王玉凤
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 单链抗体与力达霉素辅基蛋白在大肠埃希菌表达的发酵工艺被引量：3
- 2009年
- 目的确定工程菌E.coli BL21(DE3)Star^(TM)/pEFL表达抗Ⅳ型胶原酶单链抗体与力达霉素辅基蛋白构成的融合蛋白Fv-LDP的摇瓶发酵工艺。方法比色法测定菌体浓度,干燥失重法测定细菌干重,SDS-PAGE-Spot Denso法测定融合蛋白Fv-LDP表达量,单因素或正交设计优化发酵工艺。结果确定了融合蛋白Fv-LDP表达的最佳培养基配方和培养条件,融合蛋白Fv-LDP表达量为830μg/ml左右,比LB培养基的产量提高5.6倍。结论优化工程菌发酵工艺大大提高了融合蛋白Fv-LDP表达水平,不仅为下一步中试研究和规模化生产奠定了基础,而且为其它生物来源的抗体和抗生素组分在基因工程大肠埃希菌的生产提供了发酵方面的实验证据。
- 高瑞娟赵春燕王玉凤李电东
- 关键词：发酵工艺
- 促智药对樟柳碱所致记忆障碍的改善作用被引量：1
- 2003年
- 目的:探讨几种促智药对樟柳碱诱导小鼠记忆障碍模型的影响。方法:动物学习、记忆实验用跳台法和避暗法。结果:几种不同剂量的促智药对樟柳碱所致记忆障碍均有不同程度的改善作用。小鼠跳台和避暗行为潜伏期延长,错误次数减少。结论:康宝和长寿康对樟柳碱所引起的记忆障碍有明显的改善作用,与公认的促智西药尼莫地平、奥拉西坦相似。
- 商悦王玉凤梁越欣蔡年生
- 关键词：记忆障碍促智药
- 单链抗体与lidamycin辅基蛋白融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫活性被引量：1
- 2009年
- 目的实现抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(Fv)与lidamycin辅基蛋白(LDP)结合构成的融合蛋白Fv-LDP产生菌的高密度发酵,并测定融合蛋白Fv-LDP免疫活性。方法先在5L发酵罐中进行工程菌分批发酵和补料分批发酵,再用固定化金属亲和层析从菌体中纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,酶联免疫吸附试验和免疫荧光细胞化学染色检测其免疫活性。结果确定分阶段恒速补料分批发酵为工程菌最佳高密度发酵模式,融合蛋白Fv-LDP最高表达量为4g/L,A600为55左右,培养时间约14h。融合蛋白Fv-LDP对Ⅳ型胶原酶呈阳性免疫反应,能与PG细胞特异结合。结论确定了工程菌高密度发酵工艺,融合蛋白Fv-LDP免疫活性良好,为融合蛋白Fv-LDP与lidamycin烯二炔发色团(AE)构成的小型高效化抗体药物Fv-LDP-AE的研究奠定良好基础。
- 高瑞娟赵春燕王玉凤张秀敏赵宝明李电东
- 关键词：单链抗体分批发酵补料分批发酵免疫活性
- 微生物法测定力达霉素的效价
- 2005年
- 建立力达霉素效价测定的微生物检定法,检定菌为枯草芽孢杆菌.当力达霉素的浓度为1.85～13.51μg/ml时,其抑菌圈直径与反应剂量呈线性关系,并与HPLC法进行比较,测定结果基本一致.
