郭旭东
- 作品数：46 被引量：121H指数：6
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 内蒙古三种草原类型不同利用区域温室气体通量的研究
- 大气中温室气体(GHG)含量提升是全球变温的直接原因。土地利用变化导致的温室气体排放增加是大气中温室气体含量增加的重要途径之一。草地面积占全球陆地面积的五分之一，是全球碳循环的重要碳库，而不同的草地利用方式影响草地生态系...
- 郭旭东
- 关键词：典型草原草甸草原放牧行为温室气体
- 文献传递
- 应用RNAi干扰eGFP转基因小鼠胎儿成纤维细胞中FGF5基因的表达
- 2008年
- 在小鼠FGF5基因干扰的研究中,针对小鼠FGF5mRNA的第316～335bp区域、第499～518bp区域和第766～785bp区域分别设计了发夹式RNA干扰片段,并将干扰片段连接到带有H1启动子的红色荧光表达载体上,将载体以脂质体法转染到eGFP转基因小鼠胎儿成纤维细胞中,搜集转染后的细胞提取总RNA,并反转录成cDNA。用SYBRGREENⅠ荧光定量PCR方法对转染了不同干扰载体的细胞cDNA进行检测,结果干扰载体对eGFP转基因小鼠成纤维细胞中的FGF5表达有较强的抑制作用。
- 宝明涛郭旭东旭日干
- 关键词：RNAISHRNASYBRFGF5
- 利用体细胞核移植技术制作人胰岛素原转基因牛(英文)被引量：5
- 2007年
- 通过体细胞核移植技术制作了人胰岛素原转基因牛。在CMV启动子指导下以内部核糖体进入位点序列(IRES)连接的新霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因组成了双重标记基因的筛选系统,用于转基因细胞的富集以及细胞和植入前胚胎的筛选。转基因通过电穿孔的方法(900V/cm,5ms)转入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,基因转染细胞在添加G418 (800μg/mL)的培养基中培养10天以富集转基因细胞。选择表达绿色荧光蛋白的转基因细胞作为核供体进行体细胞核移植,重构胚经体外培养至囊胚阶段,选择表达绿色荧光蛋白的囊胚进行胚胎移植。为比较基因转染以及供体细胞所处周期对转基因细胞核移植胚胎发育的影响,用作核移植供体的转基因细胞或非转基因细胞先饥饿培养2—4天(0.5 %FBS) ,然后恢复培养(10%FBS) 10 h使细胞同步化于G1期,以正常培养的细胞作为对照进行核移植。结果表明,转基因细胞作为核供体得到的核移植胚胎的体外囊胚发育率低于以非转基因细胞为核供体的对照组(23.2% VS 35.2 %,P<0.05) ;转基因细胞周期同步化处理与否对其克隆胚囊胚发育率无显著影响(23.2% VS 18.9 %,P>0.05)。胚胎移植后2个月直肠检查发现7头受体牛(每头移植2—4枚胚胎)中有一头妊娠,并最终发育足月产下一头小牛。聚合酶链反应(PCR)检测和DNA测序分析表明其为转人胰岛素原基因的转基因克隆牛。
- 杨东山郭旭东海棠杜晨光王建国仓明刘东军李喜和旭日干
- 关键词：体细胞核移植人胰岛素原绿色荧光蛋白转基因牛
- 以体细胞核移植技术制备IGF1转基因白绒山羊的研究
- 究拟利用毛囊特异表达IGF1(Insulin like growth factor I)的真核表达载体pCDsR-KI转染绒山羊胎儿成纤维细胞(Caprine Fetal Fibroblast Cells, CFFCs)...
