汪相如
- 作品数：27 被引量：66H指数：5
- 供职机构：福建医科大学教学医院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金福建省卫生厅青年科研基金福建省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小RNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞增殖和侵袭的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:构建针对STAT3基因的短发夹状小干扰RNA重组质粒,探讨应用RNAi技术沉默STAT3基因对胃癌细胞BGC-823增殖和侵袭的影响。方法:应用DNA重组技术,构建针对STAT3基因的干扰RNA重组质粒(pSilencer-STAT3),经脂质体转染BGC-823胃癌细胞,逆转录聚合酶链反应和Western blot免疫印迹法检测STAT3的表达水平;MTT法检测RNA干扰后细胞增殖情况;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:酶切鉴定和测序证实了重组质粒构建成功。与未转染和转染阴性对照质粒组相比,pSilencer-STAT 3转染组胃癌细胞BGC-823中STAT 3mRNA和STAT 3蛋白的表达水平均明显降低,F=39.424,P=0.000和F=31.911,P=0.001。pSilencer-STAT3转染组胃癌细胞BGC-823的生长受到明显抑制,抑制率达47.3%,与阴性对照质粒组的8.1%抑制率相比,差异具有统计学意义,F=40.835,P=0.000。侵袭实验显示,pSilencer-STAT3转染组胃癌细胞BGC-823穿膜细胞数,显著低于阴性对照质粒组和未转染组(75±10,111±10,104±9,F=11.311,P=0.009)。结论:构建的pSilenc-er-STAT3重组质粒能有效地抑制STAT3基因在人胃癌细胞BGC-823中的表达,抑制细胞的增殖和侵袭。
- 龚福生郑秋红汪相如许扬梅
- 关键词：细胞培养RNA干扰基因表达
- 细胞因子裸质粒DNA的抗肿瘤研究被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨瘤体内直接注射细胞因子裸质粒DNA (pcDNA3.1-GM -CSF和 pcDNA 3.0 -IL -15基因 )对小鼠肺腺癌的治疗作用。方法 将 pcDNA 3.1-GM -CSF基因和 pcDNA 3.0 -IL -15基因 2种细胞因子基因直接注射到小鼠肺腺癌瘤体内 ,采用病理分析和免疫组化方法 ,对 pcDNA 3.1-GM -CSF和pcDNA 3.0 -IL -15转基因治疗后的小鼠肿瘤组织进行分析。结果 应用 pcDNA3.1-GM -CSF和 pcDNA 3.0 -IL -15裸质粒DNA ,通过直接注射均可抑制肿瘤生长。经pcDNA 3.1-GM-CSF和 pcDNA 3.0 -IL -15基因治疗后 ,肺癌组织内可见有部分坏死 ,瘤体内有大量炎性细胞及部分树突状细胞浸润。细胞因子GM -CSF和pcDNA 3.0 -IL -15基因在肿瘤组织中有不同程度的表达。结论 细胞因子裸质粒pcDNA 3.1-GM -CSF和pcDNA3.0 -IL -15直接注射 ,可以在组织中表达 。
- 郑秋红龚福生汪相如谢云青陈刚郑天荣
- 关键词：肺腺癌细胞因子病理分析免疫组织化学动物实验
- GSTT1和GSTM1基因缺失多态与胃癌易感性
- ＜正＞ 谷胱甘肽转硫酶（glutathione s-transferase;GSTs,EC 2.5.1.18）是人体内一类具有重要解毒作用的多基因酶族。GSTs催化各种亲电子致癌物与谷胱甘肽反应,在多数情况下是一种解毒过...
- 郑秋红龚福生谢云青汪相如郑天荣
- 文献传递
- RT-PCR法定量检测恶性淋巴瘤多药耐药基因的表达
- 2003年
- [目的]应用逆转录鄄聚合酶链反应(RT鄄PCR)方法检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者多药耐药基因表达情况,以探讨NHL患者的抗药性与临床化疗的关系。[方法]对30例淋巴瘤患者采用RT鄄PCR技术检测多药耐药基因(MDR)表达情况。[结果]30例患者MDR1阳性表达13例,这13例MDR1阳性的淋巴瘤患者,没有1例经1个疗程化疗即能完全缓解。[结论]RT鄄PCR是一种敏感性高、特异性强,可定量检测MDR1表达。MDR1表达可作为一个临床化疗耐药指标,有助于淋巴瘤患者个体化疗方案制定。
- 龚福生汪相如陈蓉明谢云青郑秋红
- 关键词：RT-PCR法恶性淋巴瘤多药耐药基因基因表达
- 甲状腺癌组织差异表达cDNA消减文库的构建与鉴定被引量：1
- 2003年
- 目的 :应用抑制性消减杂交技术 ,构建人甲状腺癌与正常甲状腺差异表达的cDNA消减文库。方法 :分别从甲状腺癌及正常甲状腺组织中提取总RNA ,应用高效、灵敏的抑制性消减杂交技术 ,构建成功cDNA消减文库 ,再转染大肠杆菌进行文库扩增。结果 :构建成功具有高消减效率的人甲状腺癌组织cDNA消减文库 ,文库扩增得到了 4 0 0个克隆 ,随机挑取 5 0个制备质粒 ,酶切分析均得到 5 0～ 4 0 0bp大小插入片段 ,这些片段可能就是载有高度特异性的目的片段 ,结论 :人甲状腺癌组织cDNA消减文库的建立为进一步克隆甲状腺癌特异性表达的新基因奠定了基础。
- 郑天荣力超郑秋红谢云青龚福生汪相如
- 关键词：肿瘤遗传学技术杂交
- 胃癌细胞系亚克隆的分离及生物学特性研究
- 2009年
- 肿瘤组织中存在着不同的肿瘤细胞亚群,其中含有肿瘤干细胞。本实验通过有限稀释法,证明了人胃癌细胞系BGC-823存在亚克隆细胞,并对亚克隆与母株之间进行形态学、细胞增殖、克隆形成及成瘤性进行比较分析。
