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邹正渝: 作品数：14 被引量：32H指数：3; 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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重组hS100A6的原核表达及其对人骨肉瘤细胞143B的生物学作用和机制探讨: 研究背景与目的：　　骨肉瘤是发病率约为骨恶性肿瘤的40％左右，仅次于软骨肉瘤，发病的机理尚不明了。骨肉瘤好发于青少年，恶性程度高，局部浸润、早期转移和复发的倾向高，预后极差。由于骨肉瘤早期转移率高，早期诊断及早期治疗成为...; 邹正渝; 关键词：骨肉瘤生物学功能原核表达

融合蛋白GST-hS100A2对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用被引量：1: 2011年; 目的探讨GST-人S100A2融合蛋白(GST-hS100A2)对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用。方法将重组质粒pGST-moluc-hS100A2和pGST-moluc转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot鉴定后采用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠分离纯化。以制备的GST-hS100A2融合蛋白分别处理HCT116和SW480细胞,以GST处理的细胞和空白细胞作为对照,分别用MTT法检测细胞增殖活力,Hochest33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,划痕愈合法检测细胞迁移能力,Transwell小室试验检测细胞侵袭能力。结果融合蛋白GST-hS100A2能以剂量依赖和时间依赖的方式抑制HCT116和SW480细胞的增殖,并可明显促进两种细胞凋亡,阻滞HCT116细胞周期,抑制HCT116细胞迁移和两种细胞的侵袭能力。结论 GST-hS100A2对人结肠癌HCT116和SW480细胞具有一定的抑制作用,有可能成为结肠癌分子治疗的新靶标。; 徐兰兰游莉郭元元邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：融合蛋白

hS100A6对人骨肉瘤细胞株143B的体内体外作用被引量：1: 2011年; 为研究hS100A6对人骨肉瘤细胞系143B的体内体外作用,利用整合有S100A6基因和SiS100A6基因的腺病毒(AdS100A6和AdSiS100A6)作用于143B细胞,MTT法和台盼蓝染色法检测其对细胞的增殖作用,Hoechst染色法检测其对凋亡的作用,Transwell实验检测其对迁移的作用,同时以143B裸鼠皮下移植瘤为动物模型,检测S100A6对143B的体内作用,结果显示AdS100A6干预后出现细胞增殖活性的减弱、凋亡率增高、迁移率降低,在体内试验中瘤体体积明显较对照组减小,而AdsiS100A6干预后出现时间依赖性地细胞增殖活性的增强、凋亡率降低、迁移率增高,体内试验中瘤体体积较对照组明显增大.提示hS100A6能抑制人骨肉瘤细胞株143B细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,同时能抑制人骨肉瘤细胞株143B的裸鼠皮下移植瘤的生长.; 李星星张昀源陈英华卫佳邹正渝吴丽美马闻游莉郭元元徐兰兰何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤生物学效应

重组hS100A6蛋白的原核表达及其对人骨肉瘤细胞系143B的生物学作用被引量：4: 2012年; 目的:制备重组hS100A6蛋白,并研究其对人骨肉瘤细胞系143B的生物学作用。方法:构建pGST-HRV3C-hS100A6质粒,经转化至E.coli BL21,IPTG诱导表达融合蛋白GST-HRV3C-hS100A6,经超声破菌,谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠纯化,GST-HRV3C酶切,再纯化,Western blot鉴定,分光光度法蛋白定量。以人骨肉瘤细胞系143B为研究对象,MTT检测细胞增殖,Hoechst检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测hS100A6对β-catenin表达的影响。结果:成功制备重组hS100A6蛋白,测得该蛋白产量约为4mg/L菌液。30μg/ml重组hS100A6促进143B细胞的增殖、迁移、侵袭以及β-catenin的表达(P<0.05),对143B细胞的凋亡无明显影响(P>0.05)。结论:成功制备重组hS100A6蛋白,30μg/ml重组hS100A6蛋白对143B细胞有一定的促进作用。; 邹正渝王海燕黎玉叶孙双双叶立伟武睿段亮陈娴罗进勇周兰; 关键词：骨肉瘤

GST-hS100A9融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：3: 2011年; 目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(GS4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36 000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20 mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖。结论成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用。; 游莉徐兰兰郭元元邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：蛋白纯化蛋白鉴定

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移被引量：11: 2013年; 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用.方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6,rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和0.5 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt,t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt,p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移.结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P〈0.05）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P〈0.05）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降10.3%～69.7%,细胞迁移率下降37.9%～41.6%,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的.; 王海燕邹正渝段亮陈娴李欢袁世梅何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤 P13K AKT信号通路

