王伟毅
- 作品数：13 被引量：67H指数：4
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划广州市重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程自然科学总论更多>>
- 实时荧光定量PCR技术在食品致病菌等领域中的快速检测应用
- 焦红何蕴韶翁文川王方金徐海聂高东微朱道中林志雄许龙岩钟国强程钢邓中平黄捷王伟毅谢钧宪陈胤瑜
- 该项目针对进口试剂盒的昂贵及国内基因检测试剂市场几乎空白的特点，在具有我国自主知识产权的合成平台上，使用国产原材料，将国际先进的实时荧光定量PCR技术引入国内食品致病菌、动物禽流感、植物松材线虫、人类乙型肝炎病毒的检测领...
- 关键词：
- 关键词：荧光定量PCR食品致病菌
- RNA干扰对乳腺癌细胞株MCF-7/Adr多药耐药性的逆转被引量：2
- 2005年
- 目的研究小分子干扰RNA对乳腺癌耐药细胞株MCF7/Adr多药耐药性的逆转作用。方法设计针对mdrl基因的SiRNA,转染进MCF-7/Adr细胞;用荧光定量PCR检测mdrlmRNA的表达,流式细胞仪分析Pgp表达,MTT法检测阿霉素对MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果该SiRNA能使耐药细胞株MCF-7/Adr的mdrlmRNA和Pgp表达水平分别显著下调(P<0.01),并使阿霉素对MCF7/Adr的IC50显著降低(P<0.01)。结论RNA干扰可逆转乳腺癌MCF7/Adr细胞株的多药耐药性。
- 曾爱华何蕴韶王穗海王伟毅钟女奇
- 关键词：RNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7多药耐药性乳腺癌耐药细胞
- 百瓦级燃料电池电源输出电路系统研制
- 燃料电池作为一种清洁能源，在能源价格高企，环境问题倍受重视的今天，受到人们广泛的关注。随着数码时代的发展，人们对便携式电源的需求快速增长，这给便携式燃料电池的发展带来了前景。由于燃料电池本身输出电特性并不稳定，同时运行负...
- 王伟毅
- 关键词：燃料电池输出电路温度控制方式
- 文献传递
- 用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌被引量：7
- 2004年
- 〔目的〕采用荧光定量PCR技术 ,研制适合各层次实验室使用的 ,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒。〔方法〕根据副溶血弧菌gyrase基因序列 ,设计并合成特异性引物和荧光标记探针 ,将扩增后的特异片断制成阳性模板 ,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株 8株及同源及非同源参考菌株 2 4株 ,做特异性检测 ;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本 ,做敏感性检测。同时使用PE70 0 0型定量PCR仪和国产DA6 2 0微量荧光检测仪检测。〔结果〕该方法有良好的特异性 :8株副溶血弧菌结果均为阳性 ,而其他 2 4株菌株均为阴性 (其中 8株是弧菌科 ,其它 15株分别来自不同的菌属 ) ;该方法有良好的敏感性 :阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系 ,相关系数达到 0 .9871。直接进行定量检测 ,则检测低限在 10 2cfu/g;经过 2 4小时增菌培养 ,检测低限可达 2cfu/g。〔结论〕该方法特异性强、敏感性高 ,操作简便快速 ,能避免常规PCR方法易污染的缺陷 ,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性 ,便于基层实验室使用 ,具有很好的推广应用前景。
- 焦红王方金程刚翁文川王伟毅谢钧宪
- 关键词：水产品副溶血弧菌食品标准
- MGB探针检测广州地区汉族人群糖尿病亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C→T多态性被引量：3
- 2006年
- 186例T2DM,46例T1DM和110例正常对照的研究显示,糖尿病微血管病变与MTHFR基因677C→T多态性的显著相关性,仅见于T2DM,不见于T1DM。TaqMan-MGB探针技术是检测677C→T多态性的良好平台。
- 史成军何蕴韶程钢王伟毅刘娟徐杰符立梧
- 关键词：糖尿病亚甲基四氢叶酸还原酶基因
- 食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测被引量：31
- 2005年
- 目的利用荧光定量PCR技术,建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒,研究其灵敏度、特异性,并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中,8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性;纯菌条件下定量检测低限10 cfu/ml;对模拟样本直接进行,检测低限为103cfu/g,经培养增菌后,检测低限则达到2 cfu/g。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,检验周期仅需36 h,扩增与检测在封闭单管进行,可避免常规PCR方法易污染缺陷,具有很好的推广应用前景。