- 汪相如郑秋红龚福生许扬梅
- 关键词：胃癌细胞亚克隆生物学特性
- HSP70-TKD诱导的NK细胞向肿瘤细胞迁移的实验研究被引量：2
- 2016年
- 目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞(NK)体外对细胞表面HSP70表达不同的胰腺癌细胞和结肠癌细胞的迁移作用差异。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)至第10天加入2μg/ml TKD,4 d后用流式细胞仪检测NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达情况;应用流式分选将胰腺癌细胞系Colo357和结肠癌细胞系CW2分为HSP70高表达细胞亚系Colo+、CW2+和HSP70低表达细胞亚系Colo-、CW2-;Transwell小室实验检测HSP70-TKD诱导的NK细胞对这4种细胞的迁移能力,MTT法检测HSP70-TKD诱导的NK细胞对这4种细胞的杀伤活性。结果:流式结果显示NK细胞在干细胞培养基中培养14天可大量增殖,细胞纯度最高达(92.50±1.25)%;经HSP70-TKD诱导后,NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达明显增加;经流式分选后,Colo+、Colo-细胞表面HSP70的表达分别为(78.2±2.2)%和(27.3±1.2)%,而CW2+、CW2-细胞表面HSP70的表达分别为(91.1±2.5)%和(18.2±1.0)%;HSP70-TKD诱导的NK细胞对Colo+迁移率为(68.6±2.8)%,明显高于对Colo-的迁移率(22.8±1.5)%,NK细胞对CW+迁移率为(73.5±2.7)%,明显高于对CW2-的迁移率(18.2±1.3)%;HSP70-TKD诱导的NK细胞对Colo+、Colo-的杀伤活性有显著性差异,当效靶比为20∶1时,杀伤活性分别为(61.2±3.0)%、(24.5±1.5)%,NK对CW2+、CW2-的杀伤活性有显著性差异,当效靶比为20∶1时,杀伤活性分别为(63.8±3.2)%、(22.4±1.8)%。结论:HSP70-TKD诱导的NK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞,在体外易向HSP70表达阳性的肿瘤细胞迁移。
- 汪相如陈蓉明龚福生应敏刚郑秋红
- 关键词：肿瘤细胞NK细胞迁移
- GM-CSF/IL1-5融合基因原核表达载体的构建及表达
- 2006年
- 目的构建原核表达质粒pPROEXTMHTbGMCSF/IL15并在大肠杆菌DH5α中表达,以期获得具有GMCSF/IL15双重活性的融合蛋白。方法利用分子生物工程技术,构建重组原核表达载体pPROEXTMHTbGM15,并转化进大肠杆菌DH5αIPTG诱导表达4h后,经SDSPAGE、免疫印迹证实为GM15融合蛋白。结果重组载体经转化大肠杆菌DH5α后,诱导表达出相对分子质量约为33kD左右的融合蛋白。结论构建了pPROEXTMHTbGMCSF/IL15融合基因表达系统,并诱导表达出GM15融合蛋白。
- 谢云青郑天荣郑秋红汪相如龚福生陈蓉明
- 关键词：白细胞介素15重组融合蛋白质类
- GM-CSF重组腺病毒转染外周血树突状细胞的研究被引量：4
- 2006年
- 目的:利用GMCSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,诱导培养树突状细胞(dendriticcell,DC),并与细胞因子培养的DC进行生物学特性的比较。方法:将GMCSF重组腺病毒转染正常人外周血单核细胞,或用重组细胞因子GMCSF,诱导培养获得DC,通过相差显微镜观察DC表面形态变化,FACS分析GMCSF基因转染对DC表面免疫分子表达的影响,Westernblot鉴定GMCSF的表达,ELISA检测IL12分泌水平,MTT法检测DC激发同种异体T细胞增殖的能力。结果:GMCSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,能扩增获得DC,该DC高表达CD1a、HLADR、CD80和CD86等免疫分子,并表达细胞因子GMCSF和IL12,对同种异体淋巴细胞有更强的刺激活性。结论:用GMCSF重组腺病毒可从外周血单核细胞中扩增到DC,为DC瘤苗临床应用提供实验基础。
- 龚福生郑秋红郑天荣谢云青陈蓉明汪相如
- 关键词：树突状细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF基因重组腺病毒
- RNA干扰技术抑制乳腺癌SKBr3细胞HER2的表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建含表皮生长因子受体2基因(HER2)的短发夹状双链RNA(shRNA)重组质粒,体外观察对人乳腺癌细胞SKBr3的HER2 mRNA及蛋白表达的影响。方法利用分子克隆技术,将含HER2的双链DNA,与经双酶切后的载体pSilencer连接,构建pSilencer-HER2重组质粒,在脂质体的介导下转染高表达HER2的乳腺癌细胞系SKBr3。RT-PCR分析HER2 mRNA的表达,Western blot检测蛋白的表达,MTT法测定细胞增殖情况。结果酶切鉴定证实重组质粒构建成功,转染后能明显抑制HER2 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞的增殖。结论构建的pSilencer-HER2重组质粒能有效地降低人乳腺癌细胞HER2的表达,抑制细胞的增殖,为HER2高表达预后不良的乳腺癌基因治疗提供新策略。
- 郑秋红龚福生谢云青陈蓉明汪相如
- 关键词：RNA干扰受体表皮生长因子乳腺肿瘤肿瘤细胞基因表达
