瞿成奎
- 作品数：37 被引量：63H指数：5
- 供职机构：安徽医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划安徽省人才开发基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人粒细胞集落刺激因子杂合蛋白的分离纯化与复性研究
- 1993年
- 大肠杆菌中表达的rhG—CSF经过包涵体纯化及DEAE—Sepharose CL—6B、Sephacryl S—200两步连续层析纯化,纯度达90%。纯化样品经复性处理,生物活性得以恢复,免疫印迹试验阳性。
- 瞿成奎贺福初吴祖泽刘福陆
- 关键词：集落刺激因子纯化复性
- 含肠激肽酶识别位点的人G-CSF杂交蛋白在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 1992年
- 瞿成奎贺福初刘福陆吴祖泽
- 关键词：基因工程粒细胞
- 用离心法从琼脂糖凝胶中回收DNA片段被引量：1
- 1993年
- 借助离心式层折柱,成功地从琼脂糖凝胶中分离0.287～23.13kb范围的DNA片段;所得片段经乙醇沉淀、溶解后可有效地用于酶切、连接与转化。此法设备要求简单,操作省时简便,得率在50%以上。
- 邢桂春贺福初瞿成奎吴祖泽
- 关键词：DNA片段离心法琼脂糖凝胶
- hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(GreenFluorescenceProtein,GFP)。采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒。PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度。结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010pfu/ml。结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础。
- 倪芳鲁茁壮瞿成奎胡泽斌王立生汪思应
- 关键词：腺病毒科
- 环境污染物As及SHP2D61G/＋激活对小鼠成纤维母细胞miRNA表达谱的影响被引量：3
- 2013年
- 目的建立环境致癌物与基因突变联合因素影响下的miRNA表达谱,为肿瘤发生机制的进一步研究提供新线索。方法同等条件下,首先制备SHP2+/+野生型(wild type,Wt)及SHP2D61G/+激活突变(gain-of-function mutation,GOF mutation)小鼠永生化的成纤维母细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)细胞,之后以0.5μmol/L的三氧化二砷急性处理MEFs细胞48 h后提取细胞总RNA,用小鼠miRNA芯片杂交/分析,建立miRNA(microRNA,miRNA,miR)表达谱,筛选差异表达显著者,用RT-PCR进行验证。结果重金属化合物三氧化二砷处理SHP2+/+野生型和SHP2D61G/+突变的MEFs细胞48h后,数十个miRNAs出现差异性表达,miRNA在三氧化二砷诱导前后的细胞或SHP2激活突变与否的细胞出现表达增加或减少,且发现受三氧化二砷和SHP2激活突变影响变化一致的miRNAs,如mmu-miR-100(表达下降)、mmu-miR-1907(表达升高)等,RT-PCR检测发现mmu-miRNA-100、mmu-miRNA-1907的表达趋势与芯片结果是一致的。结论基因突变与环境污染可以影响MEFs细胞的miRNA表达谱出现明显改变,这些改变可能是细胞恶性转化及肿瘤发生的基础。
- 崔花芹汪心怡陈吉陈卓赵华瞿成奎汪思应
- 关键词：环境污染基因突变
- Gab2在SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖活化及其导致器官损伤中的作用
- 2013年
- 目的 观察接头蛋白Gab2对激活突变SHP-2导致的肥大细胞异常增殖活化是否具有调控作用,对激活突变SHP-2小鼠器官损伤有无影响.方法 用Gab2-/-、SHP-2D61G/＋小鼠杂交建立四种基因型（SHP-2＋/＋、Gab2-/-、SHP-2D61G/＋、SHP-2D61G/＋/Gab2-/-）小鼠为研究对象;取小鼠骨髓细胞用IL-3诱导建立肥大细胞,用MTS法检测不同基因型小鼠肥大细胞对细胞因子刺激增殖反应性;用ELISA法检测小鼠血清及肥大细胞分泌炎症因子水平,放射免疫法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）的水平;用病理组织学技术检测小鼠组织白细胞浸润及器官损伤情况.结果 Gab2缺失后,SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖及活化现象明显改善,对细胞因子增殖反应性下降,相应细胞因子分泌减少,心脏及肝脏组织损伤减轻.结论 Gab2缺失降低了SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖活化和心脏及肝脏组织损伤.
- 陈吉陈卓汪心怡郑红瞿成奎汪思应
- 关键词：SHP-2器官损伤
- 中国人γ－干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达被引量：9
- 1995年
- 应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物中克隆了ＩＦＮ－γｃＤＮＡ，序列分析证实了分子进化规律对ＩＦＮ－γｃＤＮＡ序列存在多态性的推论．在此基础上应用ＤＮＡ重组技术，将去信号肽中国人ＩＦＮ－γｃＤＮＡ克隆到原核表达质粒ｐＢＶ２２０Ｐ＿ＲＰ＿Ｌ启动子下游，转化大肠杆菌ＤＨ５α，通过温度诱导表达，成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人ＩＦＮ－γｃＤＮＡ，其表达水平占全菌可溶性总蛋白的４４．４％，初步复性后生物学活性测定结果表明γ－ＩＦＮ表达量为０．４５×１０￣７～２．３４×１０￣７单位／Ｌ．
- 瞿成奎魏汉东鱼咏涛贺福初吴祖泽
- 关键词：中国人Γ-干扰素CDNA大肠杆菌
- Tec酪氨酸蛋白激酶参与肝癌的多药耐药
- 目的:Tec是TEC（Tyrosine kinase expressed in hepatocelluar carcinoma,TEC）非受体型酪氨酸蛋白家族中的一个成员,具有PH、TH、SH3、SH2和Kinase d...
- 余科科李菲菲郑红倪芳储著朗瞿成奎汪思应
- 关键词：TECHGF
- 文献传递
- hG-CSF cDNA 5′端序列修饰对其在原核细胞中表达的影响被引量：2
- 1993年
- 本文设计并构建了人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)三种cDNA突变体表达质粒,对影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的因素进行了探讨。指出cDNA 5′端起始密码子ATG的上、下游序列对其表达有显著影响。不同因素影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的主要调控环节在转录水平;翻译水平的差别亦可能与其表达效率的不同有一定关系。
- 瞿成奎贺福初刘福陆吴祖泽
- 关键词：CDNA突变体基因表达
- 造血干细胞的基因转移与基因治疗
- 1995年
- DNA重组技术的发展为人类疾病的治疗开辟了一条新的途径,这就是基因治疗。基因治疗自创立以来,在许多方面取得可喜进展。80年代末以来,人类某些疾病的基因治疗已从基础研究阶段进入了临床试验期。 造血干细胞是各系血细胞的原始细胞,作为基因治疗的靶细胞,它具有自我更新和向各系分化的双重特性,加之易于采集、便于操作与回输,因而倍受基因治疗研究者的重视。近年来,随着造血干细胞的分离、纯化技术及骨髓造血干细胞移植技术的发展,有关的基因转移与基因治疗研究也迅速发展。
- 瞿成奎贺福初吴祖泽
- 关键词：造血干细胞基因治疗基因转移技术重组逆转录病毒包装细胞病毒载体
