王健琪
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达被引量：1
- 2006年
- 从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中成功地表达出了GST/predhPK-5融合蛋白,并通过免疫学测定,相对分子质量约为3.6×104,与理论值3.58×104相符.目的蛋白表达量占菌体总蛋白的23.6%.
- 王健琪翟朝阳孙剑
- 关键词：基因重组
- 一种新的血管生成抑制因子——hPK-5
- 2005年
- hPK-5是人纤溶酶原的结构域片段,它针对增生的内皮细胞而呈现很高的作用特异性,表现出抗内皮细胞增殖活性,调节血管增生的平衡以及炎症反应。鉴于它是内源性的抗血管生成因子,且具有分子量小、易于表达和高效的生物学活性等优势,充分展示了其重要的研究价值和临床应用前景。
- 王健琪翟朝阳
- 关键词：纤溶酶原内皮细胞
- 人纤溶酶原K5基因的结构改造及其在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的改造人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因,构建RGDRGD-liteK5融合表达质粒,并表达纯化所得RGDRGD-liteK5蛋白。方法以人纤溶酶原K5 cDNA为模板,通过PCR得到RGDRGD-liteK5基因片段,并克隆到质粒pGEX1-λT中,构建重组原核融合表达载体pGEX-RGDRGD-liteK5;在IPTG诱导下,观察融合蛋白在大肠杆菌Rosetta中的表达情况;利用亲合层析柱纯化表达产物,用Western blot分析鉴定表达产物。结果PCR扩增得到274 bp的片段,并成功插入pGEX1-λT质粒;含重组质粒的大肠杆菌在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,其分子量为36 kD;获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量约为10 kD的RGDRGD-liteK5蛋白;Western blot证实了表达产物的正确性。结论成功地改造了人纤溶酶原K5基因,构建了重组融合表达质粒pGEX-RGDRGD-liteK5,并纯化了其表达产物。
- 查晓军王鹏李保国王健琪翟朝阳
- 关键词：KRINGLERGD序列
- 简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及表达与初步鉴定
- 背景与目的：血管发生存在于许多病理演变过程中，如增殖性视网膜病变、心血管病（动脉粥样硬化）、以及肿瘤的生长、浸润和转移等环节。血管发生是一个复杂的、由激活因子与抑制因子共同调控的过程。目前，在所报道的内源性抑制因子中，血...
- 王健琪
- 关键词：基因重组血管发生肿瘤模型肿瘤生长
- 文献传递
- 不相容双质粒共表达人内皮抑素及简化人纤溶酶原饼环区5被引量：3
- 2006年
- 目的构建人内皮抑素(humanendostatin,hES)原核表达质粒pET28a/hES并与简化人纤溶酶原饼环区5(predigestedhumanplasminogenkringle5,predhPK-5)在大肠杆菌中实现共表达。方法RT-PCR法从人肝癌组织中扩增人内皮抑素基因,利用基因克隆技术构建原核表达质粒pET28a/hES。在卡那霉素与氨苄青霉素的选择压力下,将其与pGEX-1λT/predhPK-5共同转化E.coliBL21(DE3),并诱导表达重组蛋白。同时从连续培养时间与传代次数两方面检测了共转化子的稳定性。结果成功构建了重组质粒pET28a/hES,其与pGEX-1λT/predh-PK-5的共转化子在双抗生素压力下可以共存,并在E.coliBL21(DE3)中成功共表达了人内皮抑素及简化的人纤溶酶原饼环区5,其表达量分别占蛋白总量的20%和21%。在双抗性培养基中培养16h及传代120代,共转化子存活率均大于75%,具有较好的稳定性。结论不相容质粒pET28a/hES与pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中的成功共表达,对基因共表达方法作了有益探索,验证了不相容质粒共表达方法的可行性。
- 孙剑王健琪翟朝阳
- 关键词：抗血管生成人内皮抑素共表达
