目的:建立浙贝母超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)指纹图谱,并确定其抗炎质量标志物。方法:色谱柱为Eclipse Plus C18,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.4 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL;采用电喷雾离子源,以正、负离子模式检测,在质荷比(m/z)50~1200范围内进行扫描。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)建立10批不同产地浙贝母的UPLC-Q-TOF-MS/MS指纹图谱。以小鼠耳肿胀度和血清中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平为抗炎指标,采用双变量相关分析法和灰色关联度分析法对浙贝母指纹图谱中各共有峰相对峰面积与抗炎指标的相关性进行分析,筛选质量标志物并进行结构鉴定。结果:在正、负离子模式下,10批浙贝母药材分别各有共有峰26、10个。综合双变量相关分析和灰色关联度分析结果,共发现与抗炎作用相关的质量标志物9个,经鉴定分别为贝母素乙、贝母素甲、环巴胺、胡萝卜苷、PolyphyllinⅤ、苦鬼臼毒素、植物甾醇、Ent-kaur-15-en-17-ol、Ent-17-norkauran-16-one。结论:所建立的UPLC-Q-TOF-MS/MS指纹图谱可用于评价浙贝母药材的质量;贝母素乙、贝母素甲、环巴胺等可能是浙贝母具有抗炎作用的质量标志物。
明确乌药醇提物对高脂饮食诱导的高脂血症模型大鼠血脂水平的改善作用,初步从胆固醇逆转运角度探讨其可能的作用机制。SD大鼠分为正常组、模型组、阿托伐他汀组以及乌药醇提物(LREE)高、中、低剂量组,除正常组外,其余各组采用高脂饮食喂养建立高脂血症大鼠模型;造模成功后,各给药组分别灌胃给予相应药物,正常组和模型组给予纯水,连续5周。全自动生化仪测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-c)水平及丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;酶比色法测定大鼠肝脏TC,TG,总胆汁酸(total bile acid,TBA)和粪便中TC,TBA含量;HE染色法观察肝组织病变;免疫组化法检测小肠三磷酸结合盒转运体G8(ATP-binding cassette G8,ABCG8)表达;Western blot和免疫组化法检测肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ/α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma/aerfa,PPARγ/α)、肝X受体-α(liver X receptor-α,LXRα)、三磷酸结合盒转运体A1(ATP-binding cassette A1,ABCA1)、清道夫受体B类Ⅰ型(scavenger receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)表达。结果显示,LREE能有效降低血清和肝脏TC,TG水平及血清LDL-c水平和AST活性,提高HDL-c水平,但对ALT活性和肝指数未有显著性改善;HE染色结果表明,LREE能够减轻肝脏脂质沉积,减少炎性细胞浸润;此外,LREE能增加粪便TC和TBA含量,上调小肠ABCG8和肝脏PPARγ/α,SR-BⅠ,LXRα,ABCA1蛋白表达。提示,LREE对高脂饮食诱导的高脂血症具有改善作用,该作用可能与调节胆固醇逆转运(RCT),促进胆固醇向肝脏内转运及向胆汁酸的转化,以及胆固醇和胆汁酸的肠道排泄有关,RCT可能是LREE抗高脂血症的潜在机制。
