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罗立廷: 作品数：12 被引量：49H指数：3; 供职机构：华中科技大学生命科学与技术学院中英 HUST-RRes 基因工程和基因组学联合实验室更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

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小麦高分子量麦谷蛋白亚基1Dx5启动子驱动外源基因的表达: 2005年; 将小麦高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)基因的胚乳组织特异性表达启动子驱动的外源突变型1Dx5基因和gus基因导入小麦中。对其转基因植株连续3代的跟踪研究表明,突变型1Dx5基因的重复序列导致其表达蛋白分子量增大,并影响其它1Bx17+1By18亚基基因的表达。组织化学分析观察到gus基因在1Dx5基因启动子驱动下的表达表现出胚乳组织特异性,在开花2周后开始表达,表达量呈持续上升,至腊熟期达到最高,其次为籽粒成熟期。; 姚琴丛玲罗立廷李三和何光源; 关键词：高分子量麦谷蛋白亚基特异性表达小麦组织特异性表达 GUS基因

拟南芥psy基因cDNA的克隆及其植物表达载体的构建被引量：2: 2006年; 为了获得胚乳组织特异性表达八氢番茄红素的转基因小麦,以拟南芥幼叶RNA为模板,由特异型引物通过RT-PCR一步法得到大小约为1.3kb的基因片段,将此片段连接在克隆载体pMD18-T进行测序,结果表明,该基因片段为八氢番茄红素合成酶基因(psy)cDNA片段。将psy基因片段正向插入植物表达载体pLRPT中高分子量麦谷蛋白亚基基因1Dx5启动子与nos终止子之间,pLRPT载体无1Dx5基因开放阅读框,运用菌落PCR对重组子进行筛选与鉴定,说明拟南芥psy基因已正确插入pL-RPT,成功构建了植物表达载体pLRPTPSY。; 姚琴丛玲罗立廷陈明洁汪越盛杨广笑何光源; 关键词：八氢番茄红素合成酶植物表达载体菌落PCR

一种有效回收短片段PCR产物的方法被引量：10: 2006年; 目的:为了有效地回收小于200bp的短片段PCR产物。方法:研究了在-20℃条件下,用无水乙醇和3mol/l醋酸钠共沉淀短片段的PCR产物的方法。结果和结论:用这种共沉淀PCR产物的方法,它能够有效地回收小于200bp以下的DNA片段,并且回收到的片段能够有效的进行酶切反应和T-载体连接反应。这种方法也能够回收酶切后的短DNA片段,并对后来的连接反应没有影响。这种共沉淀回收短片段DNA方法相对于其他方法来不仅具有可行性,而且有经济和操作简单的优点。; 罗立廷王珏姚琴常俊丽郑重何光源; 关键词：DNA回收 PCR产物

牡山羊草Aegilops juvenalis Puroindoline b基因的克隆: 2005年; Puro indo line a(P ina)和puro indo line b(P inb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦P inb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对六倍体牡山羊草A eg ilop s juvena lis(UUMM DD)的基因组DNA和胚乳cDNA进行P inb基因扩增、克隆和序列测定,发现了两个新型P inb等位基因P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2。该基因全长360 bp,编码119个氨基酸残基。它编码的蛋白和麦类作物Puro indo line B(P inB)的成熟蛋白有非常高的同源性,具有麦类作物P inB蛋白所特有的W PTKWW K的色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.C ap ito le的P inb-D 1a相比较,其核苷酸同源性为93.1%、93.3%,氨基酸同源性为90.8%、92.4%。P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2分别含有11和9个氨基酸变异位点。RT-PCR证实了P inb-a lle le-2基因在籽粒胚乳中的表达。Sou thern B lot分析结果表明,牡山羊草中含有两个拷贝的P inb基因,其中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因。; 陈明洁方倜罗立廷杨广笑何光源; 关键词：PUROINDOLINE 籽粒硬度克隆

中国春小麦puroindoline a基因的克隆及其真核表达载体的构建: 2007年; 目的:puroindoline(pin)基因在控制麦类作物的籽粒硬度中起着重要作用。构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-pina-gfp,为pina基因在哺乳细胞中的表达提供基础。方法:利用PCR方法从中国春小麦基因组中克隆到了pina基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)-gfp,用PCR和酶切鉴定重组子。结果:PCR和酶切鉴定表明,所构建的真核表达重组质粒为pcDNA3.1(+)-pina-gfp;将该片段克隆到pCF-T载体中,经测序验证,表明其为目的基因。结论:构建的pina基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-pina-gfp为pina基因在哺乳动物细胞中的表达提供了基础。; 陶红梅罗立廷朱婷婷杨广笑何光源; 关键词：PUROINDOLINE 中国春小麦基因克隆真核表达载体

