王龙
- 作品数：8 被引量：97H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术发展基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠胚胎期造血细胞基因表达调控研究
- 张庆华周隽王海红王龙赵春军房静范惠咏熊慧陈竺
- 该课题通过YS9，YS12，FL12三个cDNA文库的基因测序，得到小鼠在卵黄囊和胚胎阶段的造血细胞基因表达主要差别，识别了在不同阶段的血红蛋白，actin基因，造血调控因子等与造血相关的基因表达情况。分析的结果证明12...
- 关键词：
- 关键词：胚胎期造血细胞基因表达调控
- BPOZ基因剔除小鼠模型的建立被引量：1
- 2004年
- BPOZ是在卵巢癌等肿瘤组织中表达下调的细胞生长抑制基因 ,建立BPOZ基因剔除小鼠模型 ,可以为在体研究BPOZ基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系创造条件 .运用生物信息学手段确定小鼠BPOZ基因组序列 ,设计基因剔除策略 ,构建完成了基因剔除载体XpPNT BPOZ .以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞 ,用G4 18和Ganciclovoir进行正负筛选 ,获得抵抗克隆 ,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆 .将同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚 ,获得嵌合体小鼠 .嵌合体小鼠与C5 7BL/ 6J小鼠交配后获得Aguoti毛色的小鼠30只 ,其中 15只为BPOZ基因剔除杂合子小鼠 ,阳性率为 5 0 % .在雌雄杂合子交配的后代中获得纯合子小鼠 .初步的表型观察发现BPOZ基因剔除小鼠发育正常 ,有繁殖能力 ,进一步的表型分析工作正在进行之中 .
- 项佑贵孙霞王龙严兰珍杨桦刘伟许勇徐国江王一费俭傅继梁王铸钢
- 关键词：基因剔除
- 骨保护素(Opg)基因敲除小鼠发生高转换型骨质疏松和动脉钙化(英文)被引量：27
- 2007年
- 骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素(OPG)可能是联系两者的分子之一.构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉.通过胚胎干细胞(ES)基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆,ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠,交配传代获得杂合子和纯合子小鼠.RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,纯合子小鼠没有Opg基因的表达.纯合子小鼠骨量丢失明显,骨生物力学指标明显下降,发生严重的骨质疏松,此外,还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化.小鼠破骨功能亢进,与此同时,成熟成骨细胞数量增加,矿化功能强于野生型.Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失,而血清中水平没有变化,这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因.对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究,将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制,为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持.
- 许勇杨桦乔建瓯李西华严兰珍王龙徐国江费俭傅继粱王铸钢
- 关键词：骨质疏松动脉钙化骨转换钙磷代谢
- 氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞(MR-2)凋亡的体外研究被引量：55
- 1998年
- 目的：深入了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以对全反式维甲酸耐药的ＡＰＬ细胞株ＭＲ２为模型，用细胞生长、活力测定、形态学观察和流式细胞仪分析、四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径。结果：１．０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３可诱导ＭＲ２细胞凋亡，并能降解ＡＰＬ特异蛋白ＰＭＬＲＡＲα融合蛋白。结论：Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径可能不同于ＡＴＲＡ。
- 蔡循贾培敏石学耕石学耕史桂英朱新华朱新华王龙陈竺陈赛娟
- 关键词：APL氧化砷维甲酸