- 赵春燕王玉凤炼润梅高瑞娟李电东
- 关键词：力达霉素微生物检定法HPLC效价测定
- 单链抗体与力达霉素基因工程强化融合蛋白Fv-LDP-AE的抗肿瘤作用被引量：6
- 2010年
- 目的研究抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(Fv)和力达霉素辅基蛋白(LDP)在大肠杆菌表达的融合蛋白(Fv-LDP)与力达霉素(LDM)的活性发色团AE形成的基因工程强化融合蛋白Fv-LDP-AE的生物学活性及体外抗肿瘤作用。方法采用酶联免疫吸附剂测定、免疫荧光细胞化学染色和明胶酶谱分析Fv-LDP-AE生物学活性;通过MTT法、Hoechst 33342和碘化丙啶共染、DNA ladder和侵袭实验探讨其抗肿瘤作用。结果 Fv-LDP-AE对人肝癌BEL-7402和人结肠癌HT-29细胞的免疫反应呈阳性,可与BEL-7402细胞特异结合,并呈剂量依赖性抑制人高转移性巨细胞肺癌PG细胞内Ⅳ型胶原酶分泌。Fv-LDP-AE对BEL-7402和PG细胞的增殖抑制作用比力达霉素强,可诱导BEL-7402细胞裂亡、凋亡,抑制BEL-7402细胞侵袭。结论 Fv-LDP-AE是一种以Ⅳ型胶原酶为靶点的、具有高效抗肿瘤活性的抗体药物。
- 高瑞娟李亮赵春燕王玉凤李电东甄永苏
- 关键词：单链抗体力达霉素生物学活性抗肿瘤作用
- HPLC法测定抗生素S632-A中9-甲基链霉戊二酰亚胺的含量被引量：1
- 2008年
- 目的：建立测定抗生素S632-A中9-甲基链霉戊二酰亚胺（S632-A2）含量的HPLC方法。方法：采用Agilent TC-C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-水（45∶55）;流速：0.6 mL.min-1,检测波长233 nm,柱温为室温。结果：S632-A2进样量在0.88~8.76μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 5）,回收率为99.97%,RSD为0.33%（n=9）。结论：此方法准确,重复性好,可为评价抗生素S632-A提供可靠依据。
- 徐榕吴香玫赵春燕王玉凤李电东蔡年生
- 关键词：高效液相色谱法
- 薄层层析-紫外分光光度法在戊二酰亚胺类抗生素S632-A产品控制中的应用被引量：4
- 2005年
- 目的:测定戊二酰亚胺类抗生素S632-A含量。方法:采用薄层层析法,对S632链霉菌发酵液成分进行分离,紫外分光光度法间接测定S632-A的含量,检测波长为233nm。结果:线性范围为5.7～34.2μg·mL^(-1)(r=0.999 6),平均回收率为103.7%,精密度试验RSD为1.80%(n=5)。结论:此方法较微生物测定法准确、简便、灵敏度高,适用于科研和生产过程中抗生素S632-A的产品控制。
- 赵春燕王玉凤高瑞娟李电东
- 关键词：薄层层析紫外分光光度法
- 两种重组菌中融合蛋白Fv-LDP含量测定方法的比较研究被引量：2
- 2010年
- 目的：测定抗Ⅳ型胶原酶单链抗体Fv和力达霉素辅基蛋白LDP在大肠杆菌中表达产生的融合蛋白Fv-LDP含量。方法：3瓶培养融合蛋白Fv-LDP表达菌,固定化金属亲和层析纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,HPLC测其纯度。比色法测定菌体浓度,SDS-PAGE分离蛋白带,积分密度扫描法测定融合蛋白Fv-LDP表达百分比和含量。结果：在88.7-1 064 mg·L^-1范围内,融合蛋白Fv-LDP浓度和积分密度值呈线性关系（r=0.998 8）,精密度RSD为2.09%（n=8）,平均回收率为95.18%。结论：SDS-PAGE-SpotDenso法操作简单,重复性好,灵敏度高,适用于发酵过程中对融合蛋白Fv-LDP表达产量的控制分析。
- 高瑞娟赵春燕王玉凤炼润梅李电东
- 关键词：单链抗体发酵
- 高效抗肿瘤抗生素新产生菌Micromonospora C3509发酵优化研究被引量：4
- 2009年
- 目的:提高抗肿瘤抗生素在发酵液中的含量,并进行分离纯化。方法:采用微生物法、DNA断裂法分析抗肿瘤抗生素在发酵液中的含量,以响应曲面法优化发酵培养基。结果:通过改变发酵培养基的组份及优化其配比,新型产生菌发酵液中抗肿瘤抗生素的含量提高约30倍。在其后的实验中运用优化的培养基发酵,从中分离纯化出高效抗肿瘤抗生素,经初步测定相对分子质量为1367。结论:培养基组份及其配比影响其代谢产物的组成及含量,响应曲面法可以用相对较少的实验获得优化的发酵条件,提高抗肿瘤抗生素的含量。
- 张文军赵春燕范翠敏王玉凤李电东甄永苏邵荣光
- 关键词：抗肿瘤抗生素响应曲面法
- 抗肿瘤抗生素力达霉素的发酵工艺被引量：1
- 2005年
- 目的:中试规模验证力达霉素发酵工艺的可行性。方法:采用微生物法、HPLC法和精原细胞法分析力达霉素中试发酵液及其发酵提取物,以力达霉素的生物效价为指标考察其发酵工艺。结果:5批200L发酵罐,平均每罐发酵液的微生物效价为450μg·mL-1,可获得力达霉素纯品5·7g。结论:多批中试结果表明:力达霉素目前使用发酵工艺较稳定,可以为进一步的分离纯化提供优质足量的发酵液,满足工业生产和进一步深入研究的需要。
- 赵春燕姚恩泰王玉凤商悦李电东
- 关键词：力达霉素发酵工艺发酵液
