王海鹰
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：华南理工大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金“重大新药创制”科技重大专项教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 一种光学分析检测CHO细胞增殖的方法及应用
- 本发明涉及一种光学分析检测CHO细胞增殖的方法及应用，步骤如下：(1)将pEGFP-N2转化大肠杆菌DH5α，摇菌，提取无内毒素质粒；(2)将CHO细胞接种于孔板中，待细胞生长密度达70％时，采用脂质体转染法将步骤(1)...
- 王菊芳钟启马毅刘婷婷王海鹰
- 文献传递
- 一种成熟人β防御素-2及其制备方法
- 本发明公开了一种成熟人β防御素-2及其制备方法，该方法是将谷氨酸残基引入人β防御素-2的成熟序列和前肽之间，通过重组表达得到人β防御素-2前原肽，经镍柱亲和层析纯化得到较高纯度的人β防御素-2前原肽，然后用带His-ta...
- 王菊芳叶伟王海鹰马毅于平儒王小宁
- 文献传递
- 艰难梭菌葡萄糖基转移酶基因突变毒素及其在疫苗应用中的研究
- 艰难梭菌(Clostridium difficile)是抗生素相关性腹泻和假膜性结肠炎的主要致病菌。近年来,随着耐药超毒菌株的出现,艰难梭菌引发的疾病发生率和死亡率在世界范围内呈上升趋势,已成为全世界普遍关注的健康问题。...
- 王海鹰
- 关键词：艰难梭菌感染葡萄糖基转移酶疫苗
- 文献传递
- 基于拟杆菌的特异性生物标记引物在珠三角地区的灵敏度和特异性研究
- 在珠三角地区采集人、猪、牛、狗以及家禽等33个粪便样品,高效提取基因组DNA,选取14种特异性拟杆菌引物进行检验分析,并进一步采用已知污染源类型的水样对其进行验证。结果表明：拟杆菌通用引物2＃(Bac32F/Bac708...
- 王海鹰贾乐华王菊芳宁正祥吴仁人
- 关键词：特异性引物灵敏度特异性
- 人甲胎蛋白AFP在大肠杆菌中表达和鉴定被引量：2
- 2013年
- 本研究通过应用基因工程技术,重组构建编码人全长甲胎蛋白AFP基因的原核表达载体pET22b-AFP,并将其转化到大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)中进行诱导表达目的蛋白AFP。采用PCR法扩增编码AFP蛋白的cDNA序列片段,并将其克隆到含有His-tag的pET22b原核表达载体上;重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;对诱导过程中不同浓度的IPTG和不同的温度进行优化;选定最佳的优化条件进行诱导表达目的蛋白;SDS-PAGE电泳和Western Blot法鉴定表达产物。结果表明,通过PCR扩增技术获得了编码AFP蛋白的基因片段;重组质粒经双酶切和基因测序等方法鉴定后,确认了重组质粒已经构建成功;表达产物通过利用SDS-PAGE和Western Blot法检测到在66 kDa附近出现条带,与预期值相符,表明重组AFP蛋白已成功表达。
- 李振东谷华玮王海鹰陈淑仪宁正祥王菊芳
- 关键词：人甲胎蛋白蛋白质印迹法
- 一种二型登革热病毒NS1蛋白的重链单域抗体及其制备方法和应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种二型登革热病毒NS1蛋白的重链单域抗体及其制备方法和应用。发明采用羊驼非免疫重链单域抗体库，用重组表达的登革热病毒NS1蛋白通过多轮生物筛选，采用ELISA法挑选得到能特异性结合的噬菌体单...
- 王菊芳王海鹰法蒂玛马毅王小宁
- 文献传递
- 人抗氧化蛋白-1在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2014年
- 为得到较纯的具有活性的人抗氧化蛋白Peroxiredoxin1(Prx1),本文先用PCR的方法扩增了人Prx1的cDNA序列,然后将其连接到pET28表达载体上,从而构建了编码全长的人抗氧化蛋白-1基因的pET28-Prx1原核表达质粒。经双酶切及测序鉴定后将表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并通过SDS-PAGE和western blot来鉴定表达产物。随后用Ni-NTA螯合亲和层析的方法纯化重组蛋白,并测定该酶的米氏常数,用质粒保护实验鉴定该蛋白其活性。最终表达载体经酶切和测序鉴定证实构建成功,表达产物在SDS-PAGE和western blot图的25 kD左右,与prx1真实的蛋白分子量相符,说明Prx1蛋白成功表达。Prx1纯化后产量达到7.59 mg/g菌体,纯度达到88.50%。纯化后的Prx1在37℃和pH 7.4的条件下催化H2O2反应的米氏常数Km为2.06×10-4 mol/L,质粒保护实验表明Prx1可以保护pUC18质粒免受氧化损伤。因此,Prx1在大肠杆菌中成功表达并得到较纯的活性蛋白。
- 毛爽陈少沛颜晟王海鹰宁正祥李杉王菊芳
- 关键词：蛋白印迹法
- 一种成熟人β防御素-2及其制备方法
- 本发明公开了一种成熟人β防御素-2及其制备方法，该方法是将谷氨酸残基引入人β防御素-2的成熟序列和前肽之间，通过重组表达得到人β防御素-2前原肽，经镍柱亲和层析纯化得到较高纯度的人β防御素-2前原肽，然后用带His-ta...
- 王菊芳叶伟王海鹰马毅于平儒王小宁
- 一种二型登革热病毒NS1蛋白的重链单域抗体及其制备方法和应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种二型登革热病毒NS1蛋白的重链单域抗体及其制备方法和应用。发明采用羊驼非免疫重链单域抗体库，用重组表达的登革热病毒NS1蛋白通过多轮生物筛选，采用ELISA法挑选得到能特异性结合的噬菌体单...
- 王菊芳王海鹰法蒂玛马毅王小宁
- 文献传递
- 特异性拟杆菌引物在珠江三角洲的适应性研究被引量：6
- 2014年
- 在珠江三角洲地区采集人、猪、牛、狗以及家禽等33个粪便样品,高效提取基因组DNA,选取14种特异性拟杆菌引物进行检验分析,并进一步采用已知污染源类型的水样对其进行验证.结果表明:采用粪便样品DNA专属提取试剂盒和水体样品DNA专属提取试剂盒提取的基因组模版纯度和提取率均符合后续实验要求.拟杆菌通用引物2#(Bac32F/Bac708R)检出率为85%(28/33),特别是对哺乳类动物和鸡的粪便具有更高的检出率.人的拟杆菌特异性引物3#(HF134F/Bac708R)和4#(HF183F/Bac708R)、反刍动物的拟杆菌特异性引物8#(CF128F/Bac708R)以及猪的拟杆菌特异性引物10#(PF163F/Bac708R)在珠江三角洲地区同时具有较高的灵敏度和较强的特异性.水体样品验证实验与实际污染类型相符,说明拟杆菌通用引物2#、人的特异性引物3#和4#以及猪的特异性引物10#在珠江三角洲地区具有很好的适用性.
- 王海鹰贾乐华吴仁人王菊芳宁正祥
- 关键词：特异性引物灵敏度特异性
