 孔德升郭泓珅蔡旭梁旺彭卓醇宋后燕马端; 关键词：组织因子途径抑制物-2 蛋白质复性基因工程

抗重组人组织因子途径抑制物1单抗抑制rhTFPI-1的抗凝作用被引量：1: 2006年; 目的研制抗重组人组织因子途径抑制物1单克隆抗体(rhTFPI-1 M cAb),了解其对rhTFPI-1抗凝活性的抑制作用。方法将分泌rhTFPI-1 M cAb的杂交瘤细胞注入经降植烷预处理的Balb/C小鼠腹腔中,诱生腹水。腹水先经硫酸铵沉淀处理,再用rprote in A亲和层析柱进一步纯化。对纯化后的单克隆抗体进行SDS-PAGE检测和W estern b lot分析。并用发色底物法测定rhTFPI-1 M cAb对rhTFPI-1的活性抑制。结果纯化后的抗rhTFPI-1 M cAb经SDS-PAGE检测,其纯度为98%;W estern b lot分析显示其能特异识别rhTFPI-1抗原。发色底物法检测结果表明,其能有效阻断rhTFPI-1的抗FVIIa/TF活性,M cAb浓度为8 mg/L时FVIIa/TF剩余活性达到86%;但对rhTFPI-1的抗FXa活性作用不明显,M cAb浓度为80 mg/L时FXa的剩余活性为48.4%。结论rhTFPI-1 M cAb可明显抑制rhT-FPI-1活性,阻碍rhTFPI-1对TF/FVIIa的抑制活性。纯化后的rhTFPI-1 M cAb的各项鉴定指标均较为理想,rprote inA亲和层析柱纯化方法简便易行值得推广。; 蔡旭白浩孔德升郭泓珅梁旺宋后燕马端; 关键词：单克隆抗体组织因子途径抑制物

U937单核细胞几种不同转染方法的比较被引量：7: 2010年; 目的采用不同质粒转染方法介导重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒转染U937单核细胞,以获得较高转染效率的方法。方法分别采用电穿孔法、Effectene转染试剂、Lipofectamine 2000转染试剂、电穿孔+Effectene转染试剂、电穿孔+Lipofectamine 2000转染试剂及HilyMax转染试剂等不同方法介导质粒进行转染,测定不同方法的转染效率、目的基因mRNA表达水平及其对细胞活力的影响。结果电穿孔+Effectene转染试剂组、电穿孔+Lipofectamine 2000组及HilyMax组的转染效率和目的基因mRNA表达较高,且HilyMax组对细胞活力影响较小。结论将重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒体外成功转染入U937单核细胞中,通过优化转染方法提高转染效率、降低对细胞活力的影响,为基因治疗提供了实验基础。; 潘俊杰施海明罗心平李剑梁旺张进马端; 关键词：转染效率电穿孔脂质体

TFPI及其片段的可溶性表达及对系膜增生性肾小球炎的治疗作用: 组织因子途径抑制物(TFPI)是体内外源性凝血途径的天然抑制物。该蛋白由276个氨基酸组成,含有一个酸性的N末端,三个串联的Kunitz型结构域KD1、KD2、KD3和一个碱性的C末端。KD1和KD2与TFPI的抗凝作用...; 梁旺; 关键词：可溶性表达

组织因子途径抑制物基因的改造及其在毕赤酵母中的表达: 目的实现TFPI全长蛋白在酵母中的分泌表达。方法通过RNA structure 4．2分析发现TFPI mRNA序列中存在可能影响蛋白翻译的茎环结构。利用PCR方法对相关序列进行同意突变完成基因优化。以pPIC9K为载体...; 梁旺孔德生蔡旭郭泓坤彭卓醇刘静马端; 关键词：组织因子途径抑制物毕赤酵母; 文献传递

TFPI及其片段的可溶性表达及对系膜增生性肾小球肾炎的治疗作用: 组织因子途径抑制物(TFPI)是体内外源性凝血途径的天然抑制物。该蛋白由276个氨基酸组成,含有一个酸性的N末端,三个串联的Kunitz型结构域KD1、KD2、KD3和一个碱性的C末端。KD1和KD2与TFPI的抗凝作用...; 梁旺; 关键词：TFPI C末端系膜细胞系膜增生性肾小球肾炎; 文献传递

一种酵母表达的长效重组人组织因子途径抑制物: 本发明属生物技术领域，涉及长效组织因子途径抑制物(LTFPI)的高效表达。经对LTFPI序列中的糖基化位点和C末端中4个与受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)结合中发挥重要作用的位点进行突变，根据酵母利用密码子的偏爱性...; 马端木金贵王际平王慧君梁旺

一种人源抗人组织因子Fab及其制备方法: 本发明属于生物技术领域，涉及应用天然的人源抗体基因库筛选具有抗凝血功能的抗人组织因子Fab片段。本发明通过构建人源抗体基因库并经过ELISA、稀释凝血酶原时间、测序分析等从库中筛选到具有抗凝活性的人源抗人组织因子Fab，...; 马端程训佳刘静王羽雄木金贵梁旺王际平; 文献传递

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