S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制被引量：2: 2011年; 探讨S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制。用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6和AdsiS100A6处理人骨肉瘤细胞系143B,Western blot分析处理前后细胞中β-catenin水平的变化;再以人胚肾细胞HEK293为研究对象,通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合Western blot检测S100A6与Wnt经典信号通路主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、散乱蛋白(Dishevelled,DVL)和轴蛋白(Axin)之间的相互作用。结果:1)AdS100A6作用48h后,143B细胞中β-catenin水平较实验对照组(AdGFP组)增加了64%(P<0.01),而AdsiS100A6处理的细胞中β-catenin较AdGFP组减少了20.2%(P<0.05),AdGFP组与空白组之间的差异无统计学意义;2)在S100A6抗体的沉淀物中,检测到β-catenin、GSK-3β和DVL,而无Axin检出;3)β-catenin、GSK-3β和DVL的抗体沉淀物中,均有S100A6检出,而Axin抗体的沉淀物中无S100A6检出。结论:S100A6能够上调人骨肉瘤细胞系143B中的β-catenin水平;并与β-catenin、GSK-3β和DVL之间存在直接相互作用;S100A6与这三个分子之间的直接相互作用可能抑制了β-catenin的降解,使之在胞浆内聚集,水平升高。这可能是S100A6上调β-catenin的部分机制。; 黎玉叶李星星孙双双邹正渝张昀源段亮叶立伟武睿杨霞何通川周兰; 关键词：蛋白质相互作用

外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制被引量：3: 2012年; 目的探讨外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法采用MTT、台盼蓝拒染、Hoechst、Western blot、免疫细胞化学、免疫荧光和荧光素酶活性分析法检测S100A6对B16细胞增殖、凋亡、β-catenin的水平和分布、β-catenin/TCF4转录活性及经典Wnt信号途径(即Wnt/β-catenin信号)的下游靶基因c-myc表达的影响。结果 GST-hS100A6可抑制B16细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性;GST-hS100A6作用72 h后,B16细胞的凋亡率较GST对照组增加1.43倍;携带S100A6基因的重组腺病毒AdS100A6作用72 h后,B16细胞中β-catenin的表达量较对照腺病毒AdGFP组增加43.9%;GST-hS100A6可使B16细胞中β-catenin的表达增加,且以胞核增加为主;GST-hS100A6作用后,B16细胞的β-catenin/TCF4转录活性增至GST对照组的7.4倍,且该信号途径的靶基因之一c-myc的表达也增加70.4%。上述结果与GST对照组之间的差异均有统计学意义(P均<0.05或0.01)。结论 S100A6具有抑制黑色素瘤增殖、促进凋亡和上调其Wnt/β-catenin信号途径活性的作用,且上调Wnt/β-catenin信号途径活性可能是S100A6对黑色素瘤抑制性作用的机制之一。; 陈英华孙双双卫佳李星星游莉邹正渝黎玉叶何通川周兰; 关键词：S100蛋白质类黑色素瘤细胞增殖

重组人S100A6促进人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移侵袭并抑制其凋亡被引量：8: 2011年; 该研究旨在探讨重组人S100A6蛋白对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。利用原核表达制备重组人S100A6蛋白(GST-hS100A6),SDS-PAGE显示其大小为36 kDa,Western blot显示其可以被S100A6抗体特异识别,BCA法测定1 L菌液共收获约16.7 mg蛋白;将其作用于人乳腺癌细胞MCF-7,MTT显示细胞培养48 h时,浓度为100μg/mL和300μg/mL的GST-hS100A6组的D_(492)值较GST组增加29.1%和84.6%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞增殖;平板克隆形成实验显示GST-hS100A6组的克隆形成率较GST组高38.7%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7的克隆形成;Hoechst染色显示GST-hS100A6组在24 h时细胞凋亡率较GST组减少67.8%(P<0.05),48 h时细胞凋亡率较GST组减少58.4%(P<0.05),提示S100A6抑制MCF-7细胞凋亡;划痕实验显示在24 h时GST-hS100A6组的划痕愈合率为GST组的2.2倍(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞迁移;Transwell显示GST-hS100A6组在24 h时穿膜细胞数较GST组增加88.1%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞侵袭。以上结果显示S100A6对人乳腺癌具有一定的促进作用,有可能成为乳腺癌分子诊断的标志物和治疗的新靶标。; 游莉徐兰兰郭元元孙双双邹正渝黎玉叶罗进勇何通川周兰; 关键词：S100A6 乳腺癌增殖凋亡迁移

hS100A6抑制卵巢癌细胞HO8910和HO8910 PM增殖、促进凋亡并上调其Wnt/β-catenin活性被引量：2: 2012年; 目的研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响。方法通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响。结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P<0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的凋亡(P<0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位。结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径。; 邹正渝陈英华孙双双黎玉叶叶立伟段亮武睿杨霞罗进勇周兰; 关键词：S100A6 卵巢癌

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