王守栋
- 作品数：10 被引量：45H指数：4
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省农业良种工程项目国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
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- RNA干扰沉默PID1转基因肉兔模型的构建
- 徐正刚杨伦曾勇庆陈伟张哲杨云王守栋房国锋楚青惠
- 关键词：新西兰肉兔RNA干扰肌内脂肪
- 实时荧光定量PCR法检测转基因猪外源基因整合拷贝数被引量：2
- 2016年
- 以GFP转基因猪为研究对象,以转铁蛋白受体基因为内参基因,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR建立针对外源基因GFP和内参基因的双标准曲线和方程。对转基因猪基因组DNA中外源基因和内参基因的拷贝数同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在转基因猪中的整合拷贝数。同时,利用Southern-blot进行验证分析。结果显示:实时荧光定量PCR法检测2头转基因阳性猪外源基因拷贝数分别为3和2,2头转基因阴性猪外源基因拷贝数均为0,结果同Southern-blot检测一致。结果表明:实时荧光定量PCR法高通量、灵敏、方便,可以更好的用于转基因猪外源基因整合拷贝数的检测。
- 房国锋王守栋曾勇庆陈伟王延东李川皓
- 关键词：荧光定量PCR转基因猪拷贝数
- 2A肽介导猪PID1与CuZnSOD双基因真核共表达载体的构建与细胞表达
- 2014年
- 构建PID1基因与CuZnSOD基因的真核共表达载体,在PK15细胞中鉴定基因的表达。PCR扩增的PID1与CuZnSOD两基因分别经双酶切后定向插入pIRES2-AcGFP1空载体,构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体并进行测序与酶切鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒转染至PK15细胞,细胞内荧光显微镜下观察其荧光的表达,RT-PCR、Westernblot技术分别检测PID1基因与CuZnSOD基因mRNA和蛋白表达情况。重组克隆载体插入目的片段序列与PID1基因与CuZnSOD基因序列完全一致。PIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体测序、酶切鉴定结果与预期结果一致。荧光显微镜下观察转染后的PK15细胞出现绿色荧光。RT-PCR检测结果显示,转染细胞中PID1基因与CuZnSOD基因表达量明显高于对照组(P<0.05)。Westernblot检测结果表明pIRES2-CuZnSODPID1真核双表达载体稳定有效表达。成功构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核共表达载体,且双基因在真核细胞独立稳定表达,为转基因猪等育种新材料的制备奠定基础。
- 张哲李同明曾勇庆陈伟徐正刚杨云房国锋王守栋楚青惠
- 关键词：CUZNSODPK15细胞
- 乳酸菌对育肥猪肌肉风味前体物质及营养特性的影响被引量：13
- 2014年
- 为研究饲喂不同剂量乳酸菌对育肥猪肌肉风味前体物质和营养品质特性的影响,选择体重约30 kg的杜×长×大三元杂交猪216头,随机等分为4组;对照组、试验1组、试验2组、试验3组分别通饮水饲喂乳酸菌液0、50、100、150 mL(乳酸菌液中活乳酸菌浓度≥1×109cfu/mL),试验猪饲喂至平均约100 kg体重时,分组抽样屠宰并取背最长肌进行肉质测定。结果表明:饲喂乳酸菌液对猪肉总胆固醇和肌苷酸(IMP)含量具有显著影响(P<0.05),50、100 mL组总胆固醇含量分别比对照组降低9.65%、5.11%(P<0.05);100 mL组IMP含量比对照组提高50.57%(P<0.05)。饲喂乳酸菌液的3个试验组猪肉中的总胶原蛋白(TC)、可溶性胶原蛋白(SC)均高于对照组,其中,50、150 mL组的TC比对照组分别提高17.68%、19.19%(P<0.05),50 mL组的SC比对照组提高44.44%(P<0.05)。饲喂乳酸菌液对猪肉总氨基酸(TAA)、鲜味氨基酸(DAA)含量具有显著影响(P<0.05),3个试验组的TAA、DAA含量均显著高于对照组(P<0.05)。饲喂乳酸菌液对猪肉总单不饱和脂肪酸(MUFA)、总多不饱和脂肪酸(PUFA)含量具有显著影响(P<0.05),其中,3个试验组的PUFA含量均显著高于对照组(P<0.05)。研究结果提示,饲喂乳酸菌能够明显提升猪肉的风味和营养等品质特性,其作为商品肉猪肉质改良的饲料添加剂具有独特的开发利用价值。
- 相伟张天阳曾勇庆汪官保赵勇陈伟张建梅房国锋王守栋
- 关键词：乳酸菌风味前体物质营养特性
- 春季养猪生产中存在的问题及饲养管理技术措施被引量：6
- 2014年
- 春季是养猪生产的最佳季节,同时也是猪流行性疾病的高发季节,此阶段气温多变、各种病原微生物大量孽生繁殖、猪体免疫能力较弱,如果饲养管理不当,猪只容易患上各种传染性疾病,严重影响种猪的繁殖与商品猪的生长发育。扼要总结了春季养猪生产中存在的问题,并提出一些饲养管理技术措施,旨在为广大养殖场(户)提供技术参考。
- 王守栋相伟曾勇庆
- 关键词：春季养猪技术饲养管理
- RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建被引量：4
- 2014年
- 为进一步研究PID1基因的功能,本试验在前期构建并筛选得到的高效PID1RNA干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo-PID1-2的基础上,利用精子介导法制备RNA干扰PID1转基因肉兔模型。对繁殖的F1代肉兔个体进行活体荧光检测、PCR、RT-PCR和Western blot检测,并对不同组别(阳性组、阴性组和空白对照组)体重达3.0kg左右的F1代肉兔抽样屠宰进行肌内脂肪的测定。研究结果表明:外源基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)在转基因兔后代中可成功表达,试验组得到F1代个体106只,其中阳性兔7只,转基因阳性率为6.60%。PID1基因RNAi阳性兔与阴性兔、空白对照兔相比,RT-PCR检测PID1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05),Western blot测得PID1蛋白表达水平呈下降趋势,肌内脂肪的含量显著降低(P<0.05);综上表明,PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关。本研究从RNAi肉兔模型构建的角度进一步验证了PID1基因对肌内脂肪沉积影响的功能,也为下一步研究制备高肌内脂肪优质PID1转基因猪奠定了基础。
- 徐正刚杨伦曾勇庆张哲陈伟杨云房国锋王守栋
- 关键词：新西兰肉兔RNA干扰肌内脂肪
- CuZnSOD转基因猪的制备与研究
- 近年来，猪的遗传改良在猪的生长速度、饲料转化率及胴体瘦肉率上已经取得了很大的进步，但伴随着我国养猪集约化、规模化的发展，商品猪的氧化应激时有发生，对猪群的健康、生长及肉质等造成了严重损害。CuZnSOD(Copper Z...
