路君
- 作品数：16 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京军区福州总医院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家自然科学基金福建省科技计划重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 无血清培养人脐带间充质干细胞的初步探讨
- 无血清培养基(SFM)因组分较明确、无或少有动物源性成分等优点受到干细胞研究者的重视,而干细胞基础与临床应用研究的蓬勃发展,掀起了SFM的研发热潮,其中Invitrogen公司的STEMPROMSC SFM是业内公认的...
- 王昊旻王庆华谭建明黄粱浒路君王瑾陈津付云峰施晓华赵红州林娜
- 棕榈酸酯诱导人脐带间充质干细胞内质网应激和细胞凋亡
- 目的:饱和游离脂肪酸棕榈酸酯(palmitate,PA)可诱导包括胰岛β细胞在内的多种细胞凋亡,本文旨在观察PA诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal s...
- 路君谭建明
- 骨髓间充质干细胞(BMSCs)对重症急性胰腺炎(SAP)炎症调控机制的实验研究
- 【背景】急性胰腺炎是(acute pancreatitis,AP)临床上常见的急腹症之一,其中10-20%可发展为重症急性胰腺炎(severeacute pancreatitis,SAP)。SAP是以胰腺组织出血坏死为主...
- 赵海峰王庆华吴卫真郑丰谭建明朱长炎付云烽王昊旻王瑾董会月路君王水良黄粱浒
- 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体稳定过表达基因工程修饰人脐带间充质干细胞亚细胞系的建立被引量：4
- 2015年
- 目的通过基因工程修饰法建立肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)稳定过表达的人脐带间充质干细胞亚系(h UC-MSC_TRAIL)。方法人TRAIL全长蛋白编码序列(CDS)由PCR法扩增而得,PCR产物经NotⅠ和MluⅠ双酶切并纯化后,亚克隆至经同样双酶切的慢病毒表达载体p LEX-MCS。重组载体经PCR法和限制性内切酶酶切法鉴定,再行DNA直接测序验证后命名为人TRAIL表达慢病毒载体pLEX-h TRAIL。p LEXh TRAIL与相应包装质粒ps PAX2和p MD2.G经聚乙烯亚胺介导共转染HEK293T细胞以包装慢病毒。P4代h UC-MSC经慢病毒感染24 h,再行嘌呤霉素筛选2周后,抽提细胞基因组DNA,行PCR法鉴定h TRAIL c DNA在h UC-MSC基因组中的整合情况;同时抽提细胞总RNA,并行RT-PCR法检测外源h TRAIL在h UC-MSC中的m RNA表达水平,以及实时定量RT-PCR法检测周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、p21^(WAF1/CIP1和p27的表达,采用方差分析和t检验进行统计学分析。结果 PCR法和限制性内切酶酶切法鉴定结果表明,本研究已成功构建人TRAIL慢病毒表达载体p LEX-h TRAIL,直接DNA测序结果证实克隆得到的人TRAIL蛋白编码序列准确无误;病毒包装及细胞感染的鉴定结果说明,慢病毒感染法可成功介导外源人TRAIL在h UC-MSC的稳定整合和高表达;实时定量RT-PCR法检测结果则显示,与对照慢病毒感染后的细胞相比,h TRAIL表达慢病毒感染后其细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、p21^(WAF1/CIP1)和p27的m RNA表达水平分别是对照组的1.19倍(P=0.141)、0.94倍(P=0.745)、0.95倍(P=0.047)和1.01倍(P=0.567),表明外源TRAIL高表达对体外培养的h UC-MSC生长增殖等表型无显著影响。结论本研究经基因工程修饰法成功构建了具外源TRAIL稳定高表达的h UC-MSC亚细胞系,该亚细胞系的建立为后续靶向攻击TRAIL敏感肿瘤细胞的细胞治疗的探索奠定了基础。
- 林榕左伟敏祝玲王瑾路君黄梁浒王庆华谭建明王水良
- 关键词：基因修饰间质干细胞TRAIL细胞系
- 衰老间充质干细胞核糖体蛋白基因表达分析
- 【目的】间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有分化为多种组织细胞的能力,已被用于多种组织的再生和修复,成为目前研究最活跃的成体干细胞。老年个体来源的MSCs移植疗效要低于年轻个体来源的...