- AML1-MTG16融合基因的构建及其致瘤性的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 研究用重叠延伸剪接术 (splicing overlaping extension,SOE)方法获取少见融合基因的转录本。了解 AML1- MTG16融合基因的致瘤性。方法 通过 SOE重组 ,将 AML1、MTG16基因的两个片段经 PCR融合起来 ,形成 AML 1- MTG16融合基因的编码部分。将 MTG16 ,AML 1- MTG16融合基因及切除 AML1- MTG16融合基因 、 两个功能域 (motif)的基因片段 (AML1- MTG16 - S )分别插入p EGFP- C1,p Ds Red- N1载体中 ,利用脂质体转染 NIH3T3细胞 ,4 8小时后激光共聚焦显微镜观察。后G4 185 0 0 μg/ ml筛选 1月 ,获稳定转染细胞后绘制生长曲线 ;做软琼脂克隆形成实验及裸鼠致瘤实验。结果 测序结果表明 ,利用 SOE重组获得的 DNA片段含有 AML 1- MTG16融合基因完整的 CDS部分。比较p EGFP- C1、p EGFP- C1- AML1- MTG16质粒稳定转染的 NIH3T3细胞的生长曲线 ,后者增殖明显。软琼脂克隆形成试验显示 ,转染了 p EGFP- C1的 NIH3T3细胞在 6孔板内未形成克隆 ;转染了 p EGFP- C1-AML1- MTG16的 NIH3T3细胞在 6孔板内每孔平均形成 (47.7± 2 .7)个克隆 ,且使裸鼠致瘤。通过激光共聚焦显微镜观察 ,融合有 MTG16、AML 1- MTG16、AML 1- MTG16 - S 基因片段的绿荧光蛋白或红荧光蛋白在胞核表达 ,MTG16与 AML1- MTG16、AML1-
- 王阳陆顺元孔辉王龙袁文涛孙岳平金月娥陆振虞王振义王铸钢
- 关键词：白血病致瘤性
- hCG-PLZF-RARA转基因小鼠发生慢性粒细胞样白血病被引量：6
- 2000年
- 目的 为了从整体水平上研究PLZF RARA融合蛋白的致白血病作用 ,建立了仅在髓系细胞中表达PLZF RARA融合基因的转基因小鼠。方法 分子克隆技术构建转基因构件hCG PLZF RARA ,PCR、RT PCR、免疫荧光、骨髓象、病理、维甲酸 (RA)分化试验等进行检测分析。结果 6只hCG PLZF RARA转基因小鼠发生白血病 ,表现类似人类慢性粒细胞性白血病。组织因子 (tissuefactor,TF)在融合基因表达阳性的小鼠骨髓细胞中有表达 ,而在正常小鼠和融合基因表达阴性的小鼠的骨髓细胞中不表达。结论 PLZF RARA融合基因的表达在白血病的发生中起着极为重要的作用 ,TF受PLZF RARA融合基因表达上调。
- 孟秀琴成国祥王龙金晓龙熊树民陈国强蔡循贾培敏陈赛娟
- 关键词：白血病转基因小鼠
- Adiponectin基因剔除LacZ基因敲入小鼠模型的建立被引量：6
- 2006年
- adiponectin是脂肪细胞特异分泌的一种活性蛋白质,具有增加胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉硬化等活性.建立adiponectin基因剔除β-半乳糖苷酶基因(LacZ)敲入小鼠模型,可为整体动物水平研究adiponectin基因功能及其表达调控机制等提供理想工具.根据生物信息学方法获得adiponectin基因组序列,设计基因剔除及敲入策略,在adiponectin基因第2和第3号外显子剔除的同时,在其ATG和信号肽序列后顺接LacZ基因完整编码序列,构建完成了Adipo-LacZ-XpPNT基因剔除质粒.通过电穿孔将打靶质粒转入ES细胞,以G418和ganciclovir进行药物筛选,获得药物抗性的ES细胞克隆,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组克隆.将同源重组的ES细胞克隆注入小鼠囊胚得到嵌合体小鼠,嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配产生杂合子小鼠,杂合子间交配获得adiponectin基因剔除LacZ基因敲入纯合子小鼠.经RT-PCR、RNA印迹和ELISA检测证实纯合子小鼠脂肪和血清中adiponectin基因表达呈阴性.RT-PCR、RNA印迹及蛋白质印迹检测发现,LacZ基因在突变小鼠脂肪组织中有特异性表达,其表达谱与内源性adiponectin基因的表达谱一致.但在脂肪组织及外周血中未能检测到LacZ活性,且血清中LacZ蛋白亦呈阴性.由此成功建立了adiponectin基因完全灭活及LacZ基因以内源性adiponectin基因表达谱表达的小鼠模型,为进一步研究该基因功能及其表达调控创造了有利条件.
- 任维华李西华王芳乔建瓯党素英孔辉王龙陆顺元孙霞徐国江傅继梁费俭王铸钢
- 关键词：ADIPONECTIN基因剔除基因敲入
- GLUT4-Cre转基因模型建立与Cre酶特异性表达
- 2004年
- 目的 建立骨骼肌和脂肪组织特异性表达Cre重组酶基因的转基因小鼠,以期在上述组织细胞中实现相关基因的条件性剔除。方法 选择人葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的启动子驱动Cre重组酶的特异性表达,利用基因重组技术,构建GLUT4-Cre转基因表达质粒。通过显微注射法将该质粒导入小鼠受精卵细胞核,获得的新生鼠经PCR和Southern杂交方法进行基因型的分析鉴定,常规方法培育、传代转基因鼠。用RT-PCR和免疫组化法对Cre酶在阳性转基因鼠体内mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果 获得5只阳性转基因首建鼠,其中3只已建系并稳定传代。在脑、脂肪组织中检测到Cre基因表达,而心肌、骨骼肌及肝脏组织中未检出转基因表达。结论 成功构建了在脑、脂肪组织中特异性表达Cre的转基因鼠,为研究与2型糖尿病、胰岛素抵抗等相关的条件性基因剔除小鼠模型的建立奠定了基础。
- 孔辉骆惠均陈玉英王龙陆振虞费俭王铸钢
- 关键词：特异性表达GLUT4转基因鼠CRE重组酶CRE基因