- 王守栋
- 关键词：转基因猪铜锌超氧化物歧化酶抗氧化性能
- 文献传递
- F_1代转CuZnSOD基因猪的制备与研究被引量：2
- 2016年
- 为进一步研究CuZnSOD基因对肉质表达调控的作用机理,探究通过磁性纳米颗粒介导精子载体法制备转基因猪的可行性。本试验在重组质粒先后与磁性纳米颗粒和精液共孵育的基础上,再通过人工授精获得F1代仔猪。对繁殖得到的F1代个体进行PCR、荧光定量PCR及Western blot检测,对屠宰的4头阳性猪采用绝对定量PCR进行转基因拷贝数鉴定,F1代个体达100kg左右时抽样屠宰进行肉质及抗氧化性能测定。结果表明,F1代阳性率为30.23%。阳性组CuZnSOD在5种组织中的RNA和蛋白水平上的表达量较阴性组均上调。本试验得到的标准曲线:ΔCt=-3.121 6lgN+17.281(R2=0.992 1,P<0.001),4头阳性猪中外源基因拷贝数分别为25.89、80.61、106.69、83.03。肉质及抗氧化性能测定结果显示,阳性组肌肉滴水损失显著低于阴性组(P<0.05);阳性组肌肉T-SOD1d、T-SOD2d活性显著高于阴性组,MDA1d、MDA2d含量显著低于阴性组(P<0.05)。研究结果表明:CuZnSOD基因的过表达可以提高肌肉的抗氧化性能,降低滴水损失,进而改善肉质,同时,证明磁性纳米颗粒介导的精子载体法可以用于制备转基因动物。
- 王守栋房国锋曾勇庆陈伟李川皓王延东
- 关键词：CUZNSOD磁性纳米颗粒转基因猪肉质抗氧化性能
- 猪神经元蛋白3.1基因3'侧翼区多聚腺苷酸数目多态性及其与肉质性状的关系
- 2015年
- 选取54头莱芜猪和40头鲁莱黑猪,宰后测定肉质性状,利用聚合酶链反应及单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)技术检测其神经元蛋白3.1(neuronal protein 3.1,P311)基因3'侧翼区2个多聚腺苷酸(poly A)结构的长度多态性,测序确定连续腺苷酸的数目,并与肉质性状进行关联分析,以期发现有效多态位点.结果表明:1)在莱芜猪和鲁莱黑猪中共检测出2个连续腺苷酸数目的多态位点poly A-L1和poly A-L2,两者的poly A数目分别为18、15和15、12,2个位点的3种基因型分别记为poly A-L1位点的MM型、NN型和MN型,以及poly A-L2位点的BB型、DD型和BD型;这2个多态位点在莱芜猪和鲁莱黑猪群体中均处于哈代-温伯格平衡(P>0.05),其多态性在2个猪种间的分布差异在统计学上均不显著.2)莱芜猪poly A-L1位点的3种基因型之间在肉质性状上均未表现出统计学上的显著差异,但MN型个体各项肉质性状普遍优于2个纯合型,肉质较好,鲁莱黑猪中的结果与此相同.3)莱芜猪poly A-L2位点的3种基因型之间在肉质性状上均未表现出统计学上的显著差异,但鲁莱黑猪在该位点处的失水率和烹饪损失指标在统计学上差异显著,其中DD型个体的失水率显著高于BD型个体,BB型和DD型个体的烹饪损失显著高于BD型,其余各指标的基因型间在统计学上差异不显著.总之,在这2个位点处普遍表现为杂合型的肉质性状优于纯合型,生产中应重视2个纯合型个体间的杂交利用,以产生更多肉质优良的杂合型个体.
- 杨云曾勇庆张哲徐正刚陈伟房国锋王守栋
- 关键词：多态性肉质性状
- 母猪繁殖障碍的原因分析及综合防制被引量：18
- 2013年
- 当前,母猪繁殖障碍在规模化猪场普遍存在,已成为影响养猪生产经济效益的重要因素之一。引起母猪繁殖障碍的原因错综复杂,有非传染性因素和传染性疾病因素,有些是由单一因素所引发,而更多的则是多种因素所引发,只有采取综合性防制措施,才能使母猪繁殖障碍得到有效控制,从根本上提高规模化养猪的经济效益。本文在分析引起母猪繁殖障碍原因的基础上,提出其综合防制的技术措施。
- 王守栋肖建森曾勇庆陈冰田洪强张自广
- 关键词：母猪繁殖障碍非传染性因素传染性因素综合防制