- 路君
- 使用规律间隔的短回文重复序列cas9系统研究转化生长因子β1在小鼠黑色素瘤细胞中的作用
- 2016年
- 目的研究在小鼠黑色素瘤细胞系(B16)中使用成簇的、规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)靶向敲除转化生长因子β1(TGF-β1)后,细胞体外增殖、侵袭、迁移能力的变化。方法使用CRISPR-cas9系统建立敲除TGF-β1的小鼠黑色素瘤细胞系,用细胞培养计数法检测对照组、载体对照组与TGF-β1-组B16细胞的生长速度,用平板克隆与软琼脂克隆实验来检测三组细胞体外增殖能力,分别用Transwell小室与加基质胶Transwell小室检测三组细胞的体外迁移与侵袭能力。结果成功建立TGF-β1敲除了的B16细胞系,生长曲线在24、48、72、96 h测得3组细胞数目之间差异均无统计学意义(P均>0.05);平板克隆一周结果显示:TGF-β1-组的克隆形成率0.067±0.032小于载体对照组0.489±0.034,而载体对照组小于对照组0.633±0.041,F=198.710,P=0.000;平板克隆2周时,TGF-β-组的细胞克隆形成率0.443±0.012与对照组0.489±0.064均大于载体对照组0.370±0.005,F=7.599,P=0.023;还发现虽然TGF-β-组的克隆形成数量多,但是克隆的直径小于其他两对照组;软琼脂克隆实验:对照组的形成率0.008±0.0001低于载体对照组0.012±0.0006与TGF-β1-组0.012±0.0007,F=65.39,P<0.0001。侵袭能力实验显示:TGF-β1-组穿过膜的B16细胞数目(12±4.359)个明显的低于对照组(101±18.735)个与载体对照组细胞(100±8.889)个,F=52.34,P=0.0002;迁移能力实验结果显示:TGF-β1-组的B16通过Transwell膜的细胞数量(2.037±0.132)个明显的少于对照组(4.07±0.481)个与载体对照组(8.683±1.017)个,F=81.34,P<0.0001。结论 TGF-β1敲除后的小鼠黑色素瘤细胞的体外生长、增殖能力并没有受到影响,但是侵袭与迁移能力受到了抑制。
- 王萍马予洁王庆华路君谭建明
- 关键词：小鼠黑色素瘤转化生长因子Β细胞培养技术
- HLA交叉反应组配型在移植肾长期存活中的作用研究
- 祝玲吴琳赵虎王庆华路君谭建明
- Y染色体追踪骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对重症急性胰腺炎(SAP)的实验研究
- 【背景】近年来,染色体标记法已在众多细胞移植实验中广泛应用。染色体标记法是通过Y染色体来示踪移植细胞的去向,Y染色体是雄性个体特有的基因结构,通常作为移植细胞的标记,其中Y染色体的Sry作为细胞本身基因组的标志,在细胞分...
- 赵海峰王庆华吴卫真郑丰谭建明朱长炎付云烽王昊旻王瑾董会月路君王水良黄粱浒
- 人胚胎干细胞外源基因的瞬时表达效率
- 2011年
- 背景:人类胚胎干细胞的修饰和操作技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。目的:对比观察两种化学转染试剂转染含不同启动子的增强型绿色荧光蛋白表达载体在人胚胎干细胞中的表达效率。方法:采用Fugene HD和lipofectamine2000分别转染无滋养层培养的H9细胞,荧光显微镜下观察阳性克隆,流式细胞术分析不同载体pCAG-EGFP、pEGFP-N3在H9细胞中的表达效率。结果与结论:Fugene HD转染的pCAG-EGFP、pEGFP-N3两种载体在H9细胞中的表达效率分别为(42.45±3.32)%、(25.95±1.91)%,差异有显著性意义(P<0.05)。lipofectamine2000转染的pCAG-EGFP、pEGFP-N3两种载体在H9细胞中的表达效率分别为(1.94±0.18)%、(1.49±0.33)%。采用Fugene HD转染的表达效率均高于lipofectamine2000转染的表达效率(P<0.05)。结果显示在人胚胎干细胞的H9细胞系中,Fugene HD的转染效率显著高于lipofectamine2000;CAG启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白表达效率显著高于CMV启动子。
- 路君陈宗峰黄粱浒谭建明
- 关键词：人胚胎干细胞基因转染启动子增强型绿色荧光蛋白
- 新型化学转染试剂对人脐带间充质干细胞的转染优化被引量：1
- 2011年
- 背景:人脐带间充质干细胞的基因修饰技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。目的:对比3种新型化学转染试剂在人脐带间充质干细胞中的瞬时转染效率。方法:采用FugeneHD、LipofectamineLTX及Attractene分别转染人脐带间充质干细胞,荧光显微镜下观察阳性细胞,流式细胞术分析不同转染试剂的转染效率,锥虫蓝染色观察转染后人脐带间充质干细胞的生存率。结果与结论:LipofectamineLTX转染效率最高,显著高于FugeneHD和Attractene[(32.50±2.12)%,(4.30±0.64)%,(1.70±0.08)%,P<0.05]。LipofectamineLTX转染后的细胞生存率略低于FugeneHD及Attractene,但差异无显著性意义[(69.8±6.3)%,(92.4±4.2)%,(106.6±3.9)%,P>0.05]。提示LipofectamineLTX是人脐带间充质干细胞较为理想的化学转染试剂。
- 路君赵红州陈津付云峰黄梁浒谭建明
- 关键词：脐带间充质干细胞基因转染安全性