麦族硬度基因分子进化及其表达研究: 罗立廷; 文献传递

牡山羊草puroindoline a基因的克隆与表达分析: 2005年; puroindoline a(Pin a)和puroindoline b(Pin b)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦Pin a基因的保守序列,设计合成了1对特异性引物ForA1和RevA1,对六倍体牡山羊草Aegilops juvenalis(UUMMDD)的基因组DNA和胚乳cDNA进行Pin a基因扩增、克隆、序列测定和表达分析,发现了1个新型Pin a(Pin a-allele),其ORF长447 bp,编码148个氨基酸残基,具有麦类作物Pin a基因特有的28个氨基酸的信号肽序列和WRWWKWWK的色氨酸结构域基因序列,与软粒小麦cv.capitole的Pina-D1a相比较,其核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为98.7%与96.6%。Pin a-allele含有1个紧邻色氨酸结构域的突变位点(Gln77Leu)。RT-PCR证实了Pin a在籽粒胚乳中的表达。Southern Blot分析结果表明,牡山羊草中Pin a基因含有1个拷贝。研究结果表明,山羊草中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因。; 陈明洁罗立廷刘勇何勇刚何光源; 关键词：PUROINDOLINE 籽粒硬度克隆

麦族硬度基因分子进化及puroindoline A基因表达研究: 小麦籽粒硬度是小麦的重要表型性状之一,它直接影响小麦的磨粉品质和烘烤品质,是决定小麦品质优劣、最终用途和小麦国际贸易的重要指标之一。位于小麦染色体 5D 短臂上的 Ha(hardness)位点包含控制籽粒硬度的主效基因,...; 罗立廷姜泽群崔翠菊苗英杰汪越胜杨广笑何光源; 文献传递

小麦面粉Puroindoline蛋白的提取与纯化被引量：1: 2005年; Puroindoline蛋白是小麦面粉中一种非常重要的蛋白质,不仅影响和决定了籽粒的硬度,而且有抗G+、G-菌以及抗真菌的作用.用含4% Triton X-114、 100 mmol/L pH7.8 Tris-HCl缓冲液处理小麦面粉来分离Puroindoline蛋白,经处理后得到的蛋白质混合溶液首先用分子筛葡聚糖G-75纯化,每个收集管内的组分经SDS-PAGE分析,分子量小于31 kD的蛋白质组分被回收和集中,回收的蛋白质组分经PEG20000浓缩后,再用离子交换柱羧甲基纤维素(CM-23)进行纯化.其洗脱液分别是双蒸水和NaCl,梯度为0.05～0.7 mol/L、8 mmol/L pH5.5的MES缓冲液,回收只含15 kD的蛋白质的组分,接着用PEG20000浓缩,最后冷冻干燥得到Puroindoline蛋白.; 王珏罗立廷陈明洁李洋张金锐何光源; 关键词：面粉 TRITON SDS-PAGE

中国春硬度基因的克隆与序列分析被引量：1: 2007年; 目的:克隆、分析puroindoline a(Pina)、puroindoline b(Pinb)和grain softness protein(gsp)这三种控制小麦籽粒硬度的主要基因。方法:根据已报导的小麦3种基因的保守序列,设计合成了3对特异性引物,对六倍体软质小麦中国春基因组DNA进行基因扩增、克隆和序列测定,得到了3个基因的全长。结果:其ORF分别是447bp、447bp和495bp,编码的蛋白质全长分别为148aa、148aa和164aa。3种蛋白质都含有谷类作物所特有的19aa的信号肽,10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构,PINA和PINB蛋白有麦类作物所特有的富含色氨酸的结构域。结论:与粗山羊草的pina、pinb和gsp相比较,其核苷酸同源性为99.8%、95.8%和99.4%,氨基酸的同源性高达99.3%、96.6%和98.8%。3种与硬度相关的基因的分离与克隆丰富了小麦种质遗传资源库,为弄清影响小麦籽粒硬度的机制及其抗菌活性奠定了基础。; 罗立廷陶红梅杨广笑何光源郑重; 关键词：PUROINDOLINE GSP 籽粒硬度克隆

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