田进
- 作品数：43 被引量：58H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- SLA-1不同等位基因与病毒CTLs表位特异性结合的研究
- 高彩霞姜骞刘家森郭东春刘大飞刘春国李志杰仇铮田进曲连东
- 增强型猫ω干扰素的筛选及抗病毒活性分析被引量：1
- 2022年
- 为获得增强型猫ω干扰素(FeIFN-ω),本研究通过分子对接方法预测和参考相关位点研究,设计3组定点突变引物。以pJET-FeIFN-ω为模板分别扩增FeIFN-ω基因及其3个突变基因(FeIFN-ω-R35L、FeIFN-ω-A156R、FeIFN-ω-T188R),并连接慢病毒载体pLVX-IRSE,构建重组质粒pLVX-FeIFN-ω、pLVX-FeIFN-ω-R35L、pLVX-FeIFN-ω-A156R、p LVX-FeIFN-ω-T188R。4个重组质粒分别与包装质粒psPAX2和膜蛋白质粒pMD2.G共转染293T细胞包装慢病毒,48 h后收获细胞上清即为慢病毒。分别将4个慢病毒转导293悬浮细胞(293s),扩大培养后收获细胞上清,经镍离子亲和层析柱纯化蛋白,并经SDS-PAGE检测、BCA法测蛋白浓度。结果显示,rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R、rFeIFN-ω-T188R在293s细胞中得到高效表达,且蛋白纯化效果好;经BCA法测浓度,4种重组蛋白浓度均约为200μg/mL,即获得了重组干扰素rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R、rFeIFN-ω-T188R。4种重组干扰素分别经猫肾细胞(CRFK)孵育18 h后接种猫杯状病毒(FCV)或猫疱疹病毒(FHV)12 h,经相对荧光定量PCR法检测干扰素抗FCV和FHV活性;4种重组干扰素分别经CRFK细胞孵育12 h,经相对荧光定量PCR法检测干扰素刺激基因ISG15、Viperin、IFITM1的转录水平,结果显示:实验组与空白对照组差异极显著(P<0.01),实验组中rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R与rFeIFN-ω均差异不显著(P>0.05)或表现为活性降低,rFeIFN-ω-T188R与rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R差异均显著(P<0.05)表现为活性增强,并且r FeIFN-ω-T188R抗病毒活性及诱导ISGs的转录水平均比rFeIFN-ω高1倍左右。选择r FeIFN-ω和rFeIFN-ω-T188R分别与His纯化树脂结合,加入等量表达干扰素受体(IFNAR1/R2)的重组质粒转染293T细胞的裂解液,4℃结合过夜,经western blot鉴定干扰素与IFNAR1/R2结合亲和力分析,结果显示,rFeIFN-ω-T188R与IFNAR1的结合能力比r FeIFN-ω高1倍左右,且两者与IFNAR2的结合能力差异不�
- 李茵潘玉迪田进曲连东
- 关键词：真核表达生物活性
- 慢病毒介导的表达绿色荧光蛋白(GFP)转基因鸡研究
- 禽类生殖系统和胚胎发育的特殊性,使禽类转基因技术的研究落后于哺乳动物.慢病毒载体作为制备转基因家禽基因转移的工具已被证明具有高效性和稳定整合性.本研究用慢病毒载体,采用赤道开窗法将表达GFP重组慢病毒注射入新生种蛋胚盘下...
- 孟庆文王伟田进胡卫杰张在平
- 关键词：绿色荧光蛋白基因转移逆转录病毒载体
- 文献传递
- 猫杯状病毒的分离鉴定及其对理化因素抵抗力的研究被引量：7
- 2015年
- 采集南京某宠物医院处置的疑似患猫杯状病毒病的家猫的鼻咽拭子,将其处理液接种于CRFK细胞,进行连续传代培养,出现特征性细胞病变。通过对该分离株进行形态学观察、PCR鉴定、间接免疫荧光试验,证明该分离株为猫杯状病毒(FCV),遂将其命名为FB-NJ-13。用RT-PCR分段扩增病毒基因组并将序列提交至GenBank(登录号:KM111557)。序列分析显示,该毒株与国内外参考毒株核苷酸序列的同源性在76.2%~79.6%之间。同时研究了该病毒对温度、酸碱、有机溶剂、干燥和紫外线照射等理化因素的抵抗力。结果显示,50℃30min或70℃5min即可灭活该病毒;该病毒在pH值为3的酸性环境中和pH值为10的碱性环境中不稳定;它对乙醚和氯仿不敏感;紫外线照射2.0h以上,可将该病毒有效灭活。上述研究结果为揭示我国FCV的分子生物学特征和遗传进化规律提供了重要的科学依据。
- 黄倩倩刘家森田进孔德生曲连东
- 关键词：全基因组
- 杂交瘤细胞株McAb 1G2及兔出血症RHDV2型病毒单克隆抗体
- 杂交瘤细胞株McAb 1G2及兔出血症RHDV2型病毒单克隆抗体，它涉及一株杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体。它解决了目前没有能够单独识别RHDV2型病毒或RHDVa型病毒的单克隆抗体的问题。杂交瘤细胞株McAb 1G2...
- 刘家森曲连东姜骞郭东春刘大飞刘春国李志杰仇铮田进吴红霞刘明
- 北方地区犬细小病毒分离鉴定与VP2基因序列分析
- 犬细小病毒(CPv)是一种感染犬和野生犬科动物而导致急性接触性传染病的重要病原,对中国乃至世界的养犬业造成了较大的危害,为此在初生幼犬的免疫程序中免疫犬细小病毒病是必不可少的.
本研究旨在探讨犬细小病毒(CPV...
- 仇铮张晓战李志杰刘大飞刘春国郭冬春刘培欣田进曲连东
- 关键词：犬细小病毒基因序列
- 文献传递
- Real-time RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒的研究被引量：1
- 2010年
- 为了建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的方法,试验采用Real-time RT-PCR,通过1对ALV-J特异性引物对ALV-J山东分离株(命名为ALV-JSD株)进行特异性、敏感性和重复性试验;然后用ALV-JSD株感染1日龄SPF鸡,感染8周后剖检取各组织,用已建立的方法检测ALV-LSD株的感染情况。结果表明:特异性试验中只有以ALV-JSD株cDNA为模板的反应管中能够检测到扩增曲线;敏感性试验测得反应灵敏度达到3.01×1010 copies/μL,比普通PCR灵敏100多倍;对人工感染鸡的不同组织样品进行3次重复检测,病毒检出率为100%;经重复性和实际临床样本检验证实,该方法稳定、可靠,为ALV-J的早期快速诊断建立了特异、灵敏、廉价的定量检测方法。
- 张在平田进孟庆文马学恩
- 关键词：J亚群禽白血病病毒SYBRREAL-TIMERT-PCR
- 果子狸源呼肠孤病毒MPC/O4株感染细胞水平评价
- 哺乳动物呼肠孤病毒具有广泛的致病性,细胞和组织感染机制也十分复杂,对呼肠孤病毒细胞嗜性的研究是理解该病毒传播和发病机制的关键.本研究以果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株为研究对象,测定病毒滴度,感染不同细胞系,通过构建的实...
- 李志杰田进仇铮刘春国刘大飞刘培欣张晓战胡晓亮曲连东
- 关键词：细胞嗜性感染力
- 文献传递
- 靶向pol基因siRNA抑制J亚型禽白血病病毒复制的研究被引量：2
- 2011年
- 为筛选能够有效抑制J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的siRNA,本研究根据ALV的pol基因保守序列设计合成5对shRNA序列,并将其分别克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建siRNA表达重组质粒,分别为pcDNA-sh-pol711、pcDNA-sh-pol814、pcDNA-sh-pol1016、pcDNA-sh-pol1915和pcDNA-sh-pol2516。将重组质粒分别转染DF-1细胞6h后,以100TCID50的ALV-J感染细胞,并利用IFA、westernblot和real-timePCR方法评价其对ALV-J复制的抑制效果。IFA和westernblot检测结果表明:其中pcDNA-sh-pol711、pcDNA-sh-pol814和pcDNA-sh-pol2516可以有效抑制病毒囊膜蛋白的表达。Real-timePCR结果显示:与阴性对照和空载体对照相比,这3种siRNA在mRNA水平对ALV-J的抑制率达29%～86%。本研究在细胞水平上筛选的siRNAs可作为候选siRNAs,为抗鸡ALV-J的研究奠定基础。
- 张在平马学恩杨海彦田进孟庆文
- 关键词：禽白血病病毒SIRNA
- 表达抗流感Mx-RNAis基因转基因鸡研究
- 目的:培育表达抗流感Mx-RNAis基因转基因(TG)鸡,为转基因鸡技术平台、转基因鸡抗病育种奠定基础.方法:以鸡β-actin系统性表达启动子,应用慢病毒载体转移技术将Mx-RNAis基因导入家禽,通过PCR、RT-P...
- 孟庆文王伟田进王建超邓瑞坡陈洪岩
- 关键词：转基因技术
- 文献传递