- 郭旭东朱兵仓明刘东军袁建龙王玮金永任宇温建勋肖红梁伟吴海青
- 关键词：体细胞核移植白绒山羊
- 小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及mESC脂质体悬浮转染条件的优化被引量：1
- 2011年
- 旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞(mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA(6.6 kb),经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC。从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为KGF基因且方向正确。采用脂质体法优化转染条件,mESC最高转染效率达到(34.4±4.1)%。经G418筛选的转基因ES细胞通过PCR鉴定证实外源基因已整合在ES细胞基因组中。成功获得了小鼠KGF基因片段,以及真核表达载体pCDsR-UKA,经优化的脂质体悬浮法转染条件,在六孔板中当DNA与脂质体比例为3∶10时,可获得最佳转染效率且不改变ES细胞的生长状态,经筛选获得了转基因ES细胞克隆。为下一步通过四倍体补偿技术获得ES小鼠提供了转基因ES细胞。
- 梁伟肖红高笑宇杜晓媛汪慧郭旭东刘东军
- 关键词：KGF胚胎干细胞毛囊红色荧光蛋白脂质体转染悬浮法
- 构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞被引量：1
- 2011年
- 旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。
- 王玮袁建龙金永朱兵岳群华梁浩郭旭东刘东军仓明
- 关键词：卵泡抑制素
- 共转染Krox20和IGFBP5基因绒山羊胎儿成纤维细胞克隆的筛选
- IGFBPS基因被认为是第一个区分不同毛囊类型的标记基因，它在毛囊中的表达可引起毛发的弯曲与细化。本研究旨在筛选得到IGFBPS和Krox20两个基因共转染的绒山羊胎儿成纤维细胞克隆，以探索IGFBPS与Krox20在绒...
- 梁燕王晓晶王彦凤王潇郭旭东王志钢刘东军
- 关键词：转基因克隆绒山羊胎儿成纤维细胞
- 文献传递
- 白绒山羊性控胚胎生产及移植应用研究初探被引量：8
- 2009年
- 应用X性控冷冻精液对超排供体白绒山羊进行人工授精,生产性控胚胎并进行鲜胚移植。结果发现,①用性控冻精和鲜精输精的供体母羊,平均卵子回收数分别为13.3和12.5枚,其中性控冻精组受精卵比例为29.6%(55/186),极显著低于鲜精组94.0%(281/299)的比例(P<0.01);②性控胚胎和普通胚胎移植受体母羊产羔率分别为42.2%和58.1%,二者差异极显著(P<0.01);③性控胚胎移植受体母羊所产羔羊雌性所占百分数为100%,极显著高于普通胚胎移植(P<0.01)。表明通过白绒山羊X、Y精子分离、人工授精生产性控胚胎,同时结合胚胎移植技术,可以达到按照生产实际中的意愿得到性别控制子代白绒山羊的目的。
- 王建国李喜和郭旭东钱松晋白春玲仓明杨东山于海泉梁浩旭日干
- 关键词：白绒山羊性别控制胚胎移植
- 利用CRISPR/Cas9系统构建FGF21基因敲除小鼠模型被引量：3
- 2018年
- 成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)是细胞间的多功能信号分子,调节生物体的多种生理功能。FGF21作为一种重要的调控因子,对毛囊发育及生长周期具有重要作用。为研究FGF21基因对毛囊发育及生长周期的影响及作用机制,本研究通过构建靶向敲除FGF21基因的载体,体外将Cas9 m RNA和g RNA显微注射到FVB小鼠受精卵中,在小鼠FGF21基因的第1外显子上造成移码突变,从而获得FGF21基因敲除(knock out,KO)小鼠。通过测序鉴定F0代小鼠基因型,共获得3只FGF21等位基因敲除小鼠(Fgf21^(-/-));q RT-PCR和Western blotting结果表明,在Fgf21^(-/-)小鼠中未检测到FGF21 m RNA表达和FGF21蛋白表达;经脱毛再生及皮肤组织H&E染色发现,与野生型(wild type,WT)小鼠相比,Fgf21^(-/-)小鼠体重降低、器官组织未出现异常变化、毛发生长速度减慢、毛囊的直径和毛发的密度均减小。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Fgf21^(-/-)小鼠模型,为后续研究FGF21基因在毛囊发育及生长周期中的功能提供了更好的动物模型。
- 刘旭张平张晓枫李兴白宇贾克荣郭晓东张豪马晓燕仓明刘东军郭旭东谷峰
- 关键词：毛囊
- 内蒙古白绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体的构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染被引量：4
- 2011年
- 【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV(6.3 kb)。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】在构建的表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因被正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,基因下游按顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因;外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中。【结论】成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过克隆技术获得转VEGF164基因绒山羊提供了条件。
- 鲍文蕾李彬侯鑫刘俊娥郭旭东王志钢刘东军
- 关键词：VEGF稳定转染