- 翁文川焦红王方金程刚王伟毅谢钧宪
- 关键词：荧光定量PCR副溶血弧菌
- 昆虫杆状病毒系统表达口蹄疫病毒3ABC基因被引量：4
- 2005年
- 以O型口蹄疫病毒为研究对象,经过RTPCP扩增得到非结构蛋白3ABC基因,克隆到转移载体pFastbacHT,将其转入含穿梭载体Bacmid的DH10Bac,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到3ABC的重组穿梭载体Bacmid3ABC,再将其转染昆虫细胞HiFive。PCR鉴定证实3ABC基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDSPAGE和Westernblot检测,3ABC基因在昆虫细胞中表达了大小约为50kDa的蛋白条带,3ABC基因在BactoBac系统中的成功表达为建立以基因工程产品为抗原、鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件。
- 罗宝正薄清如陈金顶王伟毅程钢何蕴韶
- 关键词：口蹄疫病毒杆状病毒
- 低密度基因芯片技术检测人乳头瘤病毒基因型被引量：3
- 2006年
- 【目的】利用低密度基因芯片方法对人乳头瘤病毒(HPV)进行分型检测,建立一种经济实用的临床HPV感染的基因型检测方法。【方法】利用低密度基因芯片方法对145例阴道镜门诊病人的宫颈拭子标本进行HPV-DNA检测并分型。【结果】被检人群中共检测出57例HPV阳性,88例HPV阴性,HPV的感染率为39.3%,阳性标本中检测出12种高危型别,2种低危型别。其中单型感染51例(89%),混合感染6例(11%),16,31,18,58型检出率较高。【结论】低密度基因芯片是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高的检测方法,在HPV和宫颈癌的筛查与诊断中有很大的应用价值。
- 王敏王方金吴健王伟毅何蕴韶
- 关键词：人乳头瘤病毒基因分型
- 运用siRNA抑制K562细胞中端粒酶逆转录酶基因表达的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 建立利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制白血病细胞系K562细胞中端粒酶活性的方法,为肿瘤的基因治疗提供理论依据。方法 设计端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异性siRNA,用体外转录方法合成hTERT基因的siRNA并转染K562细胞,培养48小时后,收集细胞,应用实时荧光定量RT PCR和westernblot方法检测转染细胞中hTERT基因mRNA水平和蛋白表达量的变化,并运用TRAPELISA方法检测细胞内端粒酶活性的变化。结果 转染siRNA后,与对照组相比,实验组hTERTmRNA水平和蛋白表达量明显降低,抑制率分别为75%和60%,同时TRAPELISA方法检测发现实验组端粒酶活性仅为对照组活性的45%。结论 hTERTsiRNA能特异性的抑制hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,因此运用siRNA来抑制hTERT的表达可达到降低端粒酶活性的效果。
- 王方金吴健王伟毅何蕴韶
- 关键词：小分子干扰RNA端粒酶端粒酶逆转录酶基因
- 食品中副溶血弧菌FQ-PCR快速检测方法的研究被引量：7
- 2005年
- 目的利用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株8株及同源、非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测。同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测。结果该方法有良好的特异性:8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其它24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,16株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性:阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间相关系数达到0.9871。在纯培养的条件下,其检测低限为10cfuml。对32个模拟样本直接进行定量检测,则检测低限在102cfug;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfug。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景。
- 焦红翁文川王方金程刚王伟毅谢钧宪
- 关键词：定量检测试剂盒